4種血清標(biāo)志物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷、疾病活動(dòng)度的判斷及骨侵蝕的預(yù)測的應(yīng)用價(jià)值

張 瓊，羅以勤，汪 元，黃開泉，朱 俊

4種血清標(biāo)志物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷、疾病活動(dòng)度的判斷及骨侵蝕的預(yù)測的應(yīng)用價(jià)值

張 瓊1，2，羅以勤1，汪 元3，黃開泉2，朱 俊2

目的研究葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶（GPI）、類風(fēng)濕因子（RF）、抗角蛋白抗體（AKA）、抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體4種血清標(biāo)志物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）疾病的診斷、疾病活動(dòng)度的判斷及骨侵蝕的預(yù)測方面的應(yīng)用價(jià)值。方法選取193例RA患者，158例非RA患者，98例健康體檢者。采用ELISA法定量檢測GPI和抗CCP抗體濃度水平，免疫透射比濁法定量檢測RF濃度水平，采用間接免疫熒光法定性檢測AKA。結(jié)果血清GPI、RF、抗CCP抗體、AKA陽性率在RA組與非RA組及健康對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；血清GPI、RF、抗CCP抗體濃度水平在RA組顯著高于非RA組及健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。血清GPI、RF濃度水平在RA活動(dòng)組濃度顯著高于非活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；血清抗CCP抗體濃度水平在RA活動(dòng)組與非活動(dòng)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清GPI、RF濃度水平在RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血清抗CCP抗體濃度水平在RA骨侵蝕組顯著高于非骨侵蝕組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。血清AKA陽性率在RA活動(dòng)組與非活動(dòng)組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論血清GPI、RF、抗CCP抗體、AKA的水平對RA的診斷起到重要作用，血清GPI、RF濃度水平與RA患者疾病活動(dòng)度有關(guān)，血清抗CCP抗體濃度水平可以預(yù)測RA患者骨侵蝕，RA患者血清AKA陽性可能與骨侵蝕有關(guān)。

GPI；RF；AKA；抗CCP抗體；RA；診斷；疾病活動(dòng)度；骨侵蝕預(yù)測

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以慢性關(guān)節(jié)滑膜炎為特征的自身免疫性疾病，發(fā)病率很高，全世界患病率約1%，致殘率高，發(fā)病兩年內(nèi)即出現(xiàn)不可逆的骨關(guān)節(jié)破壞。血清學(xué)指標(biāo)可出現(xiàn)于RA疾病的早期，甚至可出現(xiàn)于RA臨床癥狀發(fā)生前且都有高度特異性和一定的敏感性［1］。目前臨床應(yīng)用較多的血清學(xué)指標(biāo)有類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）、抗角蛋白抗體（anti-keratin antibody，AKA）、抗環(huán)瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide，CCP）抗體、葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）。該研究對193例RA患者、158例非RA患者及98例健康對照者血清中GPI、RF、AKA、抗CCP抗體4項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)果進(jìn)行分析，探討其在RA疾病的診斷，判斷疾病活動(dòng)度及預(yù)測RA患者的骨侵蝕度方面的作用。

1 材料與方法

1.1 病例資料隨機(jī)選擇2014年1～8月于安徽省中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的RA患者作為RA組，共193例，其中女167例，男26例；年齡18～84（49.8±13.0）歲，上述患者均符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）修訂的RA分類診斷標(biāo)準(zhǔn)。嚴(yán)格按照DAS28評分標(biāo)準(zhǔn)和Sharp評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分組。其中分為RA活動(dòng)組80例，非活動(dòng)組113例；RA骨侵蝕組91例，非骨侵蝕組102例。同期選取風(fēng)濕免疫科門診及住院就診的158例非RA患者作為非RA組，年齡、性別與RA組相匹配。其中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡4例、干燥綜合征11例、骨關(guān)節(jié)炎46例、過敏性紫癜1例、脊柱關(guān)節(jié)炎5例、間質(zhì)性肺病2例、結(jié)締組織病19例、進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化病2例、頸椎增生病1例、局限性硬皮病2例、強(qiáng)直性脊柱炎12例、痛風(fēng)15例、腕管綜合征1例、纖維肌痛綜合征2例、血管炎2例、血清性關(guān)節(jié)炎4例、炎性關(guān)節(jié)炎2例、腰椎間盤突出癥3例、銀屑病關(guān)節(jié)炎2例和（未分化）關(guān)節(jié)炎22例。診斷均符合相應(yīng)分類診斷標(biāo)準(zhǔn)。同期選取98例健康管理中心的健康體檢者作為健康對照組，年齡、性別與RA組相匹配。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集靜脈血2～4 ml置于一次性分離膠促凝試管，1 h內(nèi)3 500 r／min離心10 min分離血清，2 h內(nèi)完成RF檢測，2～8℃保存分離的血清，在4 d內(nèi)完成GPI、AKA、抗CCP抗體的檢測。

1.2.2 試劑來源 歐蒙（杭州）醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司生產(chǎn)的試劑盒檢測AKA，檢測方法為間接免疫熒光法，抗原基質(zhì)為大鼠食管冷凍切片，滴度≥1：10陽性判斷為陽性。上海北加生化試劑有限公司生產(chǎn)的試劑盒檢測GPI，檢測方法為ELISA法，操作參考說明書，以4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品（0.16、0.33、1.00、2.00 mg／L）以及試劑空白對照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)做陰性和陽性對照，檢測結(jié)果≥0.20 mg／L為陽性。上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司試劑盒檢測抗CCP抗體，檢測方法為ELISA法，依據(jù)說明書操作，以5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物的濃度（分別為3 200、800、200、50、25 RU／ml；同時(shí)做陰性和陽性對照）及試劑空白對照做標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)做陰性和陽性對照，患者血清1：50稀釋，結(jié)果≥25 RU／ml為陽性。采用德國羅氏診斷有限公司進(jìn)口試劑檢測RF，檢測方法為免疫透射比濁法，結(jié)果≥15 U／ml為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用GraphPad Prism 5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料兩組比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，三組比較采用方差分析。各項(xiàng)血清標(biāo)志物的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值采用四格表法計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 陽性分布情況及陽性率血清GPI、RF、抗CCP抗體、AKA陽性率在RA組與非RA組及健康對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 陽性分布情況及陽性率比較［n（%）］

2.2 血清GPI、RF、抗CCP抗體、AKA敏感度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值可見敏感度由大到小分別是：抗CCP抗體＞RF＞GPI＞AKA；特異度由大到小是：抗CCP抗體、AKA＞RF＞GPI。單項(xiàng)中敏感度以抗CCP抗體最高，AKA最低；特異度以抗CCP抗體和AKA最高，GPI最低。4項(xiàng)中任意一項(xiàng)指標(biāo)陽性的敏感度為95.3%；4項(xiàng)指標(biāo)同時(shí)陽性的特異度達(dá)到100%。見表2。

表2 敏感度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值（%）

2.3 GPI、抗CCP抗體、RF血清水平分布血清GPI、RF、抗CCP抗體濃度水平在RA組顯著高于非RA組及健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 血清水平分布（）

表3 血清水平分布（）

項(xiàng)目RA組（n＝193）非RA組（n＝158）健康對照組（n＝98）F值P值GPI（mg／L）1.11±1.260.34±0.630.05±0.0254.4＜0.000 1抗CCP（RU／ml）128.70±97.2024.50±13.8015.80±0.30154.3＜0.000 1 RF（U／ml）155.30±211.2014.80±35.704.90±9.9058.2＜0.000 1

2.4 RA活動(dòng)組與非活動(dòng)組血清GPI、抗CCP抗體、RF水平血清GPI、RF水平在RA活動(dòng)組濃度顯著高于非活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；血清抗CCP抗體濃度水平在RA活動(dòng)組與非活動(dòng)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表4。

表4 RA活動(dòng)組與非活動(dòng)組血清GPI、抗CCP抗體、RF水平比較（）

表4 RA活動(dòng)組與非活動(dòng)組血清GPI、抗CCP抗體、RF水平比較（）

項(xiàng)目RA活動(dòng)組（n＝80）RA非活動(dòng)組（n＝113）t值P值GPI（mg／L）2.07±1.300.43±0.6310.76＜0.000 1抗CCP（RU／ml）122.30±77.40133.20±109.200.560.580 0 RF（U／ml）227.40±225.90104.20±184.803.650.000 5

2.5 RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組血清GPI、抗CCP抗體、RF水平血清GPI、RF水平在RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血清抗CCP抗體水平在RA骨侵蝕組顯著高于非骨侵蝕組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

2.6 血清AKA在RA患者不同分組的陽性率 血清AKA陽性率在RA活動(dòng)組與非活動(dòng)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表6、圖1。

表5 RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組血清GPI、抗CCP抗體、RF水平比較（）

表5 RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組血清GPI、抗CCP抗體、RF水平比較（）

項(xiàng)目RA骨侵蝕組（n＝91）RA非骨侵蝕組（n＝102）t值P值GPI（mg／L）1.05±1.201.16±1.310.000 60.990 0抗CCP（RU／ml）184.90±99.9078.60±60.809.010 0＜0.000 1 RF（U／ml）143.60±178.10165.70±237.20 0.310 00.750 0

表6 血清AKA在RA患者不同分組的陽性率比較（n）

3 討論

本研究顯示抗CCP抗體敏感度為86.0%，特異度為95.6%，在4項(xiàng)指標(biāo)中為診斷RA最為理想的指標(biāo)。在抗CCP抗體陰性的27例RA患者中，GPI陽性有15例。血清GPI、RF、AKA、抗CCP抗體聯(lián)合檢測，4項(xiàng)指標(biāo)任意一項(xiàng)陽性的敏感度為95.3%，4項(xiàng)指標(biāo)同時(shí)陽性的特異度達(dá)到100%，均高于任何單項(xiàng)指標(biāo)。

GPI作為自身抗原誘發(fā)TCR轉(zhuǎn)基因鼠發(fā)生與人RA相似的炎癥性關(guān)節(jié)炎，GPI誘發(fā)的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)是引起鼠炎癥性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制［2］；GPI抗原存在于多數(shù)人RA患者血清和關(guān)節(jié)液中，GPI作為自身抗原，一方面誘導(dǎo)機(jī)體免疫細(xì)胞釋放細(xì)胞因子引起關(guān)節(jié)炎，另一方面與抗GPI自身抗體結(jié)合引起的免疫反應(yīng)會(huì)使關(guān)節(jié)炎癥狀進(jìn)一步加重，或成為反映RA患者病情活動(dòng)狀態(tài)的指標(biāo)之一［3］。本研究顯示GPI在RA的診斷上敏感性為74.1%，特異性為77.0%，在RF陰性的36例RA患者中GPI陽性16例。因此在RA診斷上GPI對于抗CCP抗體陰性、RF陰性的RA患者是很好的補(bǔ)充指標(biāo)。研究［4］表明血清GPI濃度水平與RF濃度水平有很好的相關(guān)性，且均與RA患者活動(dòng)性有關(guān)。RF并不是RA的特異性抗體，在骨關(guān)節(jié)炎、結(jié)締組織病等疾病中也有不同程度的陽性表現(xiàn)。當(dāng)臨床癥狀不典型時(shí)，僅憑RF測定結(jié)果很難為早期RA的診斷提供可靠依據(jù)。為了實(shí)現(xiàn)對RA的早期診斷，2009年美國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（ACR／EULAR）共同提出了新的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，將抗CCP抗體和RF共同作為診斷RA的血清學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)［5］。

抗CCP抗體產(chǎn)生越多及其與RA密切相關(guān)的共同表位越多，關(guān)節(jié)損害就越嚴(yán)重［6］。在本研究中，血清抗CCP抗體濃度水平、AKA陽性率在RA骨侵蝕組與非骨侵蝕組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？笴CP抗體、AKA均與關(guān)節(jié)侵蝕性病變有關(guān)，原因可能是富含瓜氨酸殘基的多肽或蛋白均可被RA患者血清中的自身抗體識(shí)別，進(jìn)而引起關(guān)節(jié)損傷［7］。瓜氨酸是抗聚角蛋白微絲蛋白抗體（AFA）、AKA和抗核周因子抗體（APF）所識(shí)別抗原決定簇中的主要成分，抗CCP抗體雖是按照絲集蛋白序列合成的多肽抗原，但抗CCP抗體測得的結(jié)果不能涵蓋AFA、AKA和APF。研究［8］顯示，有56%的RA患者僅含有一種瓜氨酸相關(guān)性抗體，僅有7%的患者AKA、AFA、抗Sa及抗CCP抗體全陽性。

本研究顯示GPI、RF、AKA、抗CCP抗體4種血清標(biāo)志物在RA疾病的診斷、疾病的發(fā)展監(jiān)測、療效評價(jià)及預(yù)后判斷上相互補(bǔ)充，聯(lián)合檢測提高了診斷的敏感度和特異度。血清GPI、RF濃度水平與RA疾病活動(dòng)性相關(guān)。AKA、抗CCP抗體與骨侵蝕相關(guān)，對于AKA、抗CCP抗體陽性患者可盡早進(jìn)行干預(yù)、阻斷疾病的進(jìn)展，有效減少骨侵蝕和關(guān)節(jié)破壞。

［1］ Niewold T B，Harrison M J，Paget S A.Anti-CCP antibody testing as a diagnostic and prognostic tool in rheumstoid arthritis［J］.QJM，2007，100（4）：193-201.

［2］ Frey O，Mitera T，Kelchtermans H，et al.Ameliorated course of glucose-6-phosphate isomerase（G6PI）-induced arthritis in IFN-γ receptor knockout mice exposes an arthritis-promoting role of IFN-γ［J］.J Autoimmun，2011，36（2）：161-9.

［3］ Jouen F，Vittecoq O，Leguillou F，et al.Diagnostic and prognostic values of anti glucose-6-phosphate isomerase antibodies in commu-nity-recruited patients with very early arthritis［J］.Clin Exp Immunol，2004，137（3）：606-11.

［4］ 丁榮梅.高水平葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動(dòng)度的關(guān)系［J］.中華全科醫(yī)學(xué)，2012，10（12）：1941-2.

［5］ Polido-Pereira J，Vieira-Sousa E，F(xiàn)onseca J E.Rheumatoid arthritis：what is refractory disease and how to manage it？［J］.Autoimmun Rev，2011，10（11）：707-13.

［6］ Mewar D，Marinou I，Coote A L，et al.Association between radiographic severity of rheumatoid arthritis and shared epitope alleles：differing mechanisms of susceptibility and protection［J］.Ann Rheum Dis，2008，67（7）：980-3.

［7］ 范列英.風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎血清早期診斷指標(biāo)的研究進(jìn)展［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2003，26（10）：632-4.

［8］ Goldbach-Mansky R，Lee J，McCoy A，et al.Rheumatoid arthritis associated autoantibodies in patients with synovitis of recent onset［J］.Arthritis Res，2000，2（3）：236-43.

Values of four serum markers in the diagnosis，the assessment of disease activity and the prediction of bone erosion of rheumatoid arthritis

Zhang Qiong1，2，Luo Yiqin1，Wang Yuan3，et al
（1Dept of Clinical Laboratory，The Affiliated Provincial Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230001；2Clinical Laboratory Center，3Dept of Rheumatology and Immunology，The First Affiliated Hospital of Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230031）

ObjectiveTo systematically evaluate the values of four serum markers including glucose-6-phosphate isomerase（GPI），rheumatoid factor（RF），anti-keratin antibody（AKA）and anti-cyclic citrullinated peptide（CCP）antibody in the diagnosis，the assessment of disease activity and the prediction of bone erosion of rheumatoid arthritis（RA）.MethodsThe serum samples of 193 patients with RA，158 non-RA rheumatic patients and 98 healthy controls were collected.The expressions of GPI and anti-CCP were measured by ELISA methods.The level of RF was measured by the immune turbidimetric methods；AKA was measured by indirect immunofluorescence methods.ResultsThe positive rates of these four antibodies in RA patients were significantly higher than in non-RA rheumatic patients and healthy controls group（P＜0.05），the combined detection of these four antibodies could obviously improve the sensitivity and the specificity in the diagnosis of RA.The mean levels of GPI，RF and anti-CCP were significantly higher in RA patients than that of in non-RA rheumatic patients and healthy controls group（P＜0.05）.There were significant differences between the active phase and the inactive phase in the GPI and RF levels（P＜0.05）；with the value of the anti-CCP，there was no difference between the active phase and the inactive phase.The levels of GPI and RF in the bone erosion group and the non-bone erosion group had no significant difference；with the value of the anti-CCP，there was obvious difference between the bone erosion group and the nonbone erosion group（P＜0.05）.The positive rate of AKA in the active phase and the inactive phase had no difference；while，there was significant difference between the bone erosion group and the non-bone erosion group（P＜0.05）.ConclusionThe combined detection of these four antibodies has important clinical significance in the diagnosis of RA.The serum concentrates of GPI and RF have significantly positive correlation with disease activity of RA.It is valuable to predict the bone erosion of RA，using detection of anti-CCP.The patients with positive AKA may exhibit more bone damage.

glucose-6-phosphate isomerase；rheumatoid factor；anti-keratin antibody；anti-cyclic citrullinated peptide antibody；rheumatiod arthritis；diagnosis；disease activity；predicting of bone erosion

R 446.69

A

1000-1492（2015）12-1791-04

時(shí)間：2015-11-18 10：12：35

http：／／www.cnki.net／KCMS／detail／34.1065.R.20151118.1012.038.html

2015-07-01接收

國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目（編號：81302967）

1安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，合肥 230001安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院2檢驗(yàn)中心、3風(fēng)濕免疫科，合肥 230031

張 瓊，女，主管技師，碩士研究生；

羅以勤，男，副教授，主任技師，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：luoyiqin2003＠163.com