咽拭子和外周血EB病毒核酸檢測(cè)結(jié)果分析

陳曉宇，陳越，鄧?yán)?/p>

(九江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西九江332000)

咽拭子和外周血EB病毒核酸檢測(cè)結(jié)果分析

陳曉宇，陳越，鄧?yán)?/p>

(九江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西九江332000)

摘要:目的用熒光定量PCR法分別檢測(cè)咽拭子和外周血標(biāo)本EB病毒核酸，將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比，探討其結(jié)果是否一致。方法采用實(shí)時(shí)熒光PCR法同時(shí)檢測(cè)疑似感染患者和正常人的外周血和咽拭子EB病毒DNA拷貝數(shù)，將結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果疑似感染患者咽拭子EB病毒陽(yáng)性率49.4%遠(yuǎn)高于正常人咽拭子13.3%陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；疑似感染患者外周血EB病毒陽(yáng)性率19.1%高于正常人外周血陽(yáng)性率7.2%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同一個(gè)患者同時(shí)取咽拭子檢測(cè)EB病毒陽(yáng)性率51.6%高于外周血陽(yáng)性率18.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且同一患者的咽拭子檢測(cè)病毒載量(1.0× 102～3.17×107)也高于外周血檢測(cè)病毒載量(4.5×102～2.84×105)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論用熒光定量PCR法檢測(cè)咽拭子標(biāo)本陽(yáng)性率較外周血陽(yáng)性率更高，更能及時(shí)準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)EB病毒在體內(nèi)的實(shí)際復(fù)制情況，且標(biāo)本采集方便，值得在臨床推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：熒光定量；EB病毒；咽拭子；外周血

EB病毒1964年在非洲首次被發(fā)現(xiàn)，屬于人類皰疹病毒科。幼兒感染EB病毒后常引起傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)[1]，病毒感染與淋巴瘤、鼻咽癌等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有較密切的關(guān)系，人類是其唯一宿主[2]。病毒的傳播途徑主要是唾液，也可經(jīng)輸血傳染[3]。EB病毒臨床檢測(cè)方法主要有血清學(xué)測(cè)IgM抗體檢測(cè)、熒光定量PCR檢測(cè)等。但多認(rèn)為血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性率較低，且也難以客觀反映EB病毒感染真實(shí)情況，故目前臨床多采用PCR方法檢測(cè)EB病毒拷貝數(shù)，作為鑒別EB病毒感染有關(guān)疾病的重要手段。國(guó)內(nèi)外對(duì)咽拭子及外周血等標(biāo)本采用PCR法檢測(cè)EB病毒核酸的研究報(bào)道較多，但對(duì)于咽拭子與外周血檢測(cè)EB病毒陽(yáng)性率對(duì)比的研究少有報(bào)道。作者應(yīng)用熒光定量PCR法，同時(shí)檢測(cè)外周血和咽拭子EB病毒核酸,將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1儀器和試劑實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增儀(達(dá)安7600)；人類淋巴細(xì)胞分離液和EB病毒PCR熒光檢測(cè)試劑。

1.2標(biāo)本來(lái)源收集2012年－2014年來(lái)我院就診的疑似EB病毒感染患者咽拭子及外周血標(biāo)本共400例。另收集同期來(lái)我院做健康體檢的正常人群咽拭子及外周血標(biāo)本標(biāo)本共250例。

1.2.1抽取受檢者空腹外周靜脈血2ml,注入含EDTA的采血管，立即輕輕顛倒混勻，使抗凝劑與靜脈全血充分混合，立即送檢。

1.2.2以無(wú)菌棉拭子,采集兩側(cè)腭弓、咽部或扁桃體粘膜上的分泌物，放入滅菌試管中，加蓋送檢。

1.3檢測(cè)方法

1.3.1按試劑說(shuō)明分別提取鼻咽拭子標(biāo)本和外周全血標(biāo)本的DNA模板。

1.3.2PCR擴(kuò)增程序PCR反應(yīng)管中加入5μl DNA模板提取液，用已知EBV-DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，置于自動(dòng)熒光PCR儀檢測(cè)，結(jié)果低于500copies/ml判定為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1疑似感染患者咽拭子EB病毒陽(yáng)性率49.4%遠(yuǎn)高于正常人咽拭子陽(yáng)性率13.3%，結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)(見表1)。

表1　疑似感染者與正常人咽拭子EB病毒檢測(cè)結(jié)果比較

2.2疑似感染患者外周血EB病毒陽(yáng)性率19.1%，遠(yuǎn)高于正常人外周血陽(yáng)性率7.2%，結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)(見表2)。

表2　疑似感染者與正常人外周血EB病毒檢測(cè)結(jié)果比較

2.3同一個(gè)患者同時(shí)取咽拭子檢測(cè)EB病毒陽(yáng)性率51.6%遠(yuǎn)高于外周血陽(yáng)性率18.3%，結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)；咽拭子檢測(cè)病毒載量(1.0×102～3.17×107)也遠(yuǎn)高于外周血檢測(cè)病毒載量為(4.5× 102～2.84×105)，結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)(見表3)。

表3　同一患者的外周血與咽拭子EB病毒檢測(cè)結(jié)果比較

3　討論

EB病毒感染引發(fā)的相關(guān)疾病典型表現(xiàn)為發(fā)熱、咽痛、肝脾和淋巴結(jié)腫大等[4]，癥狀多樣化，不典型，早期易造成誤診、漏診，延誤病情，甚至危及患者生命。實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)EB病毒核酸具有快速簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確靈敏，特異性強(qiáng)、減少污染等優(yōu)點(diǎn)[5]；也能準(zhǔn)確、及時(shí)的監(jiān)測(cè)到病毒復(fù)制感染情況，為臨床診斷治療，判斷病情和預(yù)后評(píng)價(jià)提供依據(jù)；故成為檢測(cè)EB病毒的首選方法。

機(jī)體咽部上皮細(xì)胞有EB病毒受體,EBV感染后，病毒先在口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，后感染B淋巴細(xì)胞，病毒長(zhǎng)期潛伏在淋巴組織中，受感染者成為終生帶毒者。當(dāng)機(jī)體免疫功能低下,潛伏在細(xì)胞中的EB病毒被激活并增殖致病，EB病毒DNA核酸拷貝數(shù)大量升高，感染細(xì)胞大量進(jìn)入血循環(huán)而造成全身性EB病毒感染。

本次研究，筆者對(duì)正常人采集咽拭子和外周血進(jìn)行EB病毒DNA檢測(cè)，將正常人與疑似感染患者檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比較，證實(shí)疑似病例EB病毒DNA陽(yáng)性率明顯高于正常人EB病毒的陽(yáng)性率，結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)。EB病毒可長(zhǎng)期潛伏在正常人體鼻咽部和淋巴細(xì)胞內(nèi)，部分人檢測(cè)EB病毒可能呈陽(yáng)性，但大部分人核酸拷貝數(shù)太低，檢測(cè)不出來(lái)。國(guó)內(nèi)學(xué)者開展了正常人EB病毒相關(guān)研究，秦娟等研究顯示，796例正常人外周血細(xì)胞檢測(cè)EB病毒DNA的陽(yáng)性率為7.4%[6]；康喜訊等人研究顯示一般正常人群外周血EB病毒DNA的檢出率較低[7]，與筆者研究結(jié)果相符。

本研究對(duì)疑似感染患者分別采集外周血和咽拭子的EB病毒進(jìn)行檢測(cè)，其中同一患者同時(shí)采集咽拭子標(biāo)本的EB病毒陽(yáng)性率51.6%遠(yuǎn)高于外周血的陽(yáng)性率18.3%，且咽拭子檢測(cè)病毒載量也遠(yuǎn)高于外周血檢測(cè)病毒載量，結(jié)果都有顯著性差異(P< 0.05)。說(shuō)明檢測(cè)咽拭子中EB病毒DNA比檢測(cè)外周血中EB病毒DNA具有更高的敏感性和更強(qiáng)的特異性。劉金祿[8]等采用熒光定量PCR方法檢測(cè)咽拭子EB病毒陽(yáng)性率36%，湯春波[9]采用熒光定量PCR檢測(cè)咽拭子陽(yáng)性率為43%，于謹(jǐn)銘[10]等采用熒光定量PCR方法檢測(cè)外周血EB病毒陽(yáng)性率20.5%與我們研究結(jié)果相符。

臨床上，國(guó)內(nèi)多為鼻咽癌患者才采用咽拭子檢測(cè)，其他疑似患者多采用外周血檢測(cè)，至檢測(cè)陽(yáng)性率不高，假陰性容易誘導(dǎo)誤診、漏診，延誤病情；抽取外周血提取白細(xì)胞操作繁瑣，干擾因素也多，會(huì)對(duì)PCR反應(yīng)造成影響；且部分EB病毒感染者是幼兒，相對(duì)于抽血，咽拭子標(biāo)本采集方便，更易于被患兒及家長(zhǎng)接受，陽(yáng)性檢出率也更高。為臨床盡早提供準(zhǔn)確診療依據(jù)，確診病情制定治療方案，縮短了住院時(shí)間，降低了醫(yī)療費(fèi)用；故筆者建議臨床推廣應(yīng)用。用咽拭子標(biāo)本檢測(cè)EB病毒陽(yáng)性率較外周血標(biāo)本高，原因與機(jī)制筆者目前難以探明，筆者分析可能是EB病毒首先感染咽部，咽部上皮細(xì)胞的EB病毒復(fù)制增殖要早于血中，或許可能與該法收集鼻咽分泌物帶有較多脫落白細(xì)胞，總之原因與機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)

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[7]康喜訊,萬(wàn)世恒.鼻咽組織和外周血EB病毒DNA檢測(cè)用于早期診斷鼻咽癌[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2012,19(10):1697-1698.

[8]劉金祿,何曉峰.FQ-PCR技術(shù)檢測(cè)肺炎患兒咽拭子EB病毒結(jié)果分析[J].河北北方學(xué)院學(xué)報(bào),2010,27(5):43-44.

[9]湯春波.小兒咽拭子EB病毒DNA-PCR臨床應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)信息, 2010,24(11):122.

[10]于謹(jǐn)銘,羅兵.EBV-DNA檢測(cè)在兒童EB病毒感染中的臨床意義[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床,2012,23(5):1673-1675.

·檢驗(yàn)與臨床·

(收稿日期2014-10-13；修回日期2014-11-20)

DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2015.01.025

中圖分類號(hào)：R446.62,R373.1+1,R446.19

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674-1129(2015)01-0070-03