通痹外敷散對大鼠弗氏完全佐劑性膝關(guān)節(jié)炎的實驗研究

鄒佩霞 李 莉 劉興林 陳德森

(1 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院兒科門診，十堰，442000； 2 湖北醫(yī)藥學(xué)院機能實驗室；十堰，442000)

實驗研究

通痹外敷散對大鼠弗氏完全佐劑性膝關(guān)節(jié)炎的實驗研究

鄒佩霞1李 莉2劉興林2陳德森2

(1 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院兒科門診，十堰，442000； 2 湖北醫(yī)藥學(xué)院機能實驗室；十堰，442000)

目的：觀察中藥通痹外敷散對弗氏完全佐劑性大鼠急性關(guān)節(jié)炎的影響，探討其作用機制。方法：大鼠隨機分為模型組及治療組，分別于右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注弗氏完全佐劑0.1 mL，術(shù)前及術(shù)后1周、2周、3周分別測定白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)、透明質(zhì)酸(HA)含量；測量右足趾關(guān)節(jié)以下部位的容積，計算各組治療效果。結(jié)果：治療2周后，治療組IL-1β明顯降低、HA含量明顯升高，與治療前及模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組足腫脹度及消腫時間明顯優(yōu)于模型組(P<0.05)。結(jié)論：通痹外敷散能有效治療弗氏完全佐劑性大鼠急性關(guān)節(jié)炎，其作用可能是通過抑制IL-1β合成、增加HA含量而起到治療作用。

通痹外敷散；膝關(guān)節(jié)炎；細(xì)胞介素-1β亞型；透明質(zhì)酸

膝關(guān)節(jié)炎伴關(guān)節(jié)積液是多發(fā)于中年以后的慢性、退行性關(guān)節(jié)疾病，由多種疾病或原因引起，臨床以膝關(guān)節(jié)疼痛、變形和活動受限為特點[1]。其病因主要為軟骨的破壞與變性，是軟骨分解與合成代謝失衡的結(jié)果[2]，目前尚無理想的治療辦法。本實驗采取自擬中藥通痹散外敷治療弗氏完全佐劑性大鼠急性關(guān)節(jié)炎，旨在挖掘中醫(yī)藥治療關(guān)節(jié)炎優(yōu)勢，探討其作用機制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 Wistar大鼠24只(由湖北省實驗動物研究中心提供)，雌雄兼用，體重(250±50)g，采用隨機數(shù)字表隨機分為模型組、治療組、對照組，每組各8只。

1.2 藥品與試劑 生理鹽水、弗氏完全佐劑(上海實生細(xì)胞生物技術(shù)有限公司)；自擬通痹外敷散藥物組成(藥材由太和醫(yī)院中藥房提供)：三七粉50 g、生草烏100 g、洋金花50 g、生川烏100 g、、三棱50 g、馬錢子100 g、大黃60 g、白胡椒50 g、沒藥100 g、乳香100 g、土鱉蟲60 g、山柰60 g、松香50 g、樟腦60 g，將上述藥物加工成極細(xì)的粉末用凡士林調(diào)成糊狀備用。

1.3 急性關(guān)節(jié)炎模型制備 碘伏浸泡大鼠右足趾消毒，模型組及治療組大鼠于右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射弗氏完全佐劑(CFAO)0.1 mL，對照組注射等量生理鹽水，每日強迫動物活動30 min，14 d后模型組及治療組即得到穩(wěn)定的膝骨關(guān)節(jié)炎模型[3]，術(shù)后14 d后開始治療，治療組大鼠于右足趾通痹外敷散包裹1 d換藥1次，模型組換生理鹽水，于術(shù)前及術(shù)后14 d開始測量1周、2周、3周各組大鼠右足趾關(guān)節(jié)以下部位的容積，計算各組動物腫脹百分率；測定右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)積液白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)、透明質(zhì)酸(HA)含量[4]。

1.4 足腫脹度的測定 3組動物均于實驗當(dāng)天測量右足趾關(guān)節(jié)以下部位的容積，連續(xù)3次，取平均值為右足容積，計算各組動物足腫脹度。前后容積之差值為腫脹程度，計算足腫百公率：足腫脹度(%)=(造模后容積-造模前容積)/造模前容積×100%，記錄各組動物消腫時間。

1.5 IL-1β及HA檢測方法 參照文獻采用酶標(biāo)雙抗體夾心ELISA法標(biāo)記所收集關(guān)節(jié)液中的IL-1β計算IL-1β含量[5]。用透明質(zhì)酸放免試劑盒進行序列加樣，按試劑盒說明嚴(yán)格操作，加樣完畢，離心后取沉渣，放射免疫γ射線計數(shù)分析關(guān)節(jié)液標(biāo)本HA含量。

1.6 動物存活情況觀察 觀察動物是否存活，有無動物死亡，動物的一般情況(包括自潔情況、攝食、飲水量等)。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況的變化 術(shù)后14 d，對照組大鼠體毛有光澤，反應(yīng)敏捷，飲食正常，無死亡。模型組大鼠體毛無光澤、豎毛、反應(yīng)遲鈍、蜷縮少動、大鼠體重減輕明顯，死亡1例。治療組在第2周后顯著改善以上癥狀，但與對照組大鼠比較稍差，35%鼠體毛無光澤，反應(yīng)一般，飲食正常，無死亡。

2.2 治療前后骨關(guān)節(jié)炎白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)、透明質(zhì)酸(HA)含量 治療組IL-1B含量在治療2周后開始降低，與治療前及模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，治療組透明質(zhì)酸(HA)含量在治療2周后開始明顯升高，與治療前及模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明通痹外敷散能有效降低白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)，升高透明質(zhì)酸(HA)的作用。(見表1、表2)

表1 治療前后IL-1β(μg/min)含量比較

注：與治療前比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05。

2.3 治療前后各組動物足腫脹度(%)對比情況 治療組在通痹外敷散治療后1周開始消腫，3周后已接近正常，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明通痹外敷散治療效果顯著。(見表3)

表2 治療前后HA(mg/L)含量比較

注：與治療前比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05。

表3 各組動物足腫脹度(%)對比

注：與治療前比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05。

3 討論

膝關(guān)節(jié)炎的病理變化主要為軟骨的破壞與變性，以及繼發(fā)的滑膜與滑液炎癥性改變，是軟骨分解與合成代謝失衡的結(jié)果[7]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，膝關(guān)節(jié)受損后，局部氣滯血瘀，濕濁痹阻于膝關(guān)節(jié)，治則當(dāng)利濕除痹、舒筋通絡(luò)、活血化瘀、行氣止痛[8-10]。方中生草烏、生川烏散寒祛濕，祛風(fēng)止痹；沒藥、乳香為骨傷科要藥，乳香調(diào)氣活血，沒藥活血祛瘀，但乳香偏于行氣、伸筋，而沒藥善于散血化瘀，兩者合用能增強行氣活血止痛之功。土鱉蟲破血逐瘀，續(xù)筋接骨；樟腦、山柰、胡椒、松香辛香走竄、行氣止痛；三棱、三七散瘀止血；馬錢子、洋金花通絡(luò)散結(jié)、消腫定痛；大黃攻積導(dǎo)滯、通經(jīng)行瘀；諸藥合用共起通痹止痛、散瘀消腫、化濕行氣之功效。通過藥物外敷，在局部保持一定的濃度，能促進局部組織新陳代謝而達“通則不痛”的功效，并且藥物置于體表患部，藥力直達病所，起效迅速，痛苦較少，不良反應(yīng)降低，安全可靠。

本研究結(jié)果表明通痹外敷散治療膝關(guān)節(jié)炎能有效降低白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)，升高透明質(zhì)酸(HA)的作用。機制可能為：通過抑制IL-lβ產(chǎn)生，減輕關(guān)節(jié)軟骨和滑膜的炎性反應(yīng)，減輕軟骨細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)和功能的破壞、基質(zhì)的降解，減輕骨的吸收以及關(guān)節(jié)軟骨周圍骨贅的形成，從而減輕關(guān)節(jié)疼痛的臨床癥狀以及關(guān)節(jié)軟骨的破壞，改善關(guān)節(jié)功能[11-12]。正常的關(guān)節(jié)滑液中僅含有微量的IL-1β，但在骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)關(guān)節(jié)液中IL-1β的含量則異常增高。IL-1β作為重要的炎性遞質(zhì)具有細(xì)胞破壞能力，其在退行性骨關(guān)節(jié)病中發(fā)揮著重要作用。HA是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺二糖單位有規(guī)律重復(fù)構(gòu)成的大分子鏈狀多糖，化學(xué)本質(zhì)為糖胺多糖，廣泛分布于人及動物的結(jié)締組織、眼玻璃體、軟骨和滑液中，是關(guān)節(jié)滑液和軟骨基質(zhì)的重要組成部分。HA可減少OA關(guān)節(jié)內(nèi)炎性遞質(zhì)的擴散，減少滑膜的通透性及關(guān)節(jié)內(nèi)滲液。我們認(rèn)為滑液中HA含量升高是由于中藥進入機體吸收以后，促使滑膜內(nèi)襯B型滑膜細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞產(chǎn)生分泌HA，從而起到潤滑關(guān)節(jié)、保護關(guān)節(jié)軟骨、延緩軟骨退變的作用。這是一種“內(nèi)源性”HA，相對于外源性的HA關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，其作用時間更為長久[13]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病屬“骨痹”范疇，人至中老年或大病后，精氣虧耗，腠理疏松，骨節(jié)失密，風(fēng)寒濕邪入侵而致氣滯血瘀寒凝，經(jīng)絡(luò)不通，精血不能榮筋主骨，痹阻骨節(jié)筋脈而發(fā)為骨痹，中藥外敷可祛風(fēng)除濕散寒[14]，活血化瘀通絡(luò)，消腫止痛，清除關(guān)節(jié)內(nèi)炎性因子，改善關(guān)節(jié)腔內(nèi)環(huán)境從而達到治療目的。

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(2013-11-02收稿 責(zé)任編輯：曹柏)

Laboratory Research of Tongbi Application Powder for Treating Freund's Adjuvant Knee Arthritis in Rats

Zou Peixia1，Li Li2，Liu Xinglin2，Chen Desen2

(1AffiliatedTaiheHospitalofHubeiUniversityofMedicine,Shiyan442000，China;2HubeiUniversityofMedicine,Shiyan442000，China)

Objective:To observe effect of Tongbi Application Powder on Freund's adjuvant knee arthritis in rats and its mechanism. Methods:Rats were randomly divided into model group and treatment group, sc. injected Freund's adjuvant 0.1ml into right knee, then measured interleukin -1 beta (IL-1 β), hyaluronic acid (HA) before surgery,1wk, 2wk, 3wk after surgery; measured volume below the right toe. Results:After wk2, treatment group had lower IL-1 beta and higher HA levels, significantly different compared with that before treatment and model group (P<0.05). The treatment group's extent of foot swelling and duration was significantly better than that of model group, (P<0.05). Conclusion:Tongbi Application Powder is effective for treating Freund's adjuvant arthritis in rats, the effect may be induced by inhibiting IL-1 β synthesis and increasing HA level.

Tongbi external powder; Knee arthritis; Interleukin -1 subtype; Hyaluronic acid

鄒佩霞(1962—)，女，漢族，中專，研究方向：從事臨床護理及臨床中醫(yī)藥研究

陳德森(1970.6—)，男，副教授，學(xué)士，研究方向：從事中醫(yī)藥藥理學(xué)及臨床藥理學(xué)研究，E-mail：cdscds1226@126.com

R332；R274

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.01.019