HPV分型及其高危亞型與宮頸病變的相關(guān)性分析*

李春龍，廖 洪，楊 瑛，吳長洪(廣東省深圳市鹽田區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科 518081)

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HPV分型及其高危亞型與宮頸病變的相關(guān)性分析*

李春龍，廖 洪，楊 瑛，吳長洪(廣東省深圳市鹽田區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科 518081)

目的 觀察人乳頭瘤病毒(HPV)亞型分布情況，探討HPV高危亞型與宮頸病變的相關(guān)性。方法 回顧性分析5 545例行液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(TCT)及HPV分型檢測(cè)篩查宮頸癌患者的臨床資料，其中細(xì)胞學(xué)結(jié)果為無明確意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞改變(ASCUS)及以上級(jí)別者，進(jìn)行陰道鏡宮頸活檢，分析HPV亞型分布情況及高危亞型與宮頸病變的相關(guān)性。結(jié)果 5 545例女性共篩查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，其中單型感染者2 243例，占72.22%(2 243/3 106)；多重感染者863例，占27.78%(863/3 106)；共檢測(cè)出4 194株HPV亞型。感染頻度前5位的HPV亞型分別是16型(21.75%)、58型(20.12%)、52型(10.59%)、18型(7.46%)以及68型(5.05%)。ASCUS、鱗狀上皮內(nèi)低度病變及高度病變的病變率分別為27.07%(471/1 740)、26.67%(144/540)、61.57%(133/216)，宮頸細(xì)胞學(xué)病變分級(jí)程度越高，宮頸高度病變率越高(P<0.05)。病理結(jié)果為CINⅡ、CIN Ⅲ、宮頸癌患者的HPV高危亞型的陽性感染率分別為92.13%、96.21%、100.00%，提示HPV高危亞型的感染率越高，宮頸病變程度越高(P<0.05)。TCT、HPV高危亞型和病理活檢3種方法進(jìn)行對(duì)比分析顯示，宮頸細(xì)胞學(xué)檢查異常程度和病理活檢病變分級(jí)越高，HPV高危亞型陽性率越高；在TCT結(jié)果異常的患者中，HPV高危亞型陽性的患者宮頸高度病變發(fā)生率更高。以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)，HPV高危亞型篩查在鱗狀上皮高度病變患者中對(duì)宮頸高度病變的靈敏度高達(dá)90.91%，特異度高達(dá)85.71%，陽性預(yù)測(cè)值高達(dá)90.91%。結(jié)論 宮頸細(xì)胞學(xué)檢查異常程度和病理活檢病變分級(jí)越高，HPV高危亞型陽性率越高；HPV分型檢測(cè)對(duì)細(xì)胞學(xué)異常者宮頸高度病變篩查有重要意義。

HPV分型檢測(cè)； 高危亞型； 宮頸病變

近年來，宮頸癌的發(fā)生率呈上升趨勢(shì)，是發(fā)病率第二位的女性惡性腫瘤，有數(shù)據(jù)顯示，宮頸癌占所有女性惡性腫瘤的25%[1]。研究已證實(shí)，人乳頭瘤病毒(HPV)是宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變的致病因素之一，尤其是高危型HPV更容易導(dǎo)致宮頸癌前病變，而宮頸癌的癌前病變期可逆，因此，HPV感染并對(duì)其準(zhǔn)確分型，進(jìn)行早期干預(yù)治療對(duì)挽救患者性命具有重要的意義。此外，應(yīng)用HPV檢測(cè)篩查宮頸癌，有助于提高宮頸病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性，同時(shí)，對(duì)HPV進(jìn)行分型，有利于臨床制定相關(guān)干預(yù)措施。經(jīng)陰道鏡多點(diǎn)去活體做病理學(xué)檢查作為診斷宮頸癌的金標(biāo)準(zhǔn)，長期以來由于操作過程中設(shè)備需求高，技術(shù)人員專業(yè)性的要求也高，因而不能作為篩查的主要手段。近年來，薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)(TCT)、高危型HPV(HR-HPV)篩查以及聯(lián)合LCT和HR-HPV在宮頸癌臨床篩查上的應(yīng)用大大提升了篩查的準(zhǔn)確性和特異性[2-3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院婦科門診2009年1月至2014年6月共對(duì)5 545例女性進(jìn)行機(jī)會(huì)性宮頸癌篩查，均進(jìn)行HPV分型檢測(cè)和TCT。對(duì)HPV高危亞型陽性或TCT結(jié)果為無明確意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞改變(ASC-US)及以上級(jí)別者，進(jìn)行陰道鏡宮頸活檢。所有患者知情同意，排除生殖道畸形和急性炎性反應(yīng)、有宮頸錐切及子宮切除手術(shù)史、妊娠、免疫缺陷、腫瘤史患者。

1.2 方法

1.2.1 HPV分型檢測(cè) 采用中國凱普生物科技公司的HPV分型檢測(cè)試劑盒，可檢測(cè)21種HPV亞型，包括高危亞型13種(HPV16、HPV18、HPV3l、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68型)，低危亞型5種(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44型)以及中國人群常見型3種(HPV53、HPV66、CP8304型)[4]。宮頸上皮脫落細(xì)胞標(biāo)本采集后4 ℃標(biāo)本，48 h內(nèi)完成檢測(cè)。抽提純化DNA，PCR擴(kuò)增，以凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交儀為平臺(tái)，利用導(dǎo)流雜交的原理，在已經(jīng)固定好核酸探針的低密度基因芯片膜上，采用凱普導(dǎo)流雜交HPV-DNA檢測(cè)法檢測(cè)HPV的分型。

1.2.2 TCT檢測(cè) 采集宮頸脫落上皮細(xì)胞標(biāo)本后，根據(jù)ThinPrep液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)儀(美國新柏氏公司)的操作規(guī)范，TCT制片染色后，由2名細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)師獨(dú)立閱片，結(jié)果不能確定者再請(qǐng)上級(jí)醫(yī)生閱片確定結(jié)果。采用2001年國際癌癥協(xié)會(huì)伯塞斯達(dá)系統(tǒng)報(bào)告染色觀察結(jié)果[3,5]，即正常范圍(WNL)、無明確意義的ASCUS改變、鱗狀上皮內(nèi)低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內(nèi)高度病變(HSIL)、鱗狀細(xì)胞癌(SCC)、腺上皮不正常為意義不明的不典型腺細(xì)胞(AGUS)和腺癌。根據(jù)TBS標(biāo)準(zhǔn)，LSIL即CINⅠ,HSIL包括CIN Ⅱ和 CIN Ⅲ。細(xì)胞學(xué)LSIL以上病變?cè)\斷為陽性。

1.2.3 病理診斷標(biāo)準(zhǔn) TCT檢查結(jié)果為ASCUS及以上級(jí)別者，進(jìn)行陰道鏡檢查，對(duì)宮頸可疑病變部位采集標(biāo)本活檢。以組織病理學(xué)的診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)組織學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)，宮頸病變的病理結(jié)果報(bào)告分為：正常、炎性反應(yīng)、濕疣；宮頸上皮內(nèi)瘤變：分為CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ；宮頸浸潤癌；其他。CINⅡ級(jí)及以上病變程度規(guī)定為宮頸高度病變標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用百分率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，顯著性標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 HPV亞型分布 本組5 545例女性共篩查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，其中單型感染者2 243例，占72.22%(2 243/3 106)；多重感染者863例，占27.78%(863/3 106)。共檢測(cè)出4 194株HPV亞型。單型感染者中，檢出率超過5.00%的HPV亞型分別是HPV16型541株(24.12%)、HPV58型495株(22.07%)、HPV52型248株(11.06%)、HPV18型135株(6.02%)、HPV11型127株(5.66%)、HPV33型122株(5.44%)、HPV68型113株(5.04%)；多重感染者中，檢出率超過5.00%的HPV亞型分別是HPV16型371株(19.02%)、HPV58型349株(17.89%)、HPV52型196株(10.05%)、HPV18型178株(9.12%)、HPV53型103株(5.28%)、HPV68型99株(5.07%)。結(jié)果見表1。

表1 HPV亞型分布情況[n(%)]

2.2 TCT檢測(cè)結(jié)果 TCT結(jié)果顯示，WNL者3 049例，大于或等于ASCUS者2 496例，占45.01%。其中ASCUS 1 740例，LSIL 540例，HSIL 216例。

2.3 病理活檢結(jié)果 對(duì)2 496例大于或等于ASCUS者進(jìn)行病理組織活檢，結(jié)果顯示，病變?yōu)檠仔苑磻?yīng)或濕疣的患者1 212例，CIN Ⅰ 540例，CIN Ⅱ432例，CINⅢ 264例，宮頸癌48例，宮頸高度病變率29.81%(744/2 496)。ASCUS、LSIL、HSIL的高度病變率分別為27.07%(471/1 740)、26.67%(144/540)、61.57%(133/216)。可見，隨著宮頸細(xì)胞學(xué)病變分級(jí)程度越高，宮頸高度病變率越高(P<0.05)。

2.4 HPV高危亞型與宮頸病變的關(guān)系 病理診斷為炎性反應(yīng)或濕疣、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌的患者中，感染HPV高危亞型的陽性率分別為38.45%(466/1 212)、60.56%(360/540)、92.13%(398/432)、96.21%(254/264)、100.00%(48/48)?？梢姡琀PV高危亞型的感染率越高，宮頸病變程度越高(P<0.01)。

2.5 HPV高危亞型檢測(cè)與病理結(jié)果對(duì)比分析 本組宮頸高度病變患者共有744例，在HPV高危陽性者中的檢出率為45.87%(700/1 526)，在HPV高危亞型陰性中的檢出率為4.54%，兩者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。以病理結(jié)果為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，HPV高危型陽性對(duì)宮頸高度病變?cè)\斷的靈敏度為94.09%，診斷特異性為52.85%，陽性預(yù)測(cè)值為45.87%，陰性預(yù)測(cè)值為95.46%。結(jié)果見表2。

表2 HPV高危亞型檢測(cè)與病理結(jié)果對(duì)比(n)

2.6 TCT不同分級(jí)的HPV高危亞型感染率及宮頸高度病變率 471例被病理診斷為宮頸高度病變的ASCUS患者中，HPV高危亞型陽性患者的宮頸高度病變率為40.22%(444/1 104)，顯著高于HPV高危亞型陰性的4.25%(27/636)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示HPV高危亞型陽性的ASCUS患者宮頸高度病變發(fā)生率更高。同理，在LSIL和HSIL的患者中，HPV高危亞型陽性患者的宮頸高度病變率分別為36.67%(132/360)和90.91%(120/132)，顯著高于HPV高危亞型陰性的6.67%(12/180)和14.29%(12/84)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此外，以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)，HPV高危亞型篩查在HSIL患者中對(duì)宮頸高度病變的靈敏度高達(dá)90.91%(120/132)，特異度高達(dá)85.71%(72/84)，陽性預(yù)測(cè)值高達(dá)90.91%(120/132)。上述結(jié)果表明，在TCT結(jié)果異常的患者中，HPV高危亞型陽性的患者宮頸高度病變發(fā)生率更高，HPV高危亞型陽性的HSIL患者需立即進(jìn)行陰道鏡采集病理活檢，以及早發(fā)現(xiàn)宮頸高度病變。結(jié)果見表3。

表3 TCT、HPV高危亞型以及病理活檢結(jié)果對(duì)比(n)

3 討 論

有多機(jī)構(gòu)研究顯示，HPV亞型感染率具有較大的地域差異，國際癌癥研究協(xié)會(huì)分析了全球25個(gè)國家共3 607例宮頸癌患者的HPV亞型感染情況，發(fā)現(xiàn)感染率最高的HPV16平均感染率高達(dá)57.40%；其次為HPV18，感染率12.60%～25.70%[6]。有研究報(bào)道，亞洲國家感染率最常見的是HPV52型和HPV58型，有流行病學(xué)研究顯示，上海的宮頸癌標(biāo)本中，HPV52和HPV58型感染率高達(dá)42.50%[7]。有權(quán)威數(shù)據(jù)顯示，中國女性最常見的HPV亞型感染頻度前5位的分別是HPV16、HPV18、HPV52、HPV58、HPV31[8-9]。本組研究篩查了5 545例女性，共篩查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，感染頻度前5位的HPV亞型分別是HPV16型(21.75%)、HPV58型(20.12%)、HPV52型(10.59%)、HPV18型(7.46%)以及HPV68型(5.05%)，基因型與亞洲國家的相關(guān)報(bào)道基本一致，檢出頻度略有差異，可能與HPV亞型在人群中的分布有地域差異有關(guān)，也可能與研究對(duì)象的來源不同有關(guān)[10]。

研究已證實(shí)，HPV高危亞型感染是導(dǎo)致宮頸高度病變的必要條件，有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，99.80%的宮頸癌患者感染HPV高危亞型[9]。本組研究顯示，病理結(jié)果為CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、宮頸癌患者的HPV高危亞型的陽性感染率分別為92.13%、96.21%、100.00%，可見HPV高危亞型的感染率越高，宮頸病變程度越高(P<0.01)。TCT、HPV高危亞型和病理活檢3種方法進(jìn)行對(duì)比分析顯示，宮頸細(xì)胞學(xué)檢查異常程度和病理活檢病變分級(jí)越高，HPV高危亞型陽性率越高；在TCT結(jié)果異常的患者中，HPV高危亞型陽性的患者宮頸高度病變發(fā)生率更高，以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)，HPV高危亞型篩查在HSIL患者中對(duì)宮頸高度病變的靈敏度高達(dá)90.91%，特異度高達(dá)85.71%，陽性預(yù)測(cè)值高達(dá)90.91%。因此，臨床檢查發(fā)現(xiàn)HPV高危亞型陽性的HSIL患者需立即進(jìn)行陰道鏡采集病理活檢，以及早發(fā)現(xiàn)宮頸高度病變。

宮頸病變嚴(yán)重程度及其預(yù)后轉(zhuǎn)歸除了與感染HPV高危亞型有關(guān)，還與遺傳、年齡、免疫狀態(tài)、婚育史、生活習(xí)慣等諸多因素有關(guān)[11]。因此，在臨床工作中，應(yīng)結(jié)合多種方法對(duì)高危人群進(jìn)行篩查。本組研究結(jié)果有助于了解筆者所在地區(qū)范圍內(nèi)的HPV各亞型分布趨勢(shì)，對(duì)疫苗研制或臨床重點(diǎn)篩查具有重要的指導(dǎo)意義，對(duì)TCT不同分級(jí)的患者進(jìn)行臨床分層管理也有參考價(jià)值。HPV亞型檢測(cè)對(duì)篩查宮頸癌和宮頸癌手術(shù)后隨訪具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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廣東省計(jì)劃生育委員會(huì)科研基金資助項(xiàng)目(2010312)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.08.033

A

1672-9455(2015)08-1109-03

2014-10-10

2014-11-20)