Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀對不同類型胸腔積液中白細胞和紅細胞檢測的應用評價*

莫 筠，何志浩，方池送，翁杏華，譚洪揚

(廣東省臺山市人民醫(yī)院檢驗科，廣東臺山 529200)

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·論 著·

Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀對不同類型胸腔積液中白細胞和紅細胞檢測的應用評價*

莫 筠，何志浩，方池送，翁杏華，譚洪揚

(廣東省臺山市人民醫(yī)院檢驗科，廣東臺山 529200)

目的 研究Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀對不同類型胸腔積液中白細胞和紅細胞檢測的可行性。方法 使用Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀對246份不同類型的胸腔積液進行白細胞和紅細胞計數(shù)，并對白細胞進行分類檢測，同時與顯微鏡人工計數(shù)分類結(jié)果進行比對。結(jié)果 在189例無分類不明細胞(團)的胸腔積液中，紅細胞計數(shù)小于5 000×106/L時，儀器計數(shù)高于手工計數(shù)結(jié)果，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在57例有分類不明細胞(團)的胸腔積液中，紅細胞計數(shù)小于10 000×106/L時，儀器計數(shù)高于手工計數(shù)結(jié)果，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。當胸腔積液標本中含有分類不明細胞(團)時，儀器對標本中白細胞計數(shù)結(jié)果高于手工計數(shù)結(jié)果，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，儀器未能對此類標本中的白細胞進行分類；當胸腔積液標本中無分類不明細胞(團)時，儀器對標本中白細胞計數(shù)結(jié)果與手工計數(shù)結(jié)果相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但儀器僅對97例標本的白細胞進行分類，占51.32%(97/189)；且儀器可進行分類的標本，其單個核與多個核細胞分類與手工分類相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，相關(guān)系數(shù)r均大于0.97。結(jié)論 Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀對胸腔積液中紅細胞和白細胞的計數(shù)與分類有一定的局限性，只適用于部分標本或項目，實際工作中可根據(jù)標本情況進行操作，并結(jié)合人工鏡檢進行報告。

血細胞分析儀； 胸腔積液； 紅細胞計數(shù)； 白細胞計數(shù)

在臨床檢驗工作中，傳統(tǒng)方法使用Neubauer計數(shù)板對胸腔積液中的紅細胞和白細胞進行計數(shù)，并對白細胞進行單個核與多個核的直接分類。該方法操作較繁瑣，而且與操作者的工作經(jīng)驗有較大的關(guān)系，重復性較差。由于胸腔積液標本中含有數(shù)量不等的紅細胞和白細胞，作者嘗試使用Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀對不同類型胸腔積液中的紅細胞和白細胞進行計數(shù)與分類，并與手工鏡檢計數(shù)、涂片染色分類方法的結(jié)果進行比對，觀察血細胞分析儀用于不同類型胸腔積液中的紅細胞和白細胞計數(shù)及白細胞分類的可行性?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年7月至2014年5月本院各科室送檢的246份胸腔積液標本，標本量2～4 mL，均以乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，主要來源于胸外科、呼吸內(nèi)科、腫瘤科以及感染科。所有標本在檢驗科接收后2 h內(nèi)完成儀器與人工充池計數(shù)檢測，如不能完成，則將標本置于4 ℃冷藏保存，時間不超過18 h，且待標本平衡至室溫后立即進行檢測。已制備好的涂片染色標本于24 h內(nèi)完成鏡檢細胞分類。

1.2 儀器與試劑 Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀及其配套試劑、e-CHECK質(zhì)控品(日本希森美康公司)，儀器每年校準2次，且每日質(zhì)控在控。Neubauer計數(shù)板(上海求精生化試劑儀器有限公司)、Olympus CH-X-20顯微鏡(日本奧林巴斯公司)；瑞氏-姬姆薩染液(珠海貝索生物有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 儀器法 使用Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀進行細胞計數(shù)與分類。將EDTA-K2抗凝胸腔積液標本顛倒混勻，應用該儀器手動進樣中的細胞計數(shù)和分類(CBC+DIFF)模式檢測標本2次，取其平均值，并記錄檢測結(jié)果。若標本中的細胞數(shù)量少，肉眼微濁或清亮透明的標本可進行適當?shù)碾x心濃縮，膿性標本則進行適當?shù)南♂?，儀器檢測結(jié)果應除以相應的濃縮倍數(shù)或乘以相應的稀釋倍數(shù)，即為標本的實際檢測結(jié)果。

1.3.2 手工法 使用顯微鏡充池計數(shù)與涂片染色鏡檢進行細胞計數(shù)與分類。(1)充池計數(shù)：肉眼觀察記錄標本一般物理性狀后，取混勻的胸腔積液標本1～2滴，滴于載玻片上，于顯微鏡低倍鏡下觀察細胞數(shù)量。若細胞數(shù)量過多，則取適量標本用0.9%氯化鈉注射液進行稀釋，使Neubauer計數(shù)板充池后，每個大方格的細胞數(shù)量在100～300個，避免細胞過多引起重疊，干擾鏡檢。細胞數(shù)量較少或合適時，可不必進行稀釋。由兩名檢驗師按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版[1]要求，對同一份標本進行細胞計數(shù)。在Neubauer計數(shù)板的兩個計數(shù)池中，其中一池進行紅細胞計數(shù)；另一池加冰醋酸，計數(shù)紅細胞溶解后剩余的非紅細胞總數(shù)，包括白細胞、巨噬細胞、間皮細胞、分類不明細胞(團)等，對成團出現(xiàn)的細胞以1個為計算單位。當兩名檢驗師的某項計數(shù)結(jié)果相差小于20%時，取二者的平均數(shù)作為檢測結(jié)果；相差大于20%則重新進行充池計數(shù)。對已稀釋的標本其結(jié)果應乘以相應的稀釋倍數(shù)。(2)制片與染色：取胸腔積液標本以1 500 r/min低速離心5 min，棄上清液并混勻沉渣，取10 μL涂片2～3張，自然干燥。對已干燥的涂片進行瑞氏-姬姆薩染色，染色時間在3～5 min，流水沖洗染料，待干。(3)鏡檢分類：在油鏡下對已干的涂片進行細胞分類與計數(shù)，選擇涂片的體尾交界處分類100個白細胞，包括中性粒細胞和嗜酸性粒細胞(歸為多個核細胞)、淋巴細胞和單核細胞(歸為單個核細胞)，同時計數(shù)在分類100個白細胞時可見的間皮細胞、巨噬細胞、分類不明細胞(團)等，對成團的細胞只計為1個單位。根據(jù)分類所得數(shù)值計算白細胞實際數(shù)值。

2 結(jié) 果

2.1 手工法檢測結(jié)果 在246份胸腔積液標本中，其中181份標本(73.58%)除紅細胞和白細胞外，不見或偶見間皮細胞或巨噬細胞，其數(shù)量為(0～7)個/每分類100個白細胞；8份標本(3.25%)中間皮細胞或巨噬細胞較多，其數(shù)量為(8～14)個/每分類100個白細胞，此類標本的患者經(jīng)臨床計算機斷層掃描(CT)、纖維支氣管鏡及磁共振成像(MRI)等檢查，多為肺結(jié)核、心功能不全、慢性腎炎或其他原因引起的胸腔炎癥；其余57份標本(23.17%)除紅細胞和白細胞外，尚可見數(shù)量不等的分類不明細胞(團)，該類標本的患者經(jīng)其他檢查證實為腫瘤性胸腔積液，多見于乳腺癌、肺癌或其他腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移。根據(jù)顯微鏡人工鏡檢結(jié)果，將標本按紅細胞數(shù)量分為5組，細胞數(shù)量少于2 000×106/L為AR組，細胞數(shù)量(2 000～5 000)×106/L為BR組，細胞數(shù)量(5 001～9 999)×106/L為CR組，細胞數(shù)量(10.00～100.00)×109/L為DR組，細胞數(shù)量大于100×109/L為ER組；按白細胞數(shù)量分為4組，細胞數(shù)量小于500×106/L為AW組，細胞數(shù)量(500～2 000)×106/L為BW組，細胞數(shù)量(2 001～5 000)×106/L為CW組，細胞數(shù)量大于5×109/L為DW組。

2.2 兩種方法檢測不同類型胸腔積液紅細胞計數(shù)比較 在無分類不明細胞(團)的胸腔積液中，當標本紅細胞數(shù)量小于或等于5 000×106/L時，儀器法檢測的紅細胞計數(shù)高于手工法，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而在含有分類不明細胞(團)的胸腔積液中，當標本中紅細胞數(shù)量大于或等于10.00×109/L時，儀器法檢測的紅細胞計數(shù)與手工法比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩種方法檢測不同類型胸腔積液紅細胞計數(shù)比較±s)

注：AR、BR、CR組的計數(shù)單位為×106個/L，DR、ER組的計數(shù)單位為×109個/L；-表示無數(shù)據(jù)。

表2 兩種方法檢測不同類型胸腔積液白細胞計數(shù)比較±s)

注：AW、BW、CW組的計數(shù)單位為×106個/L，DW組的計數(shù)單位為×109個/L；-表示無數(shù)據(jù)。

2.3 兩種方法檢測不同類型胸腔積液白細胞計數(shù)比較 當標本中無分類不明細胞(團)時，儀器法檢測的白細胞計數(shù)與手工法比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；而當標本中含有分類不明細胞(團)時，儀器法檢測的白細胞計數(shù)高于手工法，比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

2.4 兩種方法在胸腔積液中白細胞分類比較 在246份胸腔積液標本中，儀器能進行分類的標本有97份(39.43%)，且均為無分類不明細胞(團)的標本，占該類標本的51.32%(97/189)，189份無分類不明細胞(團)標本中余下的92份標本不能分類或分類不全；當標本中有分類不明細胞(團)時，儀器未能對標本中的白細胞進行分類。對于儀器能分類的標本，各組單個核與多個核分類與手工染色鏡檢分類結(jié)果相比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；相關(guān)性分析顯示，AW～DW組的相關(guān)系數(shù)(r)值分別為0.97、0.99、0.99、0.99。見表3。

表3 兩種方法在胸腔積液中白細胞單個和 多個核分類比較，%)

3 討 論

Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀使用VCS三維分析技術(shù)對人體血液中的紅細胞和白細胞進行計數(shù)，并對后者進行分類[2]。但在使用該儀器對胸腔積液標本進行紅細胞計數(shù)的過程中，發(fā)現(xiàn)當標本中的紅細胞數(shù)量較低時，即在非血性胸腔積液標本的檢測中，儀器計數(shù)結(jié)果高于手工計數(shù)結(jié)果，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而在血性胸腔積液的標本的檢測中，儀器與手工計數(shù)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，這與朱麗丹等[3]報道相似。但在非腫瘤性胸腔積液標本組中，儀器對紅細胞數(shù)量高于5 000×106/L組的計數(shù)結(jié)果與手工計數(shù)比較無明顯差異；但在腫瘤性胸腔積液標本中，紅細胞數(shù)量需高于10 000×106/L，兩種方法的計數(shù)結(jié)果比較才無明顯差異。分析出現(xiàn)該現(xiàn)象的原因有兩個：(1)與血細胞分析儀對紅細胞計數(shù)的原理有關(guān)。Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀使用電阻抗法檢測紅細胞數(shù)量，儀器稀釋后的血液中含有白細胞，當血液進入紅細胞計數(shù)通道時，紅細胞檢測的各項參數(shù)均包含白細胞因素，但血液中紅細胞與白細胞的數(shù)量比大約為600∶1，白細胞數(shù)量所占比例低，故對紅細胞計數(shù)的干擾可以忽略。但在非血性胸腔積液的標本中，紅細胞與白細胞的數(shù)量比多為(1～20)∶1，甚至有的標本白細胞數(shù)量高于紅細胞，所以標本中兩種細胞同時通過儀器的紅細胞計數(shù)通道時，儀器將白細胞或單個小腫瘤細胞等當作大紅細胞計數(shù)，使紅細胞計數(shù)假性升高；而在血性胸腔積液中，紅細胞與白細胞的比例與血液相似，白細胞數(shù)量對紅細胞計數(shù)的干擾相對減少。(2)與血細胞分析儀對細胞計數(shù)的線性范圍有關(guān)。雖然儀器的線性范圍可低至0×1012/L，但人體血液標本無法達到此極端值。血細胞分析儀對紅細胞計數(shù)的單位為1012/L，而大部份非血性胸腔積液標本中的紅細胞數(shù)量低于10 000×106/L，僅為儀器對紅細胞計數(shù)單位的1/100，即使?jié)饪s10倍，儀器對此類標本的紅細胞計數(shù)一般為(0.01～0.20)×1012/L，該類低紅細胞數(shù)量標本并不適合儀器法檢測，儀器計數(shù)誤差大。因此，Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀并不適合對非血性的胸腔積液標本中的紅細胞進行計數(shù)。

SysmexXT-2000i全自動血細胞分析儀對胸腔積液中的白細胞計數(shù)則與標本中是否含有腫瘤細胞(團)有關(guān)。腫瘤細胞(團)含有胞質(zhì)顆粒與細胞核，與白細胞在結(jié)構(gòu)上有相似之處，在通過白細胞檢測通道時，儀器可排除體積巨大的細胞團，但對于與白細胞體積相似的單個腫瘤細胞或2～3個小細胞團，儀器將其當作白細胞計數(shù)。但是，由于其胞質(zhì)內(nèi)顆粒和細胞核與正常的白細胞不同，儀器無法對其進行分類，故在腫瘤性胸腔積液標本中，儀器對白細胞計數(shù)假性升高，且在白細胞分類的散點圖上，表現(xiàn)為大面積異常灰色散點，向上、向右擴散，提示此類細胞體積大小不均一，部分體積大，核熒光強度高，細胞核中核酸比例高，細胞幼稚。儀器對含有腫瘤細胞(團)的胸腔積液標本中白細胞計數(shù)結(jié)果不可信。對于非腫瘤性胸腔積液標本，即使標本中含有少量的間皮細胞或巨噬細胞，但由于此類細胞的數(shù)量低，對儀器的白細胞計數(shù)干擾相對較少，儀器的計數(shù)結(jié)果與手工計數(shù)結(jié)果相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，儀器對此類標本中白細胞計數(shù)結(jié)果可信，但對于白細胞數(shù)量低于1000×106/L的標本，本科室均濃縮后才進行儀器檢測。在非腫瘤性胸腔積液的189份標本中，儀器只對97份標本進行白細胞分類，余下的92份標本未能分類或分類不全，這些標本在儀器白細胞散點圖上，偶見灰色的異常散點顆粒，這些異常的散點顆粒少而散，更多的是紅色的淋巴細胞與藍色的中性粒細胞散點疏松分散，不集中成小片，白細胞報警提示多為原始細胞、左移、難溶紅細胞、異常淋巴細胞等。此類標本經(jīng)人工鏡檢，可見部分白細胞邊緣不整齊，胞質(zhì)結(jié)構(gòu)松散，中性分葉核粒細胞的細胞核較模糊，核小葉聚集不散開，或部分細胞有退化現(xiàn)象。儀器能進行白細胞分類的97份非腫瘤性胸腔積液標本中，鏡檢均發(fā)現(xiàn)標本中的有核細胞結(jié)構(gòu)清晰易辨，其單個核細胞與多個核細胞的比例與人工鏡檢相比較，兩類細胞的r值均大于0.97，相關(guān)性較好，說明儀器的分類結(jié)果可信，這與類似報道結(jié)果相一致[4-6]。

胸腔積液常規(guī)操作過程繁瑣，不少學者使用不同儀器對其進行檢測[7-8]。但由于胸腔積液中細胞成分較多，細胞數(shù)量變化范圍大，在本研究中，為使標本適合儀器的檢測，尚需對紅細胞數(shù)量低于10×109/L的標本進行濃縮，對白細胞過高的膿性胸腔積液則要進行稀釋，這也需要消耗一定的時間與人工。并且，即便如此，Sysmex XT-2000i全自動血細胞分析儀也只能對部分標本或檢測項目適用，不能完全替代人工顯微鏡檢測，在實際工作中，仍然應加強檢驗工作者對細胞形態(tài)學的學習與培訓，并提高手工操作的能力。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司．全國臨床檢驗操作規(guī)程[M]．3版．南京：東南大學出版社，2006：132-135．

[2]熊立凡，劉成玉．臨床檢驗基礎(chǔ)[M]．4版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：96-97．

[3]朱麗丹，陳小劍，干素娥．血液細胞分析儀檢測漿膜腔積液細胞數(shù)的初探[J]．江西醫(yī)學檢驗，2004，22(2)：131．

[4]張勇，伍淑嫻，余秀文，等．全自動五分類血液分析儀在胸腹水檢測中的應用[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2010，31(10)：1175-1176．

[5]何銀華，顏宇飛，蔡崢，等．Sysmex XE-2100全自動血液分析儀計數(shù)胸腹水有核細胞的評價[J]．檢驗醫(yī)學，2011，26(4)：228-230．

[6]羅耀凌，池沛冬，鄺妙歡，等．Sysmex XS-800i血細胞分析儀在漿膜腔積液計數(shù)及分類中的應用[J]．熱帶醫(yī)學雜志，2011，11(6)：662-664．

[7]魯玲．UF-1000i全自動尿沉渣分析儀對胸腹水中白細胞及紅細胞的檢測價值[J]．現(xiàn)代實用醫(yī)學，2011，23(4)：418-419．

[8]莫筠，陳儉榮，譚洪揚，等．全自動尿沉渣分析儀對胸腔積液中紅細胞和白細胞的檢測價值[J]．中國基層醫(yī)藥，2014，21(10)：1522-1524．

Application evaluation of Sysmex XT-4000i automated hematology analyzer for detecting WBC and RBC in different types of pleural effusion*

MOJun，HEZhi-hao，F(xiàn)ANGChi-song，WENGXing-hua，TANHong-yang

(DepartmentofClinicalLaboratory,TaishanMunicipalPeople′sHospital,Guangdong529200，China)

Objective To study the feasibility of the Sysmex XT-2000i automated hematology analyzer for detecting while blood cells (WBC) and red blood cells(RBC) in different types of pleural effusion.Methods The Sysmex XT-2000i automated hematology analyzer was used to perform the WBC count,RBC count and WBC classification in 246 different types of pleural effusion specimen,meanwhile the detection results were compared with those detected by using the manual microscopic counting method.Results In 189 pleural effusion samples without unknown classification of cell (group),when RBC content <5 000×106/L,the instrument count was higher than the manual count,with statistically significant difference(P<0.05);in 57 pleural effusion specimens with unknown classification of cells (group),when RBC content <10 000×106/L,the instrument count was higher than the manual count,with statistically significant difference(P<0.05).When the pleural effusion samples with unknown classification of cells (group),the instrument WBC count was higher than the manual WBC count,with statistically significant difference(P<0.05),moreover the instrument fails to classify WBC in the samples;in the pleural effusion samples without unknown classification of cells (group),the instrument WBC count and the manual WBC count had no statistically significant difference (P>0.05),but only 97 pleural effusion samples were performed the WBC classification by instrument,accounting for 51.32% (97/189);moreover for the samples classified by instrument,the classification results of mononuclear and multiple nuclear cell by instrument and manual method had no statistically significant differences(P>0.05) and the correlation coefficient was >0.97.Conclusion The Sysmex XT-2000i automated hematology analyzer for conducting the count of RBC and WBC and WBC classification in pleural effusion samples has certain limitations and may be only suitable for partial samples or items,in the practical work,the operating should be conducted according to the sample condition and the results should be reported by combining with the manual microscopic examination.

hematology analyzer； pleural effusion； red blood cell count； white blood cell count

廣東省江門市科技計劃項目(江科2013-89-6)。

莫筠，女，本科，副主任檢驗技師，主要從事血液與體液學檢驗、血細胞形態(tài)學檢驗研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.009

A

1672-9455(2015)05-0600-03

2014-11-10

2014-12-15)