COTL-1在宮頸癌的表達(dá)及與MVD的相關(guān)性分析

王曉麗 李錦行 張 萍

(青島大學(xué)附屬青島市立醫(yī)院，山東 青島 266011)

COTL-1在宮頸癌的表達(dá)及與MVD的相關(guān)性分析

王曉麗 李錦行 張 萍△

(青島大學(xué)附屬青島市立醫(yī)院，山東 青島 266011)

目的 通過(guò)檢測(cè)毛狀樣蛋白-1 (human coactosin-like protein-1，COTL-1)和微血管密度(MVD)在子宮頸癌中的表達(dá)，探討兩者在子宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及意義。方法 應(yīng)用免疫組化(SP法)檢測(cè)在25例正常宮頸上皮、13例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變I級(jí)(CINI)、22例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變Ⅱ-Ⅲ級(jí)(CINⅡ-Ⅲ)及37例宮頸癌組織中COTL-1的表達(dá)及MVD值。結(jié)果 COTL-1在正常宮頸、CINI、CINⅡ-Ⅲ及宮頸癌組織中，病變的級(jí)別越高，其染色強(qiáng)度越強(qiáng)，各組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.43，P<0.01)。宮頸癌組織中，COTL-1的表達(dá)在中-低分化、深肌層浸潤(rùn)和盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者高于高分化、淺肌層浸潤(rùn)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者(χ2分別為10.56、6.35、 11.13，P<0.05),而與FIGO分期無(wú)關(guān)(χ2=0.84，P>0.05)，COTL-1表達(dá)與MVD呈正相關(guān)(r=0.79，P<0.05)。結(jié)論 COTL-1有可能促進(jìn)了腫瘤新生血管的形成,為宮頸癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供了條件,有望可作為對(duì)宮頸癌患者病程的進(jìn)展和預(yù)后進(jìn)行預(yù)測(cè)的指標(biāo)之一。

宮頸癌；CIN；COTL-1；微血管密度；CD34

子宮頸癌是發(fā)病率以及死亡率均較高的惡性腫瘤，全球每年的發(fā)病人數(shù)超過(guò)40 萬(wàn)[1]。大量的研究發(fā)現(xiàn)，微血管密度(MVD)作為最普遍指標(biāo)，其形態(tài)以及表達(dá)是宮頸癌可能出現(xiàn)轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散的研究指標(biāo)[2]。

毛狀樣蛋白-1 (human coactosin-like protein-1，COTL-1)作為肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白中的一種，可以調(diào)控白細(xì)胞的趨化、吞噬等炎癥反應(yīng)，并能夠上調(diào)5-脂氧合酶(5-lipoxygenase，5-LO)同纖維狀肌動(dòng)蛋白(fibrousactin，F(xiàn)-actin)的表達(dá)[3]，前者可能增加5-LO主要下游產(chǎn)物5-經(jīng)二十碳四烯酸(5-HETE)和白三烯B4(LTB4)的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)了血管生成及擴(kuò)張，其對(duì)腫瘤的發(fā)生可能起了潛在的促進(jìn)作用。本文通過(guò)檢測(cè)COTL-1和MVD(以 CD34 標(biāo)記)在正常宮頸上皮、CINI、CINⅡ-Ⅲ以及宮頸癌中的表達(dá)，探討COTL-1在宮頸病變進(jìn)展過(guò)程中的表達(dá)情況，與MVD變化之間的關(guān)系，為臨床治療提供新方向。

1 資料和方法

1.1 資料

本文選擇2012年1月至2013年6月在千佛山醫(yī)院接受治療的門(mén)診及住院患者活檢標(biāo)本及子宮頸病變手術(shù)標(biāo)本共97例，包括正常宮頸組25例，CINⅠ組13例，CINⅡ-Ⅲ組22例及宮頸癌組37例。CIN分級(jí)則依據(jù)婦產(chǎn)科學(xué)第八版的診斷標(biāo)準(zhǔn)。宮頸癌患者按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2009年所制定的臨床分期法進(jìn)行分期。所有患者術(shù)前均未行化療、放療或免疫抑制劑治療，無(wú)其他疾病， 均經(jīng)病理檢查證實(shí)診斷。其中高分化13例，中-低分化24例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者15例，陰性者22例。淺肌層浸潤(rùn)者14例，深浸潤(rùn)者23例。

1.2 方法

采用免疫組化SP法,實(shí)驗(yàn)操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用已知的陽(yáng)性切片作為對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,檢測(cè)宮頸不同病變組織中COTL-1的表達(dá)情況,并用CD34染色，計(jì)數(shù)MVD。兔抗人COTL-1(1∶200)多克隆的抗體購(gòu)自Abcam公司，鼠抗人CD34(1∶150)單克隆的抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3 結(jié)果判定

組織經(jīng)染色制片后，COTL-1陽(yáng)性著色主要分布于胞漿，呈棕黃色顆粒狀或者片狀。參照Fromowitz評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)切片整張的染色情況,在腫瘤區(qū),選取光鏡下(×400) 陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)的5個(gè)高倍視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞數(shù)的比例，0分：陽(yáng)性細(xì)胞率≤25%，1分：26%～50%，2分：51%～75%，3分：>75%；再按照多數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色強(qiáng)度予以記分,0分：無(wú)顯色，1分:淺棕黃色，2分：棕黃色，3分：棕褐色。將上述兩項(xiàng)的分?jǐn)?shù)做和，0分：“-”，1～2分：“+”，3～4分：“，5～6分：“”。MVD檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)則參照veidner等報(bào)道的方法[4]，用CD34染色計(jì)數(shù)MVD，在高倍鏡下對(duì)不重疊的5個(gè)視野的微血管計(jì)數(shù)，取其平均值,其中帶有較厚肌層、管腔大于6個(gè)紅細(xì)胞直徑大小不計(jì)數(shù)，且各個(gè)標(biāo)本取其平均值來(lái)做最后MVD計(jì)數(shù)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0分析軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

2.1 COTL-1、MVD在正常宮頸、CIN、宮頸癌中的表達(dá)比較

COTL-1蛋白染色呈棕黃色或者棕褐色顆粒，主要定位子宮頸病變中細(xì)胞胞漿，極少數(shù)可表達(dá)于細(xì)胞膜。經(jīng)趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)，COTL-1的染色強(qiáng)度隨著宮頸病變級(jí)別的升高逐漸增加，各組間進(jìn)行比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。鏡下MVD計(jì)數(shù)結(jié)果顯示：MVD計(jì)數(shù)在正常宮頸組、CIN組以及宮頸癌組中，其表達(dá)呈逐漸降增高趨勢(shì)，總體間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=32.56,P=0.00)，各組與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 COTL-1、MVD在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中的表達(dá)比較

2.2 宮頸癌組織不同臨床病理分類(lèi)中COTL-1的表達(dá)及MVD計(jì)數(shù)的變化

COTL-1表達(dá)與宮頸癌的組織分化程度、間質(zhì)浸潤(rùn)深度和盆腔淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。而與臨床分期無(wú)關(guān)。MVD與宮頸癌的組織分化程度、盆腔淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān),與宮頸癌組織不同浸潤(rùn)程度、臨床分期無(wú)關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 COTL-1、MVD與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 COTL-1和 MVD在宮頸癌中的表達(dá)相關(guān)性分析

結(jié)果顯示：COTL-1蛋白表達(dá)與MVD之間存在正相關(guān)(r=0.79，P<0.05)。見(jiàn)下表3。

表3 COTL-1與MVD在宮頸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

腫瘤的發(fā)病率和死亡率在現(xiàn)代社會(huì)中有逐年升高的趨勢(shì)，對(duì)人類(lèi)的身體健康和精神壓力方面產(chǎn)生嚴(yán)重的影響[5]。侵襲、轉(zhuǎn)移和局部的復(fù)發(fā)性是宮頸癌患者共同的生物學(xué)行為特征，在宮頸癌的治療過(guò)程中，也是至今影響其療效以及患者預(yù)后的主要因素。Hye-Cheol等[6]通過(guò)蛋白組學(xué)的方法研究發(fā)現(xiàn)在小細(xì)胞肺癌中COTL-1的高表達(dá)，基因定位于17p11.2,線性化程度較高。由142個(gè)氨基酸殘基所組成的?？赏ㄟ^(guò)結(jié)構(gòu)的重構(gòu)來(lái)改變細(xì)胞凋亡和侵襲等表型，在腫瘤發(fā)生中可能起促進(jìn)作用。

本文結(jié)果顯示：COTL-1在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率依次升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示COTL-1在宮頸癌的發(fā)生及演進(jìn)發(fā)展中起著重要的作用。宮頸癌患者中，中-低分化組COTL-1表達(dá)比高分化組明顯增高；間質(zhì)浸潤(rùn)程度深者比間質(zhì)浸潤(rùn)程度淺者高；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高。說(shuō)明了腫瘤的組織分化的程度越差,間質(zhì)浸潤(rùn)的越深，向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的概率越高,而 COTL-1的表達(dá)就越高。另外,本文MVD的計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,在正常宮頸、CIN以及宮頸癌組織中逐漸升高,說(shuō)明在宮頸癌發(fā)生過(guò)程中微血管生成起著重要的作用。

COTL-1的致瘤原因可能與以下因素有關(guān)：1)其空間結(jié)構(gòu)主要由6條混合的β-折疊鏈和2個(gè)疏水核心構(gòu)成，可以通過(guò)它不同的結(jié)合位點(diǎn)而上調(diào)F-actin和5-LO的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控白細(xì)胞的趨化、黏附和吞噬作用。2)能夠誘使白細(xì)胞發(fā)生限制性腫瘤反應(yīng)性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicity T lymphocyte,CTL),進(jìn)而參與腫瘤細(xì)胞的特異性免疫反應(yīng)[7]。3)COTL-1上調(diào)5-LO的表達(dá)后,有可能引起其主要下游產(chǎn)物5-HETE及LTB4的表達(dá)增多，同時(shí)促進(jìn)了血管生成，血管擴(kuò)張，引起了腫瘤的發(fā)展。COTL-1可能是宮頸癌和宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變多種病理過(guò)程的關(guān)鍵蛋白，通過(guò)某種機(jī)制促使宮頸病灶中新生血管的增加，進(jìn)而使CD34在宮頸癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)。對(duì)于腫瘤的轉(zhuǎn)移來(lái)說(shuō)，血管的生成是必需的步驟,但是新生血管上基膜的高通透性、不完整性以及在血管生成的同時(shí)腫瘤周?chē)?xì)淋巴管的生成,可能是加速轉(zhuǎn)移的主要因素。

本文結(jié)果顯示：COTL-1的表達(dá)與MVD 呈現(xiàn)正相關(guān),COTL-1表達(dá)陰性的部位MVD值低,COTL-1表達(dá)陽(yáng)性的部位MVD值高，COTL-1可能通過(guò)某種途徑作用于血管,促進(jìn)血管增生,另一方面也可能是高轉(zhuǎn)移性的腫瘤細(xì)胞周?chē)弑磉_(dá)腫瘤血管,同時(shí)促進(jìn)了細(xì)胞-細(xì)胞之間的運(yùn)動(dòng),引起了COTL-1的增高。從CIN到浸潤(rùn)型癌是一緩慢而又漸進(jìn)的過(guò)程，其中在宮頸癌的發(fā)展過(guò)程中，血管的形成是關(guān)鍵步驟，持續(xù)的血液供應(yīng)是腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，如果沒(méi)有新生血管，腫瘤組織因?yàn)槿毖毖醵L(zhǎng)緩慢或不再繼續(xù)生長(zhǎng)[8]。CD34標(biāo)記的MVD是表征微血管密度的重要指標(biāo)，其高表達(dá)是微血管密度增多，組織需氧、需血液的重要體現(xiàn)[9]。對(duì)于腫瘤組織中微血管數(shù)量和腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移之間關(guān)系的研究表明,血管的生成與腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等密切相關(guān)[10]。張金標(biāo)等[11]研究顯示，COTL-1表達(dá)的程度同肺癌患者的性別、臨床分期、年齡、組織類(lèi)別和淋巴的轉(zhuǎn)移等均無(wú)相關(guān)性，而與肺癌的分化程度有著相關(guān)性。

通過(guò)對(duì)宮頸癌臨床病理特征的分析，我們可以推斷，COTL-1的高表達(dá)可能是使宮頸癌具有高轉(zhuǎn)移、高侵襲能力的分子基礎(chǔ)，可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤形成新生血管，進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移。檢測(cè)COTL-1的表達(dá)對(duì)于了解腫瘤的侵襲性、發(fā)展程度及預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)有重要作用，為腫瘤的生物學(xué)治療提供了新的思路和途徑。

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10.3969/j.issn.1000-9760.2015.06.009

R737.33

B

1000-9760(2015)12-412-03

2015-08-28)

△ [通信作者]張萍，E-mail: zpskx001@163.com