不同劑量吡格列酮對(duì)膀胱癌上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響*

舒 暢，吳振啟

(1.湖北省黃石市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 435000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院，湖北十堰 442000)

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·論 著·

不同劑量吡格列酮對(duì)膀胱癌上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響*

目的 研究不同劑量吡格列酮對(duì)膀胱癌上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的干預(yù)效果。方法 選取膀胱癌患者60例，將其隨機(jī)分為低劑量組(n=30)和高劑量組(n=30)，分別采用1 μmol/L和10 μmol/L吡格列酮進(jìn)行干預(yù)治療。分別在干預(yù)治療1、2、3、4 d時(shí)檢測(cè)膀胱癌上皮細(xì)胞存活率，在干預(yù)治療4 d時(shí)檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)mRNA和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)mRNA表達(dá)水平及Ⅲ型膠原濃度，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 隨著干預(yù)治療時(shí)間的延長(zhǎng)，兩組患者膀胱癌上皮細(xì)胞存活率均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且在干預(yù)治療2、3、4 d時(shí)高劑量組膀胱癌上皮細(xì)胞存活率低于低劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高劑量組患者的α-SMA mRNA、CTGF mRNA表達(dá)水平和Ⅲ型膠原濃度均顯著低于低劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 較高劑量的吡格列酮可能通過(guò)進(jìn)一步降低α-SMA mRNA、CTGF mRNA表達(dá)水平和Ⅲ型膠原濃度，從而誘導(dǎo)膀胱癌上皮細(xì)胞的凋亡，效果優(yōu)于低劑量吡格列酮。

吡格列酮； 膀胱癌； 上皮細(xì)胞； 凋亡

膀胱癌是發(fā)生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤,其中膀胱尿路上皮癌是膀胱癌的常見(jiàn)類型，約占90%。臨床中主要以化療、手術(shù)或二者結(jié)合為主，盡管短期效果比較顯著，但是遠(yuǎn)期預(yù)后不甚理想，5年生存率僅約30%[1]。如何更加有效地治療改善患者癥狀、提高生存率成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。隨著癌細(xì)胞干預(yù)技術(shù)的不斷發(fā)展，應(yīng)用吡格列酮來(lái)抑制膀胱癌上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡成為臨床治療膀胱癌的新思路。吡格列酮應(yīng)用在乳腺癌、肺癌等腫瘤細(xì)胞抑制研究中取得了比較理想的臨床效果[2]，但膀胱癌上皮細(xì)胞與吡格列酮的干預(yù)效果研究較少。本研究選取不同劑量吡格列酮對(duì)膀胱癌上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，為吡格列酮在膀胱癌的臨床治療中提供了新的思路，且取得一定的治療效果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 連續(xù)選取2013年5月至2014年5月入本院診斷為膀胱癌患者共60例，經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者知情同意后，將其隨機(jī)分為低劑量組和高劑量組，每組各30例，其中低劑量組男性18例，女性12例，年齡38～65歲，平均(51.5±6.2)歲，病程6個(gè)月至2年，平均(1.3±0.4)年；臨床表現(xiàn)：膀胱刺激征為主(尿頻、尿急和尿痛)14例，排尿困難7例，血尿9例。高劑量組男性17例，女性13例，年齡36～74歲，平均(52.8±7.3)歲，病程8個(gè)月至4年，平均(1.4±0.8)年；臨床表現(xiàn)：膀胱刺激征為主16例，排尿困難6例，血尿8例。兩組在性別、年齡、病程和臨床表現(xiàn)等方面差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 兩組患者均采取吡格列酮(中美華東制藥公司生產(chǎn))干預(yù)治療，其中低劑量組應(yīng)用吡格列酮1 μmol/L，高劑量組應(yīng)用10 μmol/L。使用RPMI1640培養(yǎng)液將吡格列酮稀釋到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，之后抽取膀胱癌患者上皮細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)研究[3]。

1.3 觀察指標(biāo) 細(xì)胞存活率采用自動(dòng)酶檢測(cè)儀對(duì)樣本數(shù)量進(jìn)行讀取并計(jì)算3次檢測(cè)結(jié)果平均值作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別檢測(cè)干預(yù)治療1、2、3、4 d時(shí)兩組的膀胱癌上皮細(xì)胞存活率。Ⅲ型膠原濃度采用ELISA法檢測(cè)，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒(大連泛邦公司生產(chǎn))說(shuō)明書進(jìn)行。α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)mRNA和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)mRNA采用免疫組化SP法檢測(cè)，其試劑盒由北京中衫生物技術(shù)有限公司提供，以β-actin為內(nèi)參基因，檢測(cè)結(jié)果分別以α-SMA mRNA和CTGF mRNA與β-actin的比值表示。在干預(yù)治療4 d時(shí)檢測(cè)兩組α-SMA mRNA、CTGF mRNA表達(dá)水平及Ⅲ型膠原濃度。

2 結(jié) 果

2.1 不同干預(yù)治療時(shí)間兩組患者膀胱癌上皮細(xì)胞存活率比較 干預(yù)治療1 d，兩組患者的上皮細(xì)胞存活率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，兩組的上皮細(xì)胞存活率較干預(yù)治療1 d時(shí)有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且高劑量組在干預(yù)治療2、3、4 d時(shí)上皮細(xì)胞存活率明顯低于低劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同干預(yù)治療時(shí)間兩組患者膀胱癌上皮細(xì)胞存活率比較(%)

注：與本組干預(yù)治療1 d時(shí)比較，*P<0.05；與低劑量組比較，#P<0.05。

2.2 兩組患者α-SMA mRNA、CTGF mRNA、Ⅲ型膠原檢測(cè)結(jié)果比較 高劑量組患者的α-SMA mRNA、CTGF mRNA表達(dá)水平及Ⅲ型膠原濃度均顯著低于低劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組患者α-SMA mRNA、CTGF mRNA、Ⅲ型膠原檢測(cè)結(jié)果比較

3 討 論

膀胱尿路上皮癌可分非肌層和肌層浸潤(rùn)性兩種，臨床主要以經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)、化療或者化療+手術(shù)治療為主，化療有效率僅在60%左右，手術(shù)治療的5年生存率與化療效果相當(dāng)，預(yù)后均不甚理想。近幾年專家開(kāi)始從膀胱癌上皮細(xì)胞生長(zhǎng)作為突破點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)吡格列酮能有效抑制膀胱癌上皮細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡，輔助手術(shù)或化療手段，顯著提高了患者臨床治療效果，延長(zhǎng)其生命，提高了生存質(zhì)量。

本研究分別采用1 μmol/L與10 μmol/L兩種劑量對(duì)膀胱癌患者進(jìn)行干預(yù)治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：膀胱癌上皮細(xì)胞的存活率與吡格列酮的劑量呈負(fù)相關(guān)。且有研究報(bào)道膀胱癌上皮細(xì)胞凋亡速度與數(shù)量與吡格列酮的劑量呈正相關(guān)[3-4]。但是，實(shí)際治療中吡格列酮?jiǎng)┝康倪x擇需要根據(jù)膀胱癌患者病情進(jìn)展及自身實(shí)際情況，尋找合適的劑量，以提高臨床治療效果和避免對(duì)身體造成不可逆性損傷[5-7]。本研究還發(fā)現(xiàn)，α-SMA mRNA、CTGF mRNA表達(dá)水平和Ⅲ型膠原濃度與吡格列酮?jiǎng)┝恳渤守?fù)相關(guān)，說(shuō)明較高劑量的吡格列酮可能通過(guò)進(jìn)一步降低α-SMA mRNA、CTGF mRNA表達(dá)水平和Ⅲ型膠原濃度，從而誘導(dǎo)膀胱癌上皮細(xì)胞凋亡，效果優(yōu)于低劑量[8-9]。

目前關(guān)于不同劑量吡格列酮對(duì)膀胱癌上皮細(xì)胞生長(zhǎng)影響的研究資料還較少，大劑量吡格列酮的應(yīng)用安全性尚缺乏相關(guān)文獻(xiàn)支持，其遠(yuǎn)期效果仍然需要時(shí)間驗(yàn)證。本研究所得出的結(jié)論從病理學(xué)上具有一定的可行性，臨床短期效果也較理想，且無(wú)明顯不良反應(yīng)事件發(fā)生，可能與本研究樣本量較小，觀察時(shí)間較短有關(guān)。因此，在臨床應(yīng)用安全性上還無(wú)法得出準(zhǔn)確結(jié)果，還需要更多的基礎(chǔ)研究和大規(guī)模臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

[1]劉芳,茍蓉,黃俊,等.C3a、C5a及其受體拮抗劑對(duì)腎小管上皮細(xì)胞β-catenin表達(dá)的影響[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2011,42(1):74-77.

[2]朱啟偉,王浩,葉平,等.吡格列酮對(duì)缺氧/復(fù)氧后新生大鼠心肌細(xì)胞線粒體膜電位的影響[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2011,42(6):784-788.

[3]李里,朱迪,孫遜.轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的腎靶向雷公藤內(nèi)酯醇前體藥物TPS-L-Carnitine的合成及體外細(xì)胞攝取研究[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2012,43(6):936-940.

[4]朱建寧,吳開(kāi)杰,管振鋒,等.DAB2IP在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性研究[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2014,45(4):591-594.

[5]伍仕敏,艾洪武,熊焰,等.吡格列酮對(duì)HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2011,27(7):975-981.

[6]萬(wàn)政強(qiáng),陳晨,伏林山,等.吡格列酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制研究[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2013,32(1):42-45.

[7]Koga H,Selvendiran K,Sivakumar R,et al.PPARγ potentiates anticancer effects of gemcitabine on human pancreatic cancer cells[J].Int J Oncol,2012,40(3):679-685.

[8]Fu H,Zhang J,Pan J,et al.Chemoprevention of lung carcinogenesis by the combination of aerosolized budesonide and oral pioglitazone in A/J mice[J].Mol Carcinog,2011,50(12):913-921.

[9]李書芳.吡格列酮對(duì)2型糖尿病大鼠腎臟雷帕霉素靶蛋白表達(dá)的影響[D].南昌：南昌大學(xué)，2011.

(收稿日期：2015-01-25 修回日期：2015-04-15)

Effects of different dose of pioglitazone on growth of epithelium cells in patients with bladder cancer*

SHUChang1，WUZhen-qi2

(1.DepartmentofOncology,HuangshiMunicipalCentralHospital,Huangshi,Hubei435000,China;2.HubeiUniversityofMedicine,Shiyan,Hubei442000,China)

Objective To study the interventional effects of different doses of pioglitazone on the growth of epithelium cells in the patients with bladder cancer.Methods A total of 60 cases of bladder cancer were selected and randomly divided into the low dose group(n=30) and the high dose group(n=30).1 μmol/L of pioglitazone and 10 μmol/L of pioglitazone were respectively adopted to conduct the interventional therapy in the two groups.The survival rate of bladder cancer epithelium cells was detected on 1,2,3,4 d of interventional therapy.The expression levels of α-SMA mRNA and CTGF mRNA,and collagen Ⅲ level were detected on 4 d of interventional therapy.The results were performed the statistical analysis.Results the cells survival rate of bladder cancer epithelium cells in the two groups was significantly decreased along with the interventional therapy duration extending,and the difference was statistically significant(P<0.05),moreover the survival rates of bladder cancer epithelium cells on 2,3,4 d of interventional therapy in the high dose group were significantly lower than those in the low dose group,the difference was statistically significant(P<0.05).The expression levels of α-SMA mRNA,CTGF mRNA and collagen Ⅲ level in the high dose group were significantly lower than those in the low dose group,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion Higher dose of pioglitazone has better effect than low dose of pioglitazone,which may further reduce the expression levels of α-SMA mRNA and CTGF mRNA,and collagen Ⅲ level,thus induces the apoptosis of bladder cancer epithelial cells.

pioglitazone; bladder cancer; epithelium cell; apoptosis

2015-03-15

2015-07-15)

湖北省衛(wèi)生廳科研基金資助項(xiàng)目(JX3B27)。

舒暢，男，碩士，住院醫(yī)師，主要從事腫瘤相關(guān)研究。

舒 暢1，吳振啟2

(1.湖北省黃石市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 435000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院，湖北十堰 442000)

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.026

A

1672-9455(2015)19-2878-02