藥對(duì)陳皮—干姜與其單味藥揮發(fā)性成分的比較分析①

李淑賢，牟璐璐，吳洪斌，陸洪軍

(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

?

藥對(duì)陳皮—干姜與其單味藥揮發(fā)性成分的比較分析①

李淑賢1，牟璐璐1，吳洪斌1，陸洪軍2

(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：比較分析藥對(duì)陳皮-干姜與其單味藥的揮發(fā)性成分。方法：采用水蒸氣蒸餾法分別提取陳皮，干姜藥材及藥對(duì)揮發(fā)性成分，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對(duì)各樣品中的揮發(fā)性成分進(jìn)行比較分析，并采用峰面積歸一化法計(jì)算百分含量。結(jié)果：從陳皮揮發(fā)性成分中檢出的4-異丙基甲苯、D-檸檬烯、壬醛、大根香葉烯等成分和干姜揮發(fā)性成分中檢出的甲基庚烯酮、α-法尼烯、5-甲基-2-(1-甲基乙烯基)-4-己烯-1-醇乙醇酯、α-長(zhǎng)葉蒎烯等成分在藥對(duì)揮發(fā)油中均未檢出；而藥對(duì)陳皮-干姜中新增成分冰片、2-甲基丙酸-3，7-二甲基-2，6-辛二醇酯、β-桉葉醇、肉桂苯氨基甲酸酯等。結(jié)論：藥對(duì)陳皮-干姜配伍后揮發(fā)性化學(xué)成分與單味藥相比有明顯差異。

藥對(duì)；陳皮；干姜；揮發(fā)性成分；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

藥對(duì)又稱對(duì)藥，是中藥配伍的基本單元，是中藥組方配伍的核心，是連接單味藥和方劑藥的橋梁，加強(qiáng)藥對(duì)的配伍規(guī)律研究是解決中藥復(fù)方配伍理論這一核心問(wèn)題的基礎(chǔ)和重要切入點(diǎn)[1，2]。藥對(duì)與其單味藥揮發(fā)性成分的比較研究，是藥對(duì)研究中的一項(xiàng)重要內(nèi)容[3]。陳皮為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥成熟果皮，其性溫，味苦辛，歸肺，脾經(jīng)[4]。陳皮的有效成分主要為黃酮類(lèi)化合物，具有較強(qiáng)的抗氧化活性[5]。干姜為姜科植物姜的干燥根莖，性溫、辛，多用于溫中散寒、溫肺化飲。其揮發(fā)油中含有姜烯、水芹烯等多種成分[6，7]。干姜具有抗血小板聚集、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用[8，9]。藥對(duì)陳皮-干姜的單味藥揮發(fā)性成分的研究較廣泛，但藥對(duì)的揮發(fā)性成分的研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用GC-MS技術(shù)對(duì)藥對(duì)及單味藥的揮發(fā)性成分進(jìn)行分離檢測(cè)，同時(shí)對(duì)比其揮發(fā)性成分的變化，為中藥配伍理論提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890A-5975型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；標(biāo)準(zhǔn)玻璃揮發(fā)油提取器(上海滿賢經(jīng)貿(mào)有限公司)；RE52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)；中草藥粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；陳皮和干姜藥材(購(gòu)自佳木斯市金天大藥房)，經(jīng)佳木斯大學(xué)藥學(xué)院杜娟副教授鑒定，分別為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮及姜科多年生草本植物姜ZingiberofficinaleRosc. 的干燥根莖。正己烷(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)等其他所用試劑均為分析純；蒸餾水為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 揮發(fā)油提取與供試液制備

陳皮和干姜分別粉碎，過(guò)二號(hào)篩成粗粉。取單味藥粉末各25g混合，作為藥對(duì)提取。分別取單味藥粉末50g，用作單味藥提取。按《中國(guó)藥典》(2010版)一部附錄“揮發(fā)油提取法”甲法進(jìn)行，用正己烷洗滌揮發(fā)油提取器，并加入揮發(fā)油中，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮除去溶劑，將所得樣品進(jìn)行避光冷藏。GC-MS測(cè)定前，藥對(duì)揮發(fā)油、單味藥揮發(fā)油分別用正己烷稀釋成10倍體積。

1.3GC-MS測(cè)定

色譜條件：HP-5MS色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)，接口溫度280℃，進(jìn)樣口溫度280℃；載氣為氦氣(99.999%)，分流比為50:1，進(jìn)樣量1uL。質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源(EI)，離子源溫度240℃，接口溫度280℃；電子能量為70Ev，四級(jí)桿溫度為150℃，質(zhì)量掃描范圍為30～450Amu。升溫程序：以50℃柱溫為起始溫度，以4℃/min速率升至140℃，恒溫15min，再以4℃/min速率升至260℃。

2 結(jié)果

將揮發(fā)油供試液進(jìn)行GC-MS檢測(cè)，得到的總離子流圖，見(jiàn)圖1-圖3。質(zhì)譜圖經(jīng)NIST08譜庫(kù)進(jìn)行檢索，并參考質(zhì)譜的裂解規(guī)律解析確定化合物，并采用峰面積歸一化法測(cè)定各成分的相對(duì)百分含量。采用水蒸氣蒸餾法提取的陳皮揮發(fā)油中共鑒定了28種成分，占全油的89.2%。其中，D-檸檬烯、壬醛、1-甲基-2,4-二(丙-1-烯-2-基)-1-乙烯基環(huán)己烷、大根香葉烯等成分含量較高，分別占44.7%、5.37%、4.35%和3.36%；干姜揮發(fā)油中共鑒定出45種成分，占全油的84.4%，其中乙酸橙花酯、3-(1,5-二甲基-4-己烯基)-6-亞甲基環(huán)己烯、姜黃素和3-蒈烯等成分含量較高，分別占22%、12.8%、6.43%和5.80%；藥對(duì)中揮發(fā)油共鑒定出44種成分，占全油的87.27%，其中新增成分反式-2-(2-戊烯基)呋喃和β-柏木烯含量較高，分別占34.8%和18.1%。

圖1 藥對(duì)揮發(fā)性成分總離子流圖

圖2 陳皮揮發(fā)性成分總離子流圖

圖3 干姜揮發(fā)性成分總離子流圖

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)于藥對(duì)陳皮-干姜與其單味藥揮發(fā)油成分進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明藥對(duì)揮發(fā)油中，來(lái)自與干姜的化學(xué)成分?jǐn)?shù)量略多于來(lái)自陳皮的數(shù)量，單味藥材陳皮和干姜中部分揮發(fā)油成分在藥對(duì)中未能檢出，其原因可能與其在藥對(duì)揮發(fā)油中所占比例過(guò)低或與其他成分反應(yīng)有關(guān)。藥對(duì)中新增成分可能是由于陳皮與干姜在合煎的過(guò)程中發(fā)生了氧化反應(yīng)、還原反應(yīng)、水解反應(yīng)和增溶助溶等物理和化學(xué)變化產(chǎn)生的[10]。藥對(duì)中一些揮發(fā)油含量明顯低于單味藥

的，一些揮發(fā)油的含量明顯高于單味藥的，陳皮、干姜藥對(duì)配伍對(duì)揮發(fā)油的成分和含量都有一定的影響，藥對(duì)中其種類(lèi)與含量變化并不等于兩種單味藥的簡(jiǎn)單相加[11]。通過(guò)氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)出揮發(fā)油在配伍中發(fā)生了一定的變化，該變化是否是藥對(duì)配伍后增加療效的物質(zhì)基礎(chǔ)仍需進(jìn)一步探討。GC-MS技術(shù)的應(yīng)用，對(duì)于得到單味藥與藥對(duì)揮發(fā)油成分的變化提供了有效的手段，有利于進(jìn)一步研究單味藥配伍后成分變化的機(jī)制，進(jìn)一步促進(jìn)中藥藥理的研究。

[1]孫洋，陳婷，徐強(qiáng).從藥對(duì)的角度考慮復(fù)方配伍規(guī)律[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2004，6(1)：17-2

[2]陳建忠，李 ，肖建平，等.藥對(duì)澤瀉-白術(shù)與其單味藥揮發(fā)油成分的比較分析[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，22(4)：43-46

[3]LiXR,LiangYZ,ZhouT,eral.Comparativeanalysisofvolatileconstituentsbet-weenrecipejingfangsananditssingleherbsbyGC-MScombinedwithalternativemovingwindowfactoranalysismethod[J].JSepSci, 2009, 32(2):258-266

[4]于蓮，焦淑清，李玉環(huán)，等.陳皮揮發(fā)油超臨界CO2萃取工藝的研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2005，28(5)：5-6

[5]朱秋雙，趙玉珍，張明遠(yuǎn)，等.白術(shù)芍藥散抗腹瀉藥效實(shí)驗(yàn)研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2007，30 (1)：14-15

[6]王建光，楊新宇，葉輝，等.姜棗合用對(duì)D-半乳糖致衰小鼠鈣穩(wěn)態(tài)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2005，28(2)：3-4

[7]劉金環(huán)，楊玉琴， 秦利芬，等.干姜中揮發(fā)性成分的GC指紋圖譜研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(1)：153-156

[8]黃秀榕，祁明信，王勇，等.十一種歸肝經(jīng)明目中藥對(duì)Fenton反應(yīng)所致晶狀體氧化損傷防護(hù)作用的研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(10)：16501

[9]營(yíng)大禮.干姜化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2008，19(18)：1435-1436

[10]王艷艷，王團(tuán)結(jié)，宿樹(shù)蘭. 乳香、沒(méi)藥藥對(duì)配伍揮發(fā)油成分的GC-MS分析[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2011，25(2)：31-34

[11]佘金明，鐘明，梁逸曾，等.藥對(duì)桂枝白術(shù)及其單味藥中揮發(fā)油成分GC-MS的比較分析[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2011，42(1)：22-27

Comparative Analysis of Volatile Constituents in Herbal Pair Tangerine Peel-Rhizoma Zingiberis and Its Single Herb by GC-MS·

LIShu-xian1,MOULu-lu1,WUHong-bin1,LUHong-jun2

(1.The Medical School of Jiamusi University,Jiamusi 154007,China;2.The First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003,China)

Objective: To analyze the volatile constituents in herbal pair Tangerine Peel-Rhizoma Zingiberis and its single herb. Methods: The essential oil of Tangerine Peel, Rhizoma Zingiberis and their herbal pair were extracted by steam distillation. The volatile constituents were comparative analyzed by gas chromatography-mass spectro- metry(GC-MS). Peak area normalization method was used to calculate. Results: The volatile components like 1-methyl-4-(1-methylethyl)-Benzene, D-Limonene, Nonanal,Germ-acrene from Tangerine Peel and Methylheptenone, α-farnesene,5-methyl-2-(1-methyl vinyl)-4-hexene-1-alcohol acetate, α-Longipinene from Rhizoma Zingiberis were not detected in herbal pair.The new volatile components in herbal pair included Borneol,2-methyl-3 propionate,7-dimethyl-2,6-diol esters, β-Eudesmol, Cinnamyl carbanilate and so on. Conclusions: There are big differences in the composition of volatile between herbal pair and the single herb.

herbal pair;tangerine peel; Rhizoma Zingiberis; volatile components; Gas chromatography - mass spectrometry(GC-MS)

佳木斯大學(xué)科學(xué)技術(shù)重點(diǎn)項(xiàng)目，編號(hào)：Sz2011-012。

李淑賢(1970～)女，黑龍江寶清人，博士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，碩士研究生導(dǎo)師。

陸洪軍(1970～)男，黑龍江樺南人，碩士，副主任醫(yī)師。E-mail：langtt02@163.com。

R

A

1008-0104(2015)03-0033-02

2015-01-21)