大頭艾納香總黃酮含量測定及鑒別

劉艷華，胡 亞，伍愛榮

（湖南環(huán)境生物職業(yè)技術學院，湖南 衡陽421001）

大頭艾納香總黃酮含量測定及鑒別

劉艷華，胡 亞，伍愛榮

（湖南環(huán)境生物職業(yè)技術學院，湖南 衡陽421001）

目的：探討大頭艾納香提取物中總黃酮含量。方法：采用超聲波從大頭艾納香中提取總黃酮類物質(zhì)，對提取的黃酮類物質(zhì)用分光光度法測定含量。結果：大頭艾納香中總黃酮含量平均值為3.1312%，加標回收率101.2%～96.76%之間，平均加標回收率達98.59%，精密度高（RSD=1.65%，n=5）。結論：該法操作簡便、快速、數(shù)據(jù)可靠、精密度高，可用于大頭艾納香提取物中總黃酮含量的測定。

超聲波提?。淮箢^艾納香； 總黃酮

1 儀器與試劑

1.1 儀器

KQ5200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；101-2型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海南陽儀器有限公司）；T6新世紀紫外可見分光光度計（2004（C）北京普析通用儀器有限責任公司）； WFH-203三用紫外分析儀（上海精科實業(yè)有限公司）；SHB-IV循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；800型臺式離心機（上海浦東物理光學儀器廠）；電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 試劑

甲醇AR；乙醇AR；石油醚AR；橙皮苷標準品（中國藥品生物制品檢定所）；新鮮大頭艾納香植株采自廣西桂林臨桂縣。

2 定性實驗—總黃酮的鑒別

2.1 顏色反應

紫外光下成色反應：取本樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈現(xiàn)灰黃色，紫外光下呈現(xiàn)灰褐色并且有熒光斑點。

濃氨水反應：取本樣品溶液點在濾紙上，并將濾紙在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下觀察，呈現(xiàn)極明顯黃褐色熒光斑點。

三氯化鋁反應：取本樣品溶液點在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈現(xiàn)灰黃色，紫外光下呈現(xiàn)黃色熒光斑點。

乙酸鎂反應：取本樣品溶液點在濾紙上，滴加1%濃度的乙酸鎂甲醇溶液，吹干，在紫外光下呈黃色斑點。

本次論壇是在商務部貿(mào)易救濟調(diào)查局指導下，由上海市商務委員會與上海社會科學院共同主辦。上海市政協(xié)副主席周漢民到會并作主旨演講；世貿(mào)組織副總干事易小準發(fā)表視頻講話，商務部貿(mào)易救濟調(diào)查局局長余本林、上海市商務委副主任申衛(wèi)華到會致辭。來自國內(nèi)外的專家學者，行業(yè)組織、研究機構、企業(yè)以及長三角政府部門的代表近300人參加。

鹽酸-鎂粉反應：滴乙醇提取液1ml于試管中，加入鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（一 次加入），有泡沫處呈紫紅色。

2.2 紙層析

取本樣品溶液10μl點在濾紙上。用正丁醇∶水∶醋酸=4∶5∶1作為展開劑，上行展開5h，然后取出晾干。噴灑1%的氯化鋁乙醇溶液。吹干后放于紫外光下，可以見到有熒光斑點。

3 用紫外分光度法進行測定大頭艾納香中總黃酮含量

3.1 制備樣品溶液

將大頭艾納香枝葉粉碎并過40目篩，用1：10的石油醚進行回流脫脂兩次，每次時間為2h，抽濾洗滌，再放入40℃的鼓風烘箱中干燥1h左右。稱取1.0g已脫脂的大頭艾納香粉末，準確加入25mL甲醇，密塞，搖勻，稱定質(zhì)量。用超聲波提取30min，取出放冷卻，再稱定其質(zhì)量，用甲醇補足其減失的質(zhì)量，搖勻，并離心分離，然后取上清液5mL，用甲醇定容至50mL，得樣品液［1］。

3.2 對照品溶液的制備

準確稱取橙皮苷標準品0.0050g，加甲醇溶解并將其定容至50mL，可得濃度為0.10mg/mL的蘆丁標準溶液。

3.3 測定波長

分別取l.0mL樣品溶液和l.0mL對照品溶液液于10mL容量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，在200～500nm進行掃描，發(fā)現(xiàn)均在280nm附近有最大吸收峰，實驗中選擇測定波長280nm。

3.4 繪制標準曲線

分別準確精密吸取橙皮苷對照液（0.10mg/mL）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mL于10.00mL容量瓶中，加甲醇定容，于280nm處測吸光度。吸光度測定結果分別為：0.00，0.127，0.246，0.370，0.564，0.764，0.925，根據(jù)以上數(shù)據(jù)得回歸方程：A=2.72×10-2+18.102C，r=0.9979［2］。

3.5 精密度的測定

精密吸取0.1mg/mL橙皮苷對照品1.5mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至10mL刻度，在280nm處測定吸光度，平行制備5份，每份測定3次，RSD=0.26%，1-5號對照品號，吸光度分別為0.316，0.317，0.317，0.318，0.319，平均值為0.3172，表明儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性的測定

分別取對照品溶液和樣品溶液1.0mL于10mL容量瓶中并加甲醇稀釋至刻度，室溫放置分別0，2，4，6，8，10，12，24h后，測定其吸光度（n=3），計算對照品及樣品溶液總黃酮含量，對照品含量（%）分別為1.013，1.002，1.022，1.003，1.031，0.998，0.977，1.032，平均值為1.00975，樣品溶液含量（%）分別為3.252，3.146，3.166，3.264，3.316，3.213，3.125，3.137，平均值為3.2024，對照品及樣品溶液的RSD分別為1.84%，2.18%見表3，表明對照品及供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復性及含量的測定

取樣品溶液1.0mL于10mL容量瓶中并加甲醇稀釋至10mL刻度，平行制備5份于280nm處測定吸光度，樣品1-5號，以標準曲線計算得到總黃酮的含量（%）分別為3.065，3.126，3.081，3.142，3.154，大頭艾納香中總黃酮含量平均值為3.1312%，RSD為1.2457%，表明重復性較好。

3.8 加標回收實驗

分別精密量取已知總黃酮含量的提取溶液6份，每份中加入一定量的橙皮苷標準品，按上述操作方法測得吸光度，得出總黃酮含量，計算出加標回收率。樣品1-6號，樣品中總黃酮含量62.624（μg），加標量（μg）分別為100，100，100，50，50，50，實測值（μg）分別為160.434，162.274，163.824，111.004，111.959，111.359，回收率（%）分別為97.81%，99.65%，101.2%，96.76%，98.67%，97.47%，實驗結果表明大頭艾納香中總黃酮含量平均值為3.1312%，加標回收率101.2%-96.76%之間，平均值98.59%，精密度高（RSD=1.65%）。

4 討論

結果表明大頭艾納香中總黃酮含量平均值為3.1312%，加標回收率101.2%～96.76%之間，平均加標回收率達98.59%，精密度高（RSD=1.65%，n=5）。方法操作簡便、實用、快速、數(shù)據(jù)可靠、精密度高，結果表明，大頭艾納香中含有較為豐富的黃酮，具有開發(fā)和利用價值。

［1］楊榮平，壽清耀，王賓豪等.紫外分光光度法測定復方補骨質(zhì)緩釋片中補骨脂總黃酮的含量［J］.中國藥房，2007（9）：673-674.

［2］姜國芳，謝宗波，樂長高.銀杏葉黃酮類化合物的研究進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2004（5）：306.

Determination of flavonoids content and identify bulk einar ointment

LIU Yan-hua，HU Ya，WU Ai-rong
（Institute of Hunan environmental biological technology，Hengyang Hunan 421001）

Objective： explore the content of total flavonoids in the extract of Blumea megacephala. Methods：Using ultrasonic extraction method of total flavonoids extraction from Blumea megacephala，on the extraction of flavonoids content was determined by spectrophotometry.Results：show that total flavonoids content in Blumea megacephala average value is 3.1312%，the recovery rate of 101.2%-96.76%，the average recovery was 98.59%，high precision（RSD=1.65%，n=5）.Conclusion：The method is simple，rapid，reliable data，high precision，and can be used for determination of total flavonoids in Blumea megacephala extract.

Ultrasonic wave treatment；Blumea megacephala Chang et Tseng；Totalflavanone

G512.74

A

10.3969/j.issn.1672-7304.2015.04.046

1672-7304（2015）04-0096-02

衡陽市科技局基礎研究計劃項目：NO：2012KJ36（衡科發(fā)［2012］75號）；湖南省教育廳高?？蒲许椖浚篘O：12C1059（湘教通［2012］596號）。

（責任編輯：廖建勇）

劉艷華（1970-），女，湖南衡陽人，副教授，研究方向：生物學教學、天然產(chǎn)物。