術(shù)前尿液BLCA－4及IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系及意義*

楊大富， 陸榮森， 廖 俊， 梁華良， 黃芳偉

(1.廣東省信宜市人民醫(yī)院泌尿外科， 廣東 信宜 525300 2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科， 廣東 廣州 510080)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一，在我國其發(fā)病率占泌尿系統(tǒng)瘤的首位［1］。根據(jù)2005年美國癌癥中心統(tǒng)計，膀胱癌位列男性常見癌癥第4位，女性常見癌癥第10位［2］?；诓煌潭蕊L(fēng)險的膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后，一年內(nèi)仍有20% ～90%的高復(fù)發(fā)率［3］，因此對膀胱癌早期診斷和監(jiān)測是治療膀胱癌的核心。目前膀胱鏡檢查仍是膀胱癌確診的金標(biāo)準(zhǔn)，但其具有侵入創(chuàng)傷性、不能準(zhǔn)確確定腫瘤的分級和分期，不易早期發(fā)現(xiàn)病變等缺點。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，越來越多的腫瘤標(biāo)記物應(yīng)用于診斷及監(jiān)測膀胱腫瘤，其中膀胱癌特異性核基質(zhì)蛋白－4(BLCA－4)和白細(xì)胞介素－8(IL－8)是其中的研究熱點。本研究基于酶聯(lián)免疫反應(yīng)原理分別檢測膀胱癌組患者、正常對照組和高危性膀胱癌人群中術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平，以探討分析術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇2011年5月至2013年5月我院收治的膀胱癌患者42例(膀胱癌組)，均經(jīng)手術(shù)病理證實為移形細(xì)胞癌。其中男26例，女16例，年齡24～80歲，平均(45.6±14.1)歲。病程 9 ～50 個月，平均(25.3±7.6)月。大多數(shù)患者表現(xiàn)伴有無痛性，間歇性，全程肉眼血尿，尿頻、尿急、尿疼等膀胱刺激癥狀，部分出現(xiàn)尿潴留現(xiàn)象。根據(jù)UIC標(biāo)準(zhǔn)病理分期:淺表性膀胱癌(T0～T1)24例，浸潤性膀胱癌(T2～T4)18例;按照按WHO的病理分級標(biāo)準(zhǔn)［4］:G1期12例，G2期21例，G3期9例;初發(fā)性23例，復(fù)發(fā)性19例;單發(fā)性25例，多發(fā)性17例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或免疫治療，無肝炎、糖尿病及免疫系統(tǒng)等疾病。選擇同期在本院進(jìn)行體檢的健康者28例(正常對照組)，男15例，女13例，年齡22～78歲，平均(46.2±12.8)歲;同時選取脊髓損傷的膀胱癌高?；颊?2例(高危性膀胱癌組)，男19例，女13例，年齡21～79歲，平均(45.9±15.7)歲。

1.2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的測定

1.2.1 BLCA－4檢測:取收集的正常對照組、高危性膀胱癌組和膀胱癌組患者術(shù)前24h的尿標(biāo)本各100mL，用乙醇以1∶3比例固定30min后，收集沉淀尿蛋白，加入PBS緩沖液，置－80℃儲存?zhèn)溆谩LCA－4檢測試劑盒購于聯(lián)科生物技術(shù)有限公司。測定時，首先將含尿蛋白的標(biāo)本加到酶標(biāo)板中，置4℃凍箱包被過夜。次日，PBS(磷酸鹽緩沖液，PH=7.0)洗滌酶標(biāo)板后加入Anti BLCA－4抗體，室溫下孵育2h。再用含小牛血清的封閉液洗滌后加入酶標(biāo)二抗，室溫下孵育2h，PBS洗滌后加入底物顯色，于405nm波長處讀取 A 值。Cut－off值為:14.0A/μg.protein。

1.2.2 IL－8 檢測:采用人白細(xì)胞介素－8(IL－8)ELISA檢測試劑盒(上海百蕊生物科技有限公司)進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，兩標(biāo)本均數(shù)的比較采用t檢驗，P＜0.05為有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié) 果

表1 膀胱癌組與正常對照組、高危性膀胱癌組術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的比較(±s)

表1 膀胱癌組與正常對照組、高危性膀胱癌組術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的比較(±s)

與對照組相比，*P＜0.01;#P＜0.001

組別 BLCA－4(A/μg.protein)IL－8(ng/mL)正常對照組 2.7±5.8 12.3±7.9高危性膀胱癌組 9.1±18.7* 18.4±8.2*膀胱癌組 45.3±69.2# 36.6±11.5#

表2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

表2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

BLCA－4(A/μg.protein)IL－8(ng/mL)性別 男(n=26) 46.3±65.8 38.1±12.3 0.792 0.717腫瘤發(fā)生 單發(fā)(n=25) 40.3±56.8 32.8±10.6多發(fā)(n=17) 48.4±70.3 37.4±12.3 P 0.873 0.768年齡 ≤45(n=19) 45.1±70.2 34.7±11.3＞45(n=23) 47.4±68.3 37.5±12.6 P女(n=16) 44.7±67.2 35.9±13.4 P 0.101 0.132病理分期 T0 ～ T1(n=24) 46.2±57.3 37.7±13.3 0.073 0.085初發(fā)(n=23) 48.1±68.9 37.9±12.8復(fù)發(fā)(n=19) 42.7±61.3 32.4±11.7 P 0.325 0.271病理分級 G1(n=12) 33.7±56.8 26.4±11.7 G2(n=21) 42.2±63.7 33.1±12.2 T2 ～ T4(n=18) 44.6±60.5 35.3±12.6 P

G3(n=9) 48.1±66.3 38.8±11.3 P 0.023 0.037

2.1 膀胱癌組與正常對照組、高危性膀胱癌組術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的比較:實驗測得BLCA－4水平的 Cut－off值為 14.0A/μg.protein。其中膀胱癌組患者尿中BLCA－4含量顯著性高于正常對照組和高危性膀胱癌組(P＜0.001)，而且高危性膀胱癌組為45.3±69.2A/μg.protein;正常對照組尿中 BLCA－4 含量為 2.7±5.8A/μg.protein;顯著高于正常組(P＜0.01)。同時，與正常對照組相比，術(shù)前尿液中IL－8水平在高危性膀胱癌組和膀胱癌組均顯著性上升，統(tǒng)計學(xué)差異分別為 P＜0.01，P＜0.001。見表1。

2.2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系:將膀胱癌組患者按照性別、年齡、腫瘤發(fā)生情況、腫瘤病理分期和分級等病理特征進(jìn)行各自分組后統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，術(shù)前尿液中BLCA－4水平與年齡、性別、腫瘤單發(fā)還是多發(fā)，初發(fā)還是復(fù)發(fā)沒有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P均＞0.05)，但與腫瘤的病理分期和分級有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，同時IL－8水平的檢測與BLCA－4水平的表達(dá)基本一致。見表2。

3 討 論

BLCAs家族最早是在1996年由 Getzenberg等［5］利用雙向凝膠電泳法從膀胱癌患者和正常人的膀胱組織中提取出來的。其中BLCA1－6是6種特異性表達(dá)于膀胱腫瘤而非正常人膀胱組織中的膀胱癌特異性核基質(zhì)蛋白，除BLCA－5外，其余均表達(dá)于所有的膀胱癌細(xì)胞系中。BLCA－4具有組織特異性和疾病特異性，近年來隨著對核基質(zhì)蛋白的深入研究，BLCA－4成為具有潛在臨床應(yīng)用前景的膀胱腫瘤標(biāo)志物。

目前關(guān)于BLCA－4功能分析的研究相比其他膀胱特異性核基質(zhì)蛋白較多。其中Myers－Irvin等［6］通過將BLCA－4基因轉(zhuǎn)染至四種不同人膀胱癌細(xì)胞系中分析發(fā)現(xiàn):BLCA－4高表達(dá)的膀胱癌細(xì)胞中，白細(xì)胞介素－1α(IL－1α)、白細(xì)胞介素－8(IL－8)、血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)、血管內(nèi)皮樣因子(VEGF)及血清淀粉蛋白(SA)等許多細(xì)胞生長相關(guān)基因均上調(diào)，同時也伴有維生素D3相關(guān)基因下調(diào)。該研究說明BLCA－4的高表達(dá)可以引起許多基因表達(dá)的改變，其相互作用可能與腫瘤的發(fā)生、復(fù)發(fā)及進(jìn)展有著密切聯(lián)系。其中，IL－8作為一個多種細(xì)胞來源的趨化性細(xì)胞因子，可參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答及創(chuàng)傷愈合等過程，并且在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要作用。Myers－Irvin等［6］的芯片研究顯示在BLCA－4轉(zhuǎn)染的膀胱癌細(xì)胞系中IL－8含量增加了12倍，而同時Feng等［7］的研究也提示BLCA－4的高表達(dá)與IL－8的增加是同時的，Escudero等［8］證明 BLCA－4調(diào)控IL－8基因的上調(diào)，在尿路上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。以上結(jié)論均說明了BLCA－4與IL－8在膀胱癌形成中的潛在一致性，提示作為腫瘤標(biāo)志物的可能。

對于BLCA－4或作為膀胱癌腫瘤標(biāo)記物的研究已有很多文獻(xiàn)報道，但結(jié)果略有差異。有報道采用用間接酶聯(lián)免疫吸附測定法證明尿液BLCA－4水平在膀胱癌患者中顯著高表達(dá)，且其表達(dá)水平與性別、年齡、疾病分期及分級無關(guān)。本研究對膀胱癌組患者、正常對照組和高危性膀胱癌人群中尿液中BLCA－4和IL－8分別進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)膀胱癌組患者術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8均顯著高于正常對照組和高危性膀胱癌組，這與前人研究結(jié)果是一致的，而且我們還發(fā)現(xiàn)高危性膀胱癌組患者的BLCA－4和IL－8也顯著高于正常對照組，不僅提示兩者變化的同步性還說明兩者聯(lián)合應(yīng)用于膀胱癌早期診斷的可能性［9］。此外，通過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)術(shù)前尿液中BLCA－4水平與年齡、性別、腫瘤單發(fā)還是多發(fā)，初發(fā)還是復(fù)發(fā)均無關(guān)，但與腫瘤的病理分期和分級有顯著相關(guān)性，這與Zhao等免疫組化的結(jié)果是一致的。

［1］ 溫登瑰，單保恩，張思維，等.2003年至2007年中國腫瘤登記地區(qū)膀胱癌的發(fā)病與死亡分析［J］.腫瘤，2012，32:256 ～262.

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［6］ Myers－Irvin JM，Van Le TS，Getzenberg RH.Mechanistic analysis of the role of BLCA－4 in bladder cancer pathobiology［J］.Cancer Res，2005，65:7145 ～7150.

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