中藥有效成分的含量測(cè)定方法概述

徐楊璐，李守拙（河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000）

中藥有效成分的含量測(cè)定方法概述

徐楊璐，李守拙△
（河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000）

中藥；有效成分；含量測(cè)定

中藥材和中藥制劑所含成分復(fù)雜，在制定藥材及中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，一般以其具有生理活性的主要化學(xué)成分作為質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制指標(biāo)。常用于中藥有效成分含量測(cè)定的方法有紫外-可見(jiàn)分光光度法、高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、紅外光譜法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、薄層色譜掃描法、核磁共振波譜法等，有效成分含量測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性是中藥質(zhì)量控制中關(guān)鍵的一部分，且不同的含量測(cè)定方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)該根據(jù)不同的檢測(cè)指標(biāo)選擇不同的檢測(cè)方法。本文就常用的中藥有效成分含量測(cè)定方法原理及其應(yīng)用作一概述。

1 紫外-可見(jiàn)分光光度法

紫外-可見(jiàn)分光光度法是研究物質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光區(qū)（200-800nm）分子吸收光譜的分析方法，主要用于測(cè)定中藥中總皂苷、總生物堿、總黃酮等的含量。張茹萍等［1］采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定了雷公藤3個(gè)有效部位的含量，結(jié)果顯示：不同產(chǎn)地的雷公藤藥材總二萜內(nèi)酯、總生物堿及總?cè)?個(gè)有效部位的含量差異懸殊，建立的該方法穩(wěn)定性、重復(fù)性均良好。孫燕等［2］進(jìn)行了酸棗仁中總生物堿含量的紫外分光光度法測(cè)定，以蓮心堿為對(duì)照品，檢測(cè)波長(zhǎng)282nm，結(jié)果表明：該含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于酸棗仁中總生物堿部位的含量測(cè)定及質(zhì)量控制。

2 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有分離效率高、選擇性好、分析速度快、檢測(cè)靈敏度高和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，可用于分析樣品中高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定性、大分子量的有效成分，是中藥有效成分含量測(cè)定中應(yīng)用較為廣泛的一種分析方法［3］。

檢測(cè)器是高效液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一，主要包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器等。光電二極管陣列檢測(cè)器也屬于紫外檢測(cè)器。采用高效液相色譜法進(jìn)行中藥有效成分含量測(cè)定時(shí)，應(yīng)根據(jù)被測(cè)成分的特點(diǎn)選擇不同的檢測(cè)器。

2.1 紫外檢測(cè)器 是高效液相色譜中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器，針對(duì)的是有紫外吸收的物質(zhì)，它靈敏度高，噪音低，線性范圍寬，對(duì)流速和溫度的波動(dòng)不靈敏。謝寶剛等［4］采用HPLC-UV法測(cè)定六味地黃制劑中丹皮酚與熊果酸的含量，結(jié)果：在215nm波長(zhǎng)處各成分線性關(guān)系良好，所建立的方法使樣品中丹皮酚、熊果酸與其它色譜峰能夠有效分離，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。紫外檢測(cè)器能夠提供待測(cè)物的三維光譜-色譜圖，其中吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量，近年來(lái)逐漸被用于中藥成分的含量測(cè)定。李偉等［5］采用HPLC-DAD法同時(shí)分析甘草中7種有效成分的含量，檢測(cè)波長(zhǎng)按時(shí)間序列采樣，結(jié)果表明：方法準(zhǔn)確、靈敏度高，可用于甘草藥材質(zhì)量的評(píng)價(jià)。

2.2 熒光檢測(cè)器 靈敏度比紫外檢測(cè)器高，選擇性好，但只適合于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的檢測(cè)。劉書(shū)宇等［6］采用免疫親和柱凈化，在線柱后光化學(xué)衍生HPLC-FLD測(cè)定蓮子中黃曲霉毒素B1，B2等的含量，該方法靈敏度高，重復(fù)性好。栗建明等［7］也采用高效液相色譜柱后衍生法測(cè)定了果實(shí)類藥材中的黃曲霉毒素的含量。

2.3 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 屬于通用型檢測(cè)器，適用于揮發(fā)性低于流動(dòng)相的組分，可用于無(wú)紫外吸收或紫外末端吸收、無(wú)熒光的化合物的檢測(cè)。張新新等［8］采用HPLC-ELSD法同時(shí)測(cè)定盾葉薯蕷根莖中5個(gè)皂苷的含量。盧鳳來(lái)等［9］采用HPLC-ELSD法測(cè)定了山銀花中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的含量，為全面控制山銀花藥材的質(zhì)量提供了簡(jiǎn)便、可靠的方法。

2.4 質(zhì)譜檢測(cè)器 是一種高靈敏度的檢測(cè)器，目前，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)越來(lái)越多的被應(yīng)用在中藥有效成分的含量測(cè)定中。除了傳統(tǒng)上利用液相色譜的高效分離能力對(duì)被分析樣品進(jìn)行分離，質(zhì)譜為檢測(cè)器在線提供化合物的分子量信息以外，利用質(zhì)譜多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式，可以對(duì)被測(cè)化合物準(zhǔn)確定量。在高效液相色譜法其它檢測(cè)器的使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，如果光譜是一致的，峰仍可能包含不純物。如果光譜吸收相對(duì)于主化合物很小，或不純物和主化合物具有相同或幾乎相同的光譜及相近的洗脫時(shí)間，也可能出現(xiàn)上述情況。而質(zhì)譜監(jiān)測(cè)是選擇特異性的母離子和特異性的子離子，通過(guò)提取離子流圖（EIC）進(jìn)行定量。因此，質(zhì)譜檢測(cè)器測(cè)定結(jié)果比液相其它檢測(cè)器更準(zhǔn)確。高淑麗等［10］采用LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定連翹葉中4種成分的含量，采用電噴霧電離源，負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，所建立的方法專屬性好、精密度高，可用于連翹葉中4種成分的同時(shí)檢測(cè)。李月茹等［11］采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了紫紅參中57個(gè)人參皂苷類成分的含量。采用電噴霧電離，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)。

3 紅外吸收光譜法

紅外吸收光譜法除了傳統(tǒng)的作為定性分析的手段外，由于其進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)具有不破壞樣品、用量少、操作簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越多的被應(yīng)用在中藥成分定量分析中。劉冰等［12］采用傅立葉變換近紅外光譜儀透射光譜技術(shù)對(duì)黃芪精口服液中黃芪多糖和黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，應(yīng)用偏最小二乘回歸法建立了黃芪多糖和黃芪甲苷含量近紅外數(shù)學(xué)校正模型，結(jié)果表明：該含量測(cè)定方法快速、準(zhǔn)確。蔡佳良等［13］運(yùn)用近紅外光譜法建立了廣藿香含葉量的定量分析模型，其建立的近紅外校正模型，內(nèi)部交叉驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.99647，定量模型穩(wěn)定、精確，可用來(lái)預(yù)測(cè)未知樣品的含葉量。

4 氣相色譜法

氣相色譜法（GC）是以氣體為流動(dòng)相的色譜方法，在中藥成分含量測(cè)定中主要用于分離分析揮發(fā)性成分，對(duì)中藥的質(zhì)量控制及安全用藥等方面意義重大。趙祥升等［14］用氣相色譜法測(cè)定降香中4個(gè)揮發(fā)油成分的含量，為降香揮發(fā)油的綜合利用及質(zhì)量控制提供了依據(jù)。在有機(jī)氯農(nóng)藥分析領(lǐng)域中，GC法占有絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)。沈燕等［15］用毛細(xì)管氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器分析了6種中藥中12種有機(jī)氯類農(nóng)藥的殘留量，結(jié)果表明：6種中藥中有4種不同程度的受到有機(jī)氯農(nóng)藥污染，嚴(yán)重影響了使用的安全性。同液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)一樣，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）集氣相色譜法的高靈敏度、高分離效能和質(zhì)譜的高選擇性的特點(diǎn)于一體，通過(guò)總離子流色譜圖結(jié)合質(zhì)譜圖和氣相保留值對(duì)多組分混合物進(jìn)行定性鑒別和分子結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確判斷，也可與標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)進(jìn)行比對(duì)來(lái)確證，通過(guò)峰匹配法、質(zhì)量色譜圖、選擇離子監(jiān)測(cè)法對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量分析［16］，該技術(shù)已廣泛的應(yīng)用于揮發(fā)油、甾類、生物堿、脂肪酸等中藥有效成分的研究。周芳等［17］用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)不同產(chǎn)地蓮子心中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量，以保留時(shí)間和特征離子定性，峰面積定量，結(jié)果：23種農(nóng)藥均線性關(guān)系良好，該方法簡(jiǎn)單、靈敏，可用于蓮子心中農(nóng)藥殘留的分析。

5 薄層色譜掃描法

薄層色譜掃描法（TLCS）是用薄層掃描儀對(duì)薄層板上斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，通過(guò)斑點(diǎn)對(duì)光產(chǎn)生吸收的強(qiáng)弱進(jìn)行定量分析。劉法錦等［18］采用TLCS法對(duì)黃連單煎液、黃連吳茱萸合煎液、黃連吳茱萸單煎混合液中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿的含量進(jìn)行測(cè)定，該研究為臨床兩藥配伍使用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

6 核磁共振波譜法

核磁共振波譜法（NMR）在進(jìn)行定量分析之前，首先對(duì)化合物的分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，再利用分子特定基團(tuán)的質(zhì)子數(shù)與相應(yīng)譜峰的峰面積之間的關(guān)系進(jìn)行定量測(cè)定，是以結(jié)構(gòu)分析為基礎(chǔ)。羅尚華等［19］運(yùn)用1H NMR對(duì)澤瀉藥材地緣區(qū)分和質(zhì)量評(píng)價(jià)進(jìn)行代謝組學(xué)研究，經(jīng)1H NMR定量分析，發(fā)現(xiàn)四川產(chǎn)地的澤瀉藥材質(zhì)量最優(yōu)，且與福建產(chǎn)地的澤瀉藥材有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），結(jié)果表明：該方法簡(jiǎn)單、快速，比常規(guī)的HPLC能反映出更全面的化學(xué)信息，且譜圖中信號(hào)的相對(duì)強(qiáng)弱能反映樣品中各組分的相對(duì)含量。

7 小結(jié)與展望

綜上所述，應(yīng)用于中藥有效成分含量測(cè)定的方法主要有分光光度法、HPLC法、GC法等，HPLC-MS法、GC-MS法、IR法、NMR法，除傳統(tǒng)上用于定性以外，也廣泛用于中藥有效成分的含量測(cè)定中，而早期的一些分析方法（如滴定法、重量法等）目前已較少使用。在中藥有效成分含量測(cè)定中，不同的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)該選擇最適合的、準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法，其中色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)以其高效、準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)在中藥有效成分含量測(cè)定的研究中應(yīng)用日益廣泛。該技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，必將提高中藥有效成分含量測(cè)定的研究水平，從而建立科學(xué)、完善的現(xiàn)代中藥有效成分含量測(cè)定體系，為中藥現(xiàn)代化事業(yè)的發(fā)展、中藥走向國(guó)際市場(chǎng)奠定堅(jiān)實(shí)的技術(shù)基礎(chǔ)。

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