牛胚胎移植的實踐操作

趙家平，韓秀軍

(1.黑龍江省克東縣昌盛鄉(xiāng)畜牧站164800; 2.黑龍江省克東縣畜牧獸醫(yī)局164800)

將良種母牛的早期胚胎取出，或者是通過體外受精及其他方式獲得的胚胎，移植到另外一頭或數(shù)頭生理狀態(tài)相同的母牛體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成新個體，就叫做胚胎移植［1］。

1 受體牛的選擇標準

預(yù)先做好計劃對于取得滿意結(jié)果是很必要的。青年牛受體應(yīng)該滿足以下標準: 至少15月齡; 體重至少370 kg(青年奶牛) 或400 kg(青年肉牛) ;體型應(yīng)該和所移植的胚胎品種相適應(yīng)，從而可以自然妊娠和分娩; 體況評分2 ～2.5 分(5 分制) ; 呈現(xiàn)有規(guī)則的發(fā)情周期［2］。經(jīng)產(chǎn)牛選擇標準: 分娩不能多于4 次; 有良好的繁殖歷史; 至少距上次分娩6 周; 自上次分娩后已恢復有規(guī)律的發(fā)情周期;體重處于維持或增長的階段; 體況評分2.5 ～3;體型應(yīng)該和所移植的胚胎品種相適應(yīng)，從而可以自然地妊娠和分娩。

2 營養(yǎng)和管理

在移植前對受體牛加強營養(yǎng)6 ～8 周，而移植后仍需至少加強營養(yǎng)6 周，移植前后加強營養(yǎng)是很重要的。這個時間特別與舍飼及放牧時間相關(guān)，舍飼和放牧的轉(zhuǎn)換最好都不要在胚胎移植過程中進行，而應(yīng)當在移植前的2 個月或移植后至少6 周進行。需要對日料中的熱量和蛋白質(zhì)進行檢測，以確認兩者的比例達平衡要求，還應(yīng)提供足夠的粗飼料。對于供體，飼料中供給適量礦物質(zhì)是很重要的。如果有可能發(fā)生鉬中毒，則應(yīng)該添加適量的保護銅(比如瘤胃藥丸) 。采購受體，混群和日常處理，比如驅(qū)蟲、投藥、防疫、打號和修蹄，都應(yīng)該至少在移植前6 ～8 周處理完畢，以減少應(yīng)激。

3 疾病控制

一些感染病原可以嚴重地影響胚胎移植工程的成功。主要病原包括: 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV) 、鉤端螺旋體病和牛傳染性鼻支氣管炎(IBR) 。3 種病原都可以通過免疫預(yù)防，但是存在于IBR 活苗中的病毒是有危險的，因為它可能危及出口胚胎移植后代的命運或進入到精液采集中心。如果已知一個牧場存在BVDV 感染的問題，則在注射疫苗前需要對受體進行普查，以便確認和除去隱性感染牛。當一個農(nóng)場已知存在鉤端螺旋體病時，則需要在第一次注射疫苗時，對畜群用25 mg/kg雙氫鏈霉素進行治療，以便減少此種菌的感染攜帶危險。因為對犬新孢子蟲的流行病學了解得比較清楚，但還應(yīng)謹慎地普查有可能感染此種病原的受體，特別是如果這種原生生物從受體垂直傳染給胎兒，將影響胚胎移植后代的生殖能力。

4 同步發(fā)情

為了達到成功妊娠的目的，受體需要在移植的前1 周準確一致地進入發(fā)情期。因此，要求準確一致的同步期。放置陰道內(nèi)黃體酮緩釋裝置或者采取黃體酮植入和注射前列腺素相結(jié)合的辦法，都是比較好的方法。緩釋裝置可以放置9 d、10 d 或11 d，前列腺素則在取出前的24 h、48 h 或72 h 注射。這樣，發(fā)情就可以達到準確一致的同步，并在裝置取出后的28 ～56 h 達到高峰。筆者認為，2 次注射前列腺素的辦法不能使受體最大限度達到足夠的同步發(fā)情。管理者應(yīng)該在移植的前一周，注意受體的發(fā)情狀況。1 d 內(nèi)至少觀察3 次，每次最少持續(xù)20 min。在同步發(fā)情裝置取出后的3 d 內(nèi)，都應(yīng)該進行觀察。

5 胚胎移植

在檢查到黃體出現(xiàn)，并記錄哪一側(cè)卵巢正在排卵后，就應(yīng)該對受體進行胚胎移植的準備。清潔硬膜外和會陰部位非常重要，可用蘸有醫(yī)用酒精的棉簽進行。當穿過子宮頸后，移植槍應(yīng)進入有黃體產(chǎn)生的同側(cè)子宮角。將胚胎放置在子宮角內(nèi)韌帶(ICL) 的附近固然可以妊娠，但是如果放置于子宮角的深處則會提高成功率。理論上應(yīng)該放置到ICL后10 cm 或更深些的位置。操作應(yīng)該盡量輕柔，避免損傷子宮內(nèi)膜。有時較肥胖牛的子宮大而下垂，此時寧肯將胚胎放置到不理想的位置，也不能對子宮過度操作，以免造成子宮內(nèi)膜炎癥或者物理性損傷。

6 激素添加

主要有3 種外源性激素添加使用有助于妊娠。

第1 種是外源性的黃體酮或孕激素類。黃體酮注射劑可以提高非同步受體的受孕率。然而，在移植7 ～19 d 時，應(yīng)用黃體酮的陰道內(nèi)緩釋裝置，在原位置對妊娠率沒有造成影響，而在移植的7 ～21 d，應(yīng)用兩個此類裝置(雙倍劑量) 時，則對胚胎發(fā)育有直接的損害作用。在移植的第7 天應(yīng)用其他外源性的黃體酮類藥物(甲基炔諾酮) 處理，則可以提高受孕率(對照組受孕率為57.3%和處理組為67.8%) 。應(yīng)用甲基炔諾酮對非周期性牛進行處理可以促使其妊娠。然而在周期性牛妊娠38 d 中處理，受試組和對照組沒有明顯差異。現(xiàn)在已經(jīng)觀察到，應(yīng)用過多的外源性黃體酮可以抑制LH 的分泌，造成黃體物質(zhì)減少。這樣促黃體素受到抑制從而減少了內(nèi)源性黃體的生成，當緩釋裝置移出時，造成了受體不能產(chǎn)生足夠的黃體酮繼續(xù)維持妊娠。

第2 種激素添加劑是在不同時間給予不同期間段的人絨毛膜促性腺激素(hCG) 。國外學者曾經(jīng)在母牛妊娠的第13 ～35 天多次注射，而其他的應(yīng)用是在胚胎移植的當天，妊娠的第14 天或15 天注射1 次。所有的處理組與對照組相比，處理組的受孕率沒有明顯的提高。

第3 種應(yīng)用方法是在妊娠的第11 天和13 天應(yīng)用GnRH 類似物，這種方法明顯地提高了妊娠率。

［1］昝林森.牛生產(chǎn)學［M］.北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社，2011: 155.

［2］韓博，蘇敬良，吳培副，等.牛病學——疾病與管理［M］.北京: 中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2006: 58-87.