射干化學(xué)成分研究

張 杰 ，曾 鋮，常義生，顧大全，李 佑 ，顧正兵

(江蘇永健醫(yī)藥科技有限公司，江蘇泰州 225300)

射干為鳶尾科植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根莖，具有清熱解毒、消痰、利咽的功效，用于咽喉腫痛、痰涎壅盛、咳嗽氣喘，為常用中藥材［1］。射干藥材中主要有效成分為異黃酮類(lèi)成分，現(xiàn)代研究表明，此類(lèi)成分具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、清除自由基及抗癌等重要的藥理與藥效作用［2－6］。基于其顯著的藥理活性，因此對(duì)射干異黃酮類(lèi)活性成分探究具有重要的研究?jī)r(jià)值。該試驗(yàn)采用硅膠柱層析和Sephadex LH－20柱層析等多種方法對(duì)射干中化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，并根據(jù)波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，為射干藥材的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象。射干來(lái)源于泰州市高港中藥飲片有限公司，產(chǎn)地為湖北，經(jīng)嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院王峻副教授鑒定為Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根莖。

1.1.2 主要儀器。核磁共振儀(Varian INOVA－400型，TMS為內(nèi)標(biāo))，Seph-adex LH-20(美國(guó) GE公司)，Waters 1525分析型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)。

1.1.3 主要試劑。薄層色譜及柱色譜用硅膠(青島遠(yuǎn)洋化工有限公司);液相用甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法 取射干藥材10 kg粉碎后，過(guò)3號(hào)篩，用甲醇回流提取3次(每次10倍量，提取2 h)。合并提取液并減壓濃縮得到甲醇提取物，將甲醇提取物分散于水中成懸濁液，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮得到乙酸乙酯部分(765.3 g)和正丁醇部分(543.6 g)。乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠柱色譜粗分，用石油醚－乙酸乙酯(1∶0～0∶1)梯度洗脫，用石油醚－乙酸乙酯(2∶1)薄層檢測(cè)，得到9 個(gè)流分(Fr.1 ～Fr.9)。其中將Fr.7～9再反復(fù)經(jīng)Sephadex LH-20柱層析以及重結(jié)晶分離純化得到化合物1～6。取正丁醇部分經(jīng)硅膠柱色譜粗分，用乙酸乙酯洗脫，乙酸乙酯－甲醇－水(25∶5∶1)薄層檢測(cè)，得到6個(gè)流分，各部分再反復(fù)經(jīng)SephadexLH-20柱層析得到化合物7～11。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物1 白色針晶，分離得到107.2 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為13.04(1H，s，OH －5)、8.29(1H，s，H －2')、7.37(2H，d，J=8 Hz，H －2'，6')、6.82(2H，d，J=8Hz，H －3'，5')、6.47(1H，s，H － 8)、3.75(3H，s，O － CH3－6);13C －NMR(100 MHz，DMSO －d6)，δ分別為180.5(C －4)、158.1(C －5)、131.6(C －6)、154.0(C －7)、94.0(C －8)、153.2(C －9)、104.7(C －10)、121.8(C － 1')、130.2(C －2'，6')、115.1(C －3'，5')、157.4(C － 4')、60.0(OCH3－6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］一致，故鑒定化合物1為鳶尾苷元(tectorigenin)。

2.2 化合物2 白色針晶，分離得到62.7 mm。1H－NMR(400 MHz，DMSO － d6)，δ 分別為 13.06(1H，s，OH － 5)、10.75(1H，s，OH －7)、9.14(1H，s，OH －3')、8.34(1H，s，H －2)、6.49(1H，s，H － 8)、6.83(1H，d，J=8Hz，H － 5')、6.94(1H，dd，J=8Hz，1.6Hz，H － 6')、6.99(1H，d，J=1.6Hz，H －2')、3.80(3H，s，OCH3－6)、3.75(3H，s，OC － H3－4');13C －NMR(100 MHz，DMSO － d6)，δ 分別為 152.7(C －2)、121.9(C －3)、180.6(C －4)、157.5(C －5)、131.4(C －6)、154.3(C－7)、93.9(C －8)、153.3(C －9)、104.9(C －10)、121.7(C －1')、113.3(C －2')、146.7(C －3')、147.3(C －4')、115.3(C －5')、121.6(C －6')、60.0(OCH3－6)、55.7(OCH3－4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］一致，故鑒定化合物2為鳶尾甲黃素A(tectorigenin A)。

2.3 化合物3 淡黃色針晶，分離得到413.6 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO － d6)，δ 分別為 13.03(1H，s，OH － 5)、10.77(1H，s，OH －7)、9.24(1H，s，OH －3')、8.37(1H，s，H －2)、6.50(1H，s，H － 8)、6.71(1H，d，J=2Hz，H － 2')、6.66(1H，d，J=2Hz，H － 6')、3.70(3H，s，H － 2)、3.75(3H，s，OCH3－4')、3.79(3H，s，OCH3－5')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］一致，故鑒定化合物3為野鳶尾黃素(irigenin)。

2.4 化合物4 淡黃色針晶，分離得到260.1 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO － d6)，δ 分別為 13.06(1H，s，OH － 5)、10.75(1H，s，OH －7)、8.32(1H，s，H －2)、6.49(1H，s，H －8)、7.14(1H，d，J=2Hz，H －2')、6.83(1H，d，J=8Hz，H －5')、6.98(1H，dd，J=8Hz，H － 6')、9.05(1H，s，OH － 4')、3.79(3H，s，OCH3－6)、3.75(3H，s，OCH3－3');13C － NMR(100 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為154.3(C －2)、121.7(C －3)、180.5(C － 4)、153.3(C － 5)、131.4(C － 6)、157.5(C －7)、93.9(C － 8)、152.7(C － 9)、104.9(C － 10)、121.8(C －1')、112.0(C －2')、147.7(C －3')、146.1(C －4')、116.4(C －5')、121.6(C －6')、55.7(OCH3－6)、59.9(OCH3－3')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］一致，故鑒定化合物4為鳶尾甲黃素B(iristectorigenin B)。

2.5 化合物5 白色針晶，分離得到302.4 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO － d6)，δ 分別為 8.29(1H，s，H － 2)、7.00(1H，s，H －8)、6.18(2H，s，OCH2O)、6.83(2H，s，H －2'，6')、3.80(6H，s，OCH3－ 2'，6')、3.69(3H，s，OCH3－ 4')、3.91(3H，s，OCH3－5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］一致，故鑒定化合物5為次野鳶尾黃素(irisflorentin)。

2.6 化合物6 淡黃色針晶，分離得到124.3 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為12.89(1H，s，OH －5)、9.26(1H，s，OH － 3')、8.47(1H，s，H － 2)、6.68(1H，s，H － 8)、6.73(1H，s，H － 2')、6.87(1H，s，H － 6')、6.18(2H，s，OCH2O)、3.79(3H，s，OCH3－ 4')、3.70(3H，s，OCH3－ 5')。13C －NMR(100 MHz，DMSO －d6)，δ分別為 155.2(C －2)、122.1(C －3)、180.6(C －4)、154.0(C －5)、129.7(C －6)、141.4(C －7)、89.6(C －8)、150.3(C － 9)、107.4(C －10)、125.8(C －1')、110.4(C －2')、150.3(C －3')、136.5(C －4')、153.0(C －5')、104.6(C －6')、103.0(OCH2O)、60.0(OCH3－4')、55.8(OCH3－5')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］一致，故鑒定化合物6為白射干素(dichotomitin)。

2.7 化合物7 淡灰黃色針晶，分離得到62.4 mg。1HNMR(400 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為13.75(1H，s，OH －1)、10.58(3H，brs，OH －3，6，7)、7.33(1H，s，H －8)、6.80(1H，s，H －5)、6.36(1H，s，H －4)、4.57(1H d，J=7.6Hz，H －1');13C －NMR(100 MHz，DMSO －d6)，δ分別為 179.1(C －9)、164.0(C －3)、161.9(C －1)、156.4(C －4a)、155.3(C －6)、151.2(C －10a)、144.3(C －7)、111.3(C － 8a)、107.8(C －8)、107.6(C － 2)、102.6(C － 5)、101.4(C － 9a)、93.5(C －4)、81.6(C －5')、79.1(C －1')、73.3(C －2')、70.8(C －3')、70.4(C －54')、61.6(C －6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］一致，故鑒定化合物7為芒果苷(mangiferin)。

2.8 化合物8 黃色粉末，分離得到114.8 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為12.94(1H，s，OH －5)、9.16(1H，s，OH － 3')、8.46(1H，s，H － 2)、6.89(1H，s，H － 8)、7.16(1H，s，H － 2')、6.84(1H，d，J=7.6Hz，H － 5')、7.01(1H，d，J=7.6Hz，H －6')、3.80(3H，s，OCH3－6)、3.77(3H，s，OCH3－4')、5.09(1H，d，J=7.2Hz，Glc － 1)、3.19 ～ 4.62(葡萄糖上氫質(zhì)子信號(hào));13C －NMR(100 MHz，DMSO －d6)，δ分別為152.4(C －2)、122.1(C －3)、180.7(C －4)、154.9(C－5)、132.5(C －6)、156.6(C －7)、94.0(C －8)、152.9(C －9)、106.4(C －10)、121.7(C －1')、113.3(C －2')、146.8(C －3')、147.3(C － 4')、115.3(C － 5')、121.5(C － 6')、55.7(OCH3－4')、60.3(OCH3－ 6)、100.1(C － 1'')、73.1(C －2'')、76.7(C －3'')、69.6(C －4'')、77.3(C －5'')、60.6(C－6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］一致，鑒定化合物8為鳶尾甲苷A(iristectoridin A)。

2.9 化合物9 白色結(jié)晶，分離得到214.8 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為12.93(1H，s，OH －5)、9.59(1H，s，OH － 4')、8.44(1H，s，H － 2)、6.89(1H，s，H － 8)、7.40(2H，d，J=8Hz，H －3'，5')、6.83(2H，d，J=8Hz，H －2'，6')、3.77(3H，s，OCH3－ 6)、5.07(1H，d，J=8Hz，Glc － 1)、3.18～3.48(葡萄糖上氫質(zhì)子信號(hào))。結(jié)合化合物1以及文獻(xiàn)［14］數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，鑒定化合物9為鳶尾苷(tectoridin)。

2.10 化合物10 白色粉末，分離得到132.5 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為12.93(1H，s，OH －5)、9.06(1H，s，OH － 3')、8.43(1H，s，H － 2)、6.88(1H，s，H － 8)、6.82(1H，d，J=8.0Hz，H －2')、7.01(1H，dd，J=1.8，8.0Hz，H －6')、7.15(1H，d，J=1.8Hz，H －5')、3.79(3H，s，OCH3－6)、3.77(3H，s，OCH3－ 3')、5.09(1H，d，J=7.2Hz，Glc －1);13C －NMR(100 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為152.4(C －2)、123.1(C － 3)、180.7(C － 4)、154.9(C － 5)、132.5(C －6)、156.6(C － 7)、94.0(C － 8)、152.9(C － 9)、106.4(C －10)、121.6(C －1')、112.0(C －2')、147.8(C －3')、146.1(C－4')、116.3(C －5')、121.6(C －6')、55.6(OCH3－4')、60.3(OCH3－6)、100.1(C －1'')、73.1(C －2'')、77.3(C －3'')、69.6(C －4'')、76.7(C －5'')、60.6(C －6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，鑒定化合物10為鳶尾甲苷B(iristectoridin B)。

2.11 化合物11 白色粉末，分離得到342.7 mg。1H－NMR(400 MHz，DMSO －d6)，δ 分別為12.93(1H，s，OH －5)、9.16(1H，s，OH － 3')、8.44(1H，s，H － 2)、6.84(1H，s，H － 8)、3.70(3H，s，OCH3－6)、3.75(3H，s，OCH3－4')、3.79(3H，s，OCH3－5')、5.08(1H，d，J=8Hz，Glc －1)、3.16 ～ 3.50(葡萄糖上氫質(zhì)子信號(hào))。結(jié)合化合物3以及文獻(xiàn)［16］數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，鑒定化合物11為野鳶尾苷(iridin)。

3 結(jié)論

該研究采用硅膠柱層析、Sephadex LH－20柱層析和重結(jié)晶等方法進(jìn)行分離純化，并根據(jù)波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，系統(tǒng)分析射干中苷和苷元類(lèi)的化學(xué)成分。結(jié)果表明，在乙酸乙酯萃取物中分離鑒定了6個(gè)化合物，經(jīng)波譜解析分別鑒定為鳶尾苷元(tectorigenin，1)、鳶尾甲黃素A(tectorigenin A，2)、野鳶尾黃素(irigenin，3)、鳶尾甲黃素 B(iristectorigenin B，4)、次野鳶尾黃素(irisflorentin，5)、白射干素(dichotomitin，6);正丁醇萃取物中分離鑒定了5個(gè)化合物，分別為芒果苷(mangiferin，7)、鳶尾甲苷 A(iristectoridin A，8)、鳶尾苷(tectoridin，9)、鳶尾甲苷 B(iristectoridin B，10)、野鳶尾苷(iridin，11)?？梢?jiàn)，從射干中分離得到了11個(gè)化合物，除化合物7屬于雙苯吡酮外，其他化合物均屬于異黃酮類(lèi)。該研究結(jié)果涵蓋了異黃酮和雙苯吡酮類(lèi)成分，為其進(jìn)一步的研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)及對(duì)其藥用資源開(kāi)發(fā)起到較好的促進(jìn)作用。

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