胃癌干細(xì)胞研究進(jìn)展

孟雪萍，王玉平，郭慶紅，周永寧，

1.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院消化科，甘肅 蘭州730000;2.甘肅省胃腸病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

胃癌是世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)性死亡的第二大原因，盡管有先進(jìn)的診斷工具和治療方法，其5 年生存率仍低于30%［1］。在我國胃癌患者中，約90%是進(jìn)展期腺癌，僅10%為早期胃癌。胃癌的發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過程，包括大量的基因和表觀遺傳學(xué)改變。胃癌干細(xì)胞(gastric cancer stem cells，GCSCs)是胃癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的重要因素，對(duì)其進(jìn)行研究，尋找和鑒定特異性的GCSCs 分子標(biāo)志物，并且明確其分子調(diào)控機(jī)制，為研究胃癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制開辟了新途徑，對(duì)其進(jìn)行特異性靶向治療成為目前腫瘤基礎(chǔ)研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)。

1 GCSCs 的起源

1.1 胃干細(xì)胞 近年已提出胃癌組織中包含一小部分具有干細(xì)胞樣特性的細(xì)胞群并且由它們驅(qū)動(dòng)發(fā)展成癌。Takaishi 等［2］首先將富含CD44 的胃癌細(xì)胞系體外培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基中產(chǎn)生球狀克隆，并將這些球狀克隆種植入重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠皮下，這批小鼠在幾個(gè)月后形成胃癌移植瘤，表明胃癌細(xì)胞系中確實(shí)存在GCSCs。胃干細(xì)胞位于胃黏膜腺體頸部及胃小凹底部，通過干細(xì)胞定向分化為祖細(xì)胞，祖細(xì)胞分化為胃腺體所需各類腺體細(xì)胞的過程完成更新，最終分化出成熟的胃黏膜細(xì)胞，其對(duì)維持胃黏膜的更新及保持組織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起重要作用。GCSCs 具有自我更新、無限增殖、多潛能分化、高效致瘤、多重耐藥等生物學(xué)特性。作為胃的腫瘤起始細(xì)胞，GCSCs 可能具有器官特異性并且來源于寄居在胃腺中的正常干細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，或者來源于遭受基因突變后更進(jìn)一步分化的祖細(xì)胞［3］。由于干細(xì)胞的壽命很長和無限增殖的特性，易于發(fā)生基因突變，隨后的影響改變它們預(yù)定的命運(yùn)，使其成為惡性克隆源。

1.2 骨髓來源細(xì)胞 GCSCs 也可能來源于另外一種細(xì)胞-骨髓干細(xì)胞細(xì)胞(bone marrow stem cells，BMSCs)。BMSCs 被認(rèn)為是最原始的非定向分化的成體干細(xì)胞，成人BMSCs 具有相當(dāng)程度的可塑性，它們不僅存在于血液和骨髓，也可以通過外周器官遷移至炎癥或組織損傷部位。BMSCs 可能通過細(xì)胞模擬、細(xì)胞融合或直接異常分化而導(dǎo)致胃癌發(fā)生。當(dāng)基因變異積累到一定程度，胃腺中的干細(xì)胞與骨髓來源的成人干細(xì)胞能夠發(fā)生增殖融合。慢性炎癥作為胃癌的主要危險(xiǎn)因素，能夠大力促進(jìn)BMSCs 與寄居部位的干細(xì)胞的融合［4］。Varon 等［5］用慢性幽門螺桿菌(H. pylori)感染的C57BL/6 小鼠模型實(shí)驗(yàn)，證明BMSCs 能定植并重新填充到胃黏膜，隨著時(shí)間的推移能夠發(fā)生化生、異型增生及癌變，并且顯示僅有25%的胃上皮高度異型增生來源于BMSCs，即約75%的胃癌的發(fā)生并不來源于BMSCs。

1.3 H.pylori 與胃癌 不同的研究已經(jīng)證實(shí)H.pylori感染引起的慢性炎癥和隨后對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞的損傷，導(dǎo)致BMSCs 的招募。一旦招募到胃黏膜上皮細(xì)胞，這些細(xì)胞通過與胃上皮細(xì)胞的細(xì)胞間融合方式定居于此并進(jìn)行分化，促使當(dāng)?shù)氐母杉?xì)胞衰竭和參與組織再生。慢性感染與炎癥的環(huán)境導(dǎo)致上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition，EMT)，EMT 是指上皮細(xì)胞獲得成纖維樣細(xì)胞的特征，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附性減弱，運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)，細(xì)胞間緊密連接破壞，使得腫瘤細(xì)胞易于穿越基底膜，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移性。EMT 促使具有間葉細(xì)胞樣和干細(xì)胞樣特性的CD44+細(xì)胞的出現(xiàn)，結(jié)果引起組織化生和異型增生。經(jīng)過額外的后生和突變事件，導(dǎo)致癌干細(xì)胞和腺癌的出現(xiàn)［6］。

用H.pylori 感染C57BL/6 小鼠的模型［7］代表了一個(gè)理想的系統(tǒng)，用以評(píng)估慢性炎癥對(duì)BMSCs 招募和植入胃中的影響。在這個(gè)模型中，在感染2 ～3 個(gè)月后炎癥最大化，而且在動(dòng)物以后的生命中炎癥會(huì)以中等水平持續(xù)存在。在持續(xù)的H. pylori 感染作用下，胃黏膜經(jīng)過一系列的變化，包括上皮化生和不典型增生，直到感染后的12 ～18 個(gè)月以浸潤性胃癌終止。

急性胃感染H. pylori、急性潰瘍或藥物誘導(dǎo)的胃壁細(xì)胞損失并不能導(dǎo)致BMSCs 的招募，而重度慢性炎癥可導(dǎo)致BMSCs 相關(guān)的癌變。后一種情況可能是上調(diào)炎性細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6、TNF-α 和趨化因子如CXCL12 (也稱SDF-1α)等促進(jìn)祖細(xì)胞的招募［8］。

2 常見的分子標(biāo)志物

2.1 CD44 CD44 是一組廣泛存在于細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，分子量為90 kDa，僅含有組成型外顯子的CD44 轉(zhuǎn)錄子稱為標(biāo)準(zhǔn)CD44(CD44s)，含有變異性拼接外顯子的CD44 轉(zhuǎn)錄子稱為CD44v。CD44 蛋白含有4 個(gè)功能區(qū)，即信號(hào)肽、N-末端細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和C-末端胞質(zhì)內(nèi)結(jié)構(gòu)域。Hsu 等［9］在研究干細(xì)胞標(biāo)志物CD44 時(shí)發(fā)現(xiàn)，CD44 是一種細(xì)胞表面黏附分子，通過與其配體透明質(zhì)酸相互作用，能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。對(duì)于特定的組織和亞型，CD44具有黏附、運(yùn)動(dòng)、促進(jìn)增殖、促進(jìn)細(xì)胞存活及抗凋亡的作用。某些亞型特別是CD44v 的表達(dá)與腫瘤生長和轉(zhuǎn)移有關(guān)。謝建偉等［10］通過免疫組化方法檢測CD44家族成員CD44s、CD44v5 和CD44v6 蛋白在胃癌中的表達(dá)情況，結(jié)果表明，CD44s 和CD44v6 的表達(dá)與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM 分期相關(guān)，僅CD44v6表達(dá)是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素。

2.2 CD133 CD133 是一種表達(dá)于細(xì)胞膜表面的糖蛋白抗原，分子量為120 kDa，具有5 個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)大的胞外環(huán)，CD133 抗原可被3 種抗體識(shí)別:克隆AC133、293C3 和AC141。CD133 可能是一生長因子受體，在與配體結(jié)合后酪氨酸殘基磷酸化可引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)。Hashimoto 等［11］研究表明CD133 的表達(dá)可被分為兩種類型:在腺體的管腔表達(dá)和細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。多因素分析顯示，CD133 在細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)是胃癌的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。Ishigami 等［12］通過免疫組化檢測CD133在胃癌組織中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，CD133 表達(dá)與胃癌浸潤和淋巴結(jié)受累程度呈正相關(guān)，且顯著影響患者的術(shù)后效果?？傮w來看，與CD44 相比，CD133 的生物學(xué)作用還有待進(jìn)一步闡明。

2.3 CD24 CD24 是一種由27 個(gè)氨基酸組成的單鏈蛋白質(zhì)，在很大程度上由O-糖基化和N-糖基化，并且是由糖基錨定結(jié)合在細(xì)胞外膜［13］。CD24 在成人非惡性組織中的表達(dá)被限制在B 細(xì)胞、粒細(xì)胞和角質(zhì)層。Fujikuni 等［14］通過臨床病理研究表明，CD24 在腸型及彌漫型胃癌中均是一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因子，低氧環(huán)境能夠誘導(dǎo)CD24 表達(dá)，并且促進(jìn)胃癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。在胃的癌變過程中，CD24 含量逐漸增加，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)通過抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)侵襲介導(dǎo)CD24 相關(guān)的胃癌變的進(jìn)展［15］。這或許將成為胃癌治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。

2.4 CD71 - CD71 分子又稱轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(transferrin receptor，TfR)，是細(xì)胞表面轉(zhuǎn)運(yùn)膜蛋白，與細(xì)胞的成熟、增殖、分化密切相關(guān)，在許多類型的細(xì)胞表面均有表達(dá)。Ohkuma 等［16］證明，在經(jīng)過5-氟尿嘧啶治療后的MKN1 細(xì)胞中CD71-是非常豐富的，并且在G0/G1細(xì)胞周期時(shí)相能夠累加。該亞群也表現(xiàn)出對(duì)傳統(tǒng)化療藥物較高的耐藥性，表明其具有干細(xì)胞樣特性。通過有限稀釋和一系列移植實(shí)驗(yàn)表明，CD71-細(xì)胞比CD71+細(xì)胞具有較高的致瘤性。

2.5 CD90+CD90，又稱Thy-1(θ 抗原)，是細(xì)胞黏附分子免疫球蛋白超家族的成員，其功能與細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-細(xì)胞質(zhì)間的作用有關(guān)，與神經(jīng)軸突生長、神經(jīng)再生、細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)移、炎癥、纖維化等也可能相關(guān)。有報(bào)道認(rèn)為CD90 與CD133 有交叉表達(dá)，且CD90+CD44+細(xì) 胞 惡 性 程 度 比CD90+CD44-細(xì) 胞 高［17］。Jiang 等［18］表明，與CD90-細(xì)胞相比，CD90+細(xì)胞在體內(nèi)有更強(qiáng)大的引發(fā)腫瘤的能力，并能從單細(xì)胞植入中重建腫瘤細(xì)胞的等級(jí)，顯示了其自我更新的特性。此外，在約25%的胃原發(fā)性腫瘤模型中ERBB2 過度表達(dá)，與這些腫瘤中CD90 的高水平表達(dá)相關(guān)。用曲妥珠單抗與傳統(tǒng)的化療藥物結(jié)合可減少CD90 在整個(gè)胃癌中的數(shù)量并抑制腫瘤生長。這些證據(jù)表明，CD90可能是GCSCs 的另一個(gè)潛在的候選標(biāo)記物。

2.6 富含亮氨酸重復(fù)序列的G 蛋白偶聯(lián)受體 富含亮氨酸重復(fù)序列的G 蛋白偶聯(lián)受體(Lgr5)是Wnt 通路的靶基因，標(biāo)志小腸、結(jié)腸和毛囊的干細(xì)胞。Barker等［19］證明Lgr5 是腸干細(xì)胞的標(biāo)志物，同樣能夠產(chǎn)生于所有的胃腺細(xì)胞，在未成熟的胃細(xì)胞中，Lgr5 主要表達(dá)于胃底腺，而在成熟胃中，Lgr5 嚴(yán)格表達(dá)于幽門腺，并且在胃腺癌中顯示獨(dú)特的表達(dá)能力。研究表明，Lgr5 陽性患者比陰性患者的生存時(shí)間明顯縮短(P =0.001)，用siRNA 抑制Lgr5 的表達(dá)能夠提高AGS 胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性［20］。

2.7 乙醛脫氫酶 隨著腫瘤干細(xì)胞理論假說發(fā)展，Huang 等［21］對(duì)乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase，ALDH)的表達(dá)進(jìn)行了研究，目前ALDH 已被用于乳腺癌、肺癌、白血病、頭頸癌、結(jié)腸癌和肝癌等腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物［21］。ALDH 重要的同工酶有兩種，ALDH1 位于細(xì)胞液內(nèi)，而ALDH2 位于線粒體內(nèi)。Katsuno 等［22］證明ALDH1 作為GCSCs 的一個(gè)候選的標(biāo)志物，來自人彌漫型胃癌細(xì)胞系的ALDH1+細(xì)胞，與ALDH1-細(xì)胞相比，在體內(nèi)及體外均具有較高的腫瘤發(fā)生能力，并能夠自我更新和產(chǎn)生異質(zhì)細(xì)胞群。此外，在ALDH1+的GCSC 細(xì)胞中，再生胰島衍生家族成員4(REG4)是上調(diào)的，ALDH1 和REG4 的表達(dá)被轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)下調(diào)，這與GCSCs 數(shù)量的減少和致瘤性減弱密切相關(guān)。研究表明，ALDH 可能與腫瘤耐藥有關(guān)，通過siRNA 或shRNA 有針對(duì)性的抑制ALDH1 活性，能增加腫瘤細(xì)胞對(duì)傳統(tǒng)療法的敏感性［23］。

2.8 側(cè)群細(xì)胞 所謂的側(cè)群(side population，SP)細(xì)胞，是Goodell 等［24］在用DNA 結(jié)合活體染料Hoechst33342 為小鼠骨髓細(xì)胞染色并進(jìn)行熒光活化細(xì)胞分選時(shí)發(fā)現(xiàn)的。SP 是富集有腫瘤起始細(xì)胞的一個(gè)細(xì)胞亞群，SP 作為惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和對(duì)化療藥物抵抗的源頭這一特征已被大多數(shù)研究者認(rèn)可。其表型的出現(xiàn)主要是由三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2(adenosine triphosphate-binding cassette trans porter protein G2，ABCG2)表達(dá)介導(dǎo)的。TGF-β 誘導(dǎo)的EMT 在胰腺癌細(xì)胞中容易發(fā)生在SP 細(xì)胞而不是在主群細(xì)胞，這可能是腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSCs)遷移導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的機(jī)制［25］。從人類胃腸道癌細(xì)胞系中分離出的SP 細(xì)胞能夠過表達(dá)三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白(ATP-binding cassette transporter，ABC)，這與化學(xué)抵抗性相關(guān)，也與代表多能性的上皮和間質(zhì)標(biāo)志物的過度表達(dá)相關(guān)。最近的發(fā)現(xiàn)提供了新的有力證據(jù)表明GCSCs 滯留在SP 片段中，作為藥物外排蛋白過度表達(dá)的指示，增強(qiáng)化學(xué)抵抗力［4］。

3 GCSCs 與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

3.1 Wnt 通路 Wnt 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路最早被證實(shí)在胚胎發(fā)育中起重要作用，其與胚胎干細(xì)胞的增殖、分化及遷移過程相關(guān)。Wnt 信號(hào)可以分為經(jīng)典和非經(jīng)典途徑。在經(jīng)典的Wnt 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中，Wnt 配體與Frizzled受體結(jié)合，β-連接蛋白(β-catenin)的磷酸化被抑制，導(dǎo)致其穩(wěn)定化和核轉(zhuǎn)位，而β-catenin 與轉(zhuǎn)錄因子之間的相互作用激活目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄。非經(jīng)典Wnt 信號(hào)通路在胚胎發(fā)育過程中是獨(dú)立的β-catenin 的積累和調(diào)控的關(guān)鍵事件。

Cai 等［26］發(fā)現(xiàn)具有干細(xì)胞性質(zhì)的胃癌腫瘤球中Wnt 通路中關(guān)鍵信號(hào)分子β-catenin 明顯高表達(dá)，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)激活Wnt/β-catenin 信號(hào)通路靶基因的轉(zhuǎn)錄，改變細(xì)胞遷移能力和細(xì)胞極性，從而誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。通過特異性激活或阻斷Wnt 通路后，腫瘤球中的βcatenin 及其下游的靶基因c-myc、cyclinD 和axin2 發(fā)生相應(yīng)的改變，同時(shí)胃癌腫瘤球的形成能力相應(yīng)地得到增強(qiáng)或減弱。林照亮等［27］通過免疫組化技術(shù)研究顯示，在早期胃癌組和慢性萎縮性胃炎組，β-catenin和c-myc 基因蛋白的表達(dá)均明顯高于慢性非萎縮性胃炎組，說明胃癌與胃的癌前病變與Wnt/β-catenin 信號(hào)通路在胃癌患者發(fā)病中具有重要意義。

胃癌干細(xì)胞標(biāo)志物CD44 是Wnt 信號(hào)通路下游靶基因，Wnt 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在胃癌發(fā)生中協(xié)同促進(jìn)前列腺素E2(PGE2)誘導(dǎo)的CD44+的腺細(xì)胞擴(kuò)增［28］。Pacheco-Pinedo 等［29］發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin 信號(hào)通路通過影響Kras 突變抑制E-鈣黏蛋白(E-cadherin)的表達(dá)來增加CSCs 的侵襲特性，從而更有利于腫瘤細(xì)胞的增長。

3.2 Notch 信號(hào)通路 Notch 信號(hào)通路是細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展過程中干細(xì)胞自我更新和后天組織分化過程中的重要決定因素。研究表明，Notch1 信號(hào)通路的激活促進(jìn)胃癌進(jìn)展部分是通過COX-2 的作用。胃癌中Notch1 的活性可能是通過其配體DLL1 的后生沉默調(diào)節(jié)，而Notch1 抑制與彌漫型胃癌相關(guān)聯(lián)［30］。另外一項(xiàng)研究顯示Notch 信號(hào)通過表達(dá)Twist 和STAT3 促進(jìn)胃癌的發(fā)展［31］。

3.3 Hedgehog 信號(hào)通路 Hedgehog 信號(hào)通路是來自內(nèi)胚層的信號(hào)分子之一，在個(gè)體胚胎發(fā)育、慢性炎癥損傷中的組織修復(fù)和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等過程中起關(guān)鍵作用。Hedgehog 家族的分泌蛋白通過一個(gè)廣泛多樣的過程把胚胎發(fā)育和成人組織穩(wěn)態(tài)協(xié)調(diào)起來。有3 個(gè)已知的Hedgehog 家族配體:SHH、IHH、DHH。在這些配體中，SHH 在人類胃底腺中表達(dá)，并且通過Hedgehog 信號(hào)通路的異?；罨疭HH 上調(diào)并導(dǎo)致癌變［32］。胃癌按Lauren 分型分為腸型和彌散型，在彌漫型胃癌，IHH 表達(dá)于上皮表型細(xì)胞，而SHH 表達(dá)于間質(zhì)表型細(xì)胞;SHH可能與腸型胃癌的發(fā)生相關(guān)，SHH 的過表達(dá)主要在胃腺癌，癌細(xì)胞分化較差，更有侵襲性，IHH 在彌散型胃癌中表達(dá)顯著增強(qiáng)，提示IHH 可能與彌漫性胃癌的發(fā)生有關(guān)［33］。此外，Yoo 等［34］證明，SHH 通過TGF-β 介導(dǎo)的活化素受體樣激酶5 的Smad3 途徑的激活而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲。SHH 信號(hào)通過PI3K/Akt 信號(hào)通路也促進(jìn)了胃癌轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致間質(zhì)轉(zhuǎn)化和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的活化。

3.4 BMP 信號(hào)通路 BMP 即骨形態(tài)發(fā)生蛋白，除BMP-1(730 個(gè)氨基酸組成的富含半胱氨酸的前膠原C蛋白酶)外，均屬于TGF-β 超家族的成員，分布于人體多種組織及細(xì)胞中，BMP 具有誘導(dǎo)成骨的作用，在胚胎發(fā)育過程和骨代謝過程中也起重要作用。Zhang等［35］研究表明，BMP-2 可抑制胃癌細(xì)胞的生長，使G1期(DNA 合成前期)細(xì)胞增加，使S 期(DNA 合成期)的細(xì)胞減少。在彌漫型胃癌中，BMP-2 和BMP-4 的表達(dá)抑制細(xì)胞的增殖。最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在巨噬細(xì)胞與胃癌細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，巨噬細(xì)胞可通過TGF-β/BMPs通路上調(diào)胃癌細(xì)胞侵襲相關(guān)基因的表達(dá)而提高胃癌的侵襲能力，而抑制TGF-β/BMPs 通路則下調(diào)胃癌細(xì)胞侵襲相關(guān)基因的表達(dá)及胃癌的侵襲能力［36］。

4 腫瘤干細(xì)胞的耐藥性和靶向治療

傳統(tǒng)的抗癌治療主要針對(duì)體積大的腫瘤，但是對(duì)于未分化的CSCs 并不是很有效，癌癥細(xì)胞群的這個(gè)小部分能夠逃避化療和放療等常規(guī)療法。通過最近的討論認(rèn)為CSCs 抵抗化療藥物有幾種分子機(jī)制參與［37］，例如，很多CSCs 處于細(xì)胞周期的靜止期，對(duì)于自我更新是必要的，并能夠躲避化療藥物的攻擊。CSCs 的耐藥性可能依賴于IL-4 信號(hào)通路，因?yàn)樵谶@些細(xì)胞中IL-4 的上調(diào)可能有抗細(xì)胞凋亡的作用。研究發(fā)現(xiàn)，促細(xì)胞周期蛋白激酶可以引起基因和染色體的不穩(wěn)定，抑制促細(xì)胞周期蛋白激酶的活性可以使CSCs進(jìn)入細(xì)胞周期的中期，從而容易被化療藥物所作用［38］。CSCs 對(duì)放射性治療與免疫治療的抵抗性也已被報(bào)道，CSCs 經(jīng)歷EMT 這一過程似乎對(duì)化療及其他治療更有抵抗性。在癌變過程中能形成被T 淋巴細(xì)胞所識(shí)別的特殊的腫瘤顯性或隱性表位，這可能發(fā)生在CSCs 中，因此能夠提供特異性的針對(duì)CSCs 的治療方法，如免疫治療及分子靶向治療［39］。Han 等［40］發(fā)現(xiàn)分化療法通過誘導(dǎo)分化使CSCs 的活性降低，這種方法主要是利用具有干細(xì)胞特性的成熟細(xì)胞誘導(dǎo)更加成熟或已分化了的癌細(xì)胞。Wicha［41］提出了靶向治療腫瘤干細(xì)胞的方法，包括用miRNA 替代治療，miRNA是一類分布廣泛的非編碼蛋白質(zhì)的RNA，其功能是負(fù)調(diào)控基因表達(dá)，有證據(jù)證實(shí)miRNA 表達(dá)的失調(diào)與腫瘤發(fā)生有關(guān)。其他方法如阻止必要的CSC 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，干擾支持CSCs 生存的炎癥微環(huán)境，并取消CSCs自我更新機(jī)制等。因此，針對(duì)性的消除腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是最有效的打擊惡性腫瘤的途徑。

綜上所述，目前隨著GCSCs 研究的不斷發(fā)展，人們對(duì)GCSCs 與胃癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥性和預(yù)后的關(guān)系有了比較深入的了解，進(jìn)一步明確干細(xì)胞的起源，統(tǒng)一GCSCs 的標(biāo)志物，闡明GCSCs 的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，從而更好地研究GCSCs 的生物學(xué)特性，為胃癌預(yù)防和治療提供新的方法。

［1］ Li M，Zhang B，Zhang Z，et al. Stem cell-like circulating tumor cells indicate poor prognosis in gastric cancer ［J］. Biomed Res Int，2014，981261.

［2］ Takaishi S，Okumura T，Tu S，et al. Identification of gastric cancer stem cells using the cell surface marker CD44［J］. Stem Cells，2009，27(5):1006-1020.

［3］ Welte Y，Adjaye J，Lehrach HR，et al. Cancer stem cells in solid tumors:elusive or illusive?［J］. Cell Commun Signal，2010，8(1):1478-1481.

［4］ Stojnev S，Krstic M，Ristic-Petrovic A，et al. Gastric cancer stem cells:therapeutic targets［J］. Gastric Cancer，2014，17(1):13-25.

［5］ Varon C，Dubus P，Mazurier F，et al. Helicobacter pylori infection recruits bone marrow-derived cells that participate in gastric preneoplasia in mice［J］. Gastroenterology，2012，142(2):281-291.

［6］ Bessede E，Dubus P，Megraud F，et al. Helicobacter pylori infection and stem cells at the origin of gastric cancer［J］. Oncogene，2015，34(20):2547-2555.

［7］ Cai X，Carlson J，Stoicov C，et al. Helicobacter felis eradication restores normal architecture and inhibits gastric cancer progression in C57BL/6 mice［J］. Gastroenterology，2005，128(7):1937-1952.

［8］ Saikawa Y，F(xiàn)ukuda K，Takahashi T，et al. Gastric carcinogenesis and the cancer stem cell hypothesis［J］. Gastric Cancer，2010，13(1):11-24.

［9］ Hsu KH，Tsai HW，Shan YS，et al. Significance of CD44 expression in gastrointestinal stromal tumors in relation to disease progression and survival［J］. World J Surg，2007，31(7):1438-1444.

［10］ Xie JW，Huang CM，Zheng ZH，et al. Expression tumor stem cell surface marker CD44 in gastric cancer and its significance［J］. Chin J Gastrointes Surg，2013，16(11):1107-1112.謝建偉，黃昌明，鄭朝輝，等. 腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD44 在胃癌中的表達(dá)及其意義［J］. 中華胃腸外科雜志，2013，16(11):1107-1112.

［11］ Hashimoto K，Aoyagi K，Isobe T，et al. Expression of CD133 in the cytoplasm is associated with cancer progression and poor prognosis in gastric cancer［J］. Gastric Cancer，2014，17(1):97-106.

［12］ Ishigami S，Ueno S，Arigami T，et al. Prognostic impact of CD133 expression in gastric carcinoma［J］. Anticancer Res，2010，30(6):2453-2457.

［13］ Wu H，Xu JB，He YL，et al. Tumor-associated macrophages promote angiogenesis and lymphangiogenesis of gastric cancer［J］. J Surg Oncol，2012，106(4):462-468.

［14］ Fujikuni N，Yamamoto H，Tanabe K，et al. Hypoxia-mediated CD24 expression is correlated with gastric cancer aggressiveness by promoting cell migration and invasion［J］. Cancer Sci，2014，105(11):1411-1420.

［15］ Wang YC，Wang JL，Kong X，et al. CD24 mediates gastric carcinogenesis and promotes gastric cancer progression via STAT3 activation［J］.Apoptosis，2014，19(4):643-656.

［16］ Ohkuma M，Haraguchi N，Ishii H，et al. Absence of CD71 transferrin receptor characterizes human gastric adenosquamous carcinoma stem cells［J］. Ann Surg Oncol，2012，19(4):1357-1364.

［17］ Zhao HW，Wang TH，Zheng SW，et al. The research progress of CD90 protein［J］. Chin J Bases Clin General Surg，2012，19(9):1015-1019.趙何偉，王太洪，鄭蘇文，等. CD90 蛋白的研究進(jìn)展［J］. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2012，19(9):1015-1019.

［18］ Jiang J，Zhang Y，Chuai S，et al. Trastuzumab (herceptin)targets gastric cancer stem cells characterized by CD90 phenotype［J］. Oncogene，2012，31(6):671-682.

［19］ Barker N，Huch M，Kujala P，et al. Lgr5(+ve)stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro［J］. Cell Stem Cell，2010，6(1):25-36.

［20］ Xi HQ，Cui JX，Shen WS，et al. Increased expression of Lgr5 is associated with chemotherapy resistance in human gastric cancer［J］.Oncol Rep，2014，32(1):181-188.

［21］ Huang EH，Hynes MJ，Zhang T，et al. Aldehyde dehydrogenase 1 is a marker for normal and malignant human colonic stem cells (SC)and tracks SC overpopulation during colon tumorigenesis［J］. Cancer Res，2009，69(8):3382-3389.

［22］ Katsuno Y，Ehata S，Yashiro M，et al. Coordinated expression of REG4 and aldehyde dehydrogenase 1 regulating tumourigenic capacity of diffuse-type gastric carcinoma-initiating cells is inhibited by TGFbeta［J］. J Pathol，2012，228(3):391-404.

［23］ Keysar SB，Jimeno A. More than markers:biological significance of cancer stem cell-defining molecules［J］. Mol Cancer Ther，2010，9(9):2450-2457.

［24］ Goodell MA. Stem cell identification and sorting using the Hoechst 33342 side population (SP)［J］. Curr Protoc Cytom，2005，Chapter 9:Unit9.18.

［25］ Mimeault M，Batra SK. Functions of tumorigenic and migrating cancer progenitor cells in cancer progression and metastasis and their therapeutic implications ［J］. Cancer Metastasis Rev，2007，26(1):203-214.

［26］ Cai C，Zhu X. The Wnt/beta-catenin pathway regulates self-renewal of cancer stem-like cells in human gastric cancer［J］. Mol Med Rep，2012，5(5):1191-1196.

［27］ Lin ZL，Wu Y，Dai SM，et al. The expression of tumor stem cell and Wnt signaling pathway in gastric cancer［J］. Hei Long Jiang Medical Journal，2013，37(6):408-410.林照亮，吳炎，戴少敏，等. 腫瘤干細(xì)胞及其Wnt 信號(hào)通路在胃癌患者中的表達(dá)［J］. 黑龍江醫(yī)學(xué)，2013，37(6):408-410.

［28］ Ishimoto T，Oshima H，Oshima M，et al. CD44 + slow-cycling tumor cell expansion is triggered by cooperative actions of Wnt and prostaglandin E2 in gastric tumorigenesis［J］. Cancer Sci，2010，101(3):673-678.

［29］ Pacheco-Pinedo EC，Durham AC，Stewart KM，et al. Wnt/beta-catenin signaling accelerates mouse lung tumorigenesis by imposing an embryonic distal progenitor phenotype on lung epithelium［J］. J Clin Invest，2011，121(5):1935-1945.

［30］ Ishimoto T，Sawayama H，Sugihara H，et al. Interaction between gastric cancer stem cells and the tumor microenvironment［J］. J Gastroenterol，2014，49(7):1111-1120.

［31］ Hsu KW，Hsieh RH，Huang KH，et al. Activation of the Notch1/STAT3/Twist signaling axis promotes gastric cancer progression［J］.Carcinogenesis，2012，33(8):1459-1467.

［32］ Fukaya M，Isohata N，Ohta H，et al. Hedgehog signal activation in gastric pit cell and in diffuse-type gastric cancer［J］. Gastroenterology，2006，131(1):14-29.

［33］ Huang L，Peng Q，Gan HZ. Advances in research on relationship between Hedgehog signaling pathway and stomach diseases［J］. Chin J Gastroenterol Hepatol，2012，21(4):193-196.黃利，彭瓊，甘惠中. Hedgehog 信號(hào)通路與胃疾病研究進(jìn)展［J］.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2012，21(4):193-196.

［34］ Yoo YA，Kang MH，Lee HJ，et al. Sonic hedgehog pathway promotes metastasis and lymphangiogenesis via activation of Akt，EMT，and MMP-9 pathway in gastric cancer［J］. Cancer Res，2011，71(22):7061-7070.

［35］ Zhang J，Ge Y，Sun L，et al. Effect of bone morphogenetic protein-2 on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells［J］. Int J Med Sci，2012，9(2):184-192.

［36］ Shen Z，Kauttu T，Cao J，et al. Macrophage coculture enhanced invasion of gastric cancer cells via TGF-beta and BMP pathways［J］.Scand J Gastroenterol，2013，48(4):466-472.

［37］ Maccalli C，Volonte A，Cimminiello C，et al. Immunology of cancer stem cells in solid tumours. A review［J］. Eur J Cancer，2014，50(3):649-655.

［38］ Guan X，Lu ZX，Yang TH. Research progress in the biological characteristics of cancer stem cells ［J］. Chinese Bulletin of Life Sciences，2014，26(2):194-200.關(guān)心，陸智祥，楊同華. 腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其研究進(jìn)展［J］.生命科學(xué)，2014，26(2):194-200.

［39］ Segal NH，Parsons DW，Peggs KS，et al. Epitope landscape in breast and colorectal cancer［J］. Cancer Res，2008，68(3):889-892.

［40］ Han YK，Lee JH，Park GY，et al. A possible usage of a CDK4 inhibitor for breast cancer stem cell-targeted therapy［J］. Biochem Biophys Res Commun，2013，430(4):1329-1333.

［41］ Wicha MS. Targeting self-renewal，an Achilles’heel of cancer stem cells［J］. Nat Med，2014，20(1):14-15.