HPLC法測定白帶丸中芍藥苷及鹽酸小檗堿的含量

馬 帥，葛潔英，周 蓬

（1.淄博市食品藥品檢驗檢測中心，山東淄博255086；2.安丘市魯安藥業(yè)有限責任公司，山東安丘262100）

HPLC法測定白帶丸中芍藥苷及鹽酸小檗堿的含量

馬 帥1，葛潔英2，周 蓬1

（1.淄博市食品藥品檢驗檢測中心，山東淄博255086；2.安丘市魯安藥業(yè)有限責任公司，山東安丘262100）

目的建立以高效液相色譜法同時測定白帶丸中芍藥苷及鹽酸小檗堿含量的方法。方法 色譜柱為Wondasil C18Superb（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為乙腈－0.3%磷酸溶液，梯度洗脫，流速為1.0 mL·min－1，芍藥苷的檢測波長為230 nm，鹽酸小檗堿的檢測波長320 nm。結(jié)果芍藥苷與鹽酸小檗堿分別在0.106 29～2.125 8μg·mL－1（r＝0.999 9）與0.060 21～1.204 2μg·mL－1（r＝0.999 9）濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；平均回收率為98.45%與100.52%。結(jié)論本方法可用于白帶丸的質(zhì)量控制。

白帶丸；芍藥苷；鹽酸小檗堿；高效液相色譜法

白帶丸由黃柏（酒炒）、椿皮、白芍、當歸、香附5味藥組成，有清熱、除濕、止帶的功效，自1977年以來，一直為《中國藥典》所收載?！吨袊幍洹?010年版標準中，其檢驗項目為HPLC法測定鹽酸小檗堿的含量［1］。而方中白芍含有的有效成分芍藥苷也可用于該藥的質(zhì)量控制［2］。為了控制白帶丸的質(zhì)量，保證其療效，采用HPLC法對白帶丸中芍藥苷、鹽酸小檗堿成分同時進行測定。方法學考察結(jié)果表明，該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準確，樣品處理簡單。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－20AT高效液相色譜儀，SPD－20A UV／VIS檢測器（日本島津公司）；Mettler AE240電子分析天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）；KS－ 300E超聲波清洗機（寧波科生儀器廠）。

1.2 試藥 芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110736－201035）、鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110713－200910）；樣品為白帶丸（河北萬歲藥業(yè)有限公司，批號為：130103、130409；山東孔圣堂制藥有限公司批號：20806）；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Wondasil C18Superb（4.6 mm×250 mm，5μm），流速：1.0 mL·min－1，柱溫：40℃，以乙腈為流動相A，0.3%磷酸溶液為流動相B，按梯度洗脫；檢測波長0～12 min，230 nm；12～23 min，320 nm；23～35 min，230 nm，結(jié)果見表1。。在此色譜條件下，理論板數(shù)按芍藥苷、鹽酸小檗堿計算均不低于4 000。

表1 梯度洗脫順序

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷（11.20 mg）、鹽酸小檗堿（12.30 mg），加甲醇制成每1 mL分別含芍藥苷106.29μg、鹽酸小檗堿60.21μg的混合溶液，作為對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取約0.3 g，精密稱定，精密加入鹽酸－50%甲醇（1∶100）混合溶液25 mL，稱定重量，超聲處理30 min（500 W，40 kHz），放冷，用鹽酸－50%甲醇（1∶100）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［1］。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取處方中除白芍、黃柏外的其他藥味，按白帶丸制備方法制成陰性樣品，按“2.2.2”項下方法操作，制備陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗 分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在供試品色譜峰與對照品色譜峰相應保留時間的位置上，供試品有相同保留時間的色譜峰，陰性對照溶液無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 白帶丸測芍藥苷及鹽酸小檗堿HPLC圖A.對照品；B.樣品；C.陰性對照樣品 1.芍藥苷；2.鹽酸小檗堿

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、20.0μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，芍藥苷回歸方程為：Y＝1 489 931X＋6 014，r＝0.999 9；鹽酸小檗堿回歸方程為：Y＝549 986X＋14 100，r＝0.999 9。結(jié)果表明芍藥苷在0.106 29～2.125 8μg·mL－1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，鹽酸小檗堿在0.060 21～1.204 2 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取“2.2.1”項下對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣5次，結(jié)果芍藥苷、鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為0.26%、0.62%，表明精密度良好。

2.6 重復性試驗 取同一批（批號：130103）樣品6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，以“2.1”項下色譜條件測定峰面積。結(jié)果芍藥苷及鹽酸小檗堿含量的平均值（n＝6）分別為4.38、4.40 mg·g－1，RSD分別為1.5%、1.9%，表明本法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，置室溫下放置，分別在0、2、4、8、16、24 h各進樣10μL，測定芍藥苷、鹽酸小檗堿色譜峰峰面積RSD分別為0.39%、0.36%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗 取已知含量的本品（批號：130103，芍藥苷及鹽酸小檗堿含量分別為4.38、4.40 mg·g－1）供試品適量，研細，取約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共6份，分別精密加入對照品溶液5 mL及鹽酸－50%甲醇（1∶100）20 mL，按“2.2.2”項下方法制備，測定芍藥苷及鹽酸小檗堿的含量，計算平均回收率及RSD值，結(jié)果見表2、3。

表2 芍藥苷的加樣回收結(jié)果

表3 鹽酸小檗堿的加樣回收結(jié)果

2.9 樣品測定 取不同批號的樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 芍藥苷、鹽酸小檗堿分別在230、320 nm處有最大吸收，采用單波長不能兼顧這兩種成分的檢測，選擇雙波長檢測模式。

3.2 提取溶劑、提取方法及提取時間的選擇 比較了超聲提取法和加熱回流法，兩種方法提取效率相當，但超聲提取法操作簡單；考察了以甲醇，50%甲醇，鹽酸－50%甲醇（1∶100）混合溶液為提取溶劑［3～10］，結(jié)果鹽酸－50%甲醇（1∶100）混合溶液提取效果較好；考察了超聲提取15、30、45、60 min，實驗表明超聲提取30 min后，延長提取時間，提取量無明顯差別。故確定以鹽酸－50%甲醇（1∶100）混合溶液為提取溶劑，超聲提取30 min。

3.3 流動相的選擇 本試驗通過選用不同溶劑系統(tǒng)作為流動相進行試驗，分別采用乙腈－水、乙腈－0.3%磷酸溶液等作為流動相［3～10］，結(jié)果表明，乙腈－0.3%磷酸溶液峰形好，基線較穩(wěn)定。同時，為解決芍藥苷與鹽酸小檗堿的分離問題，選擇梯度洗脫程序，同時也大大縮短分析時間。因此選擇乙腈－0.3%磷酸溶液進行梯度洗脫。

3.4 小結(jié) 采用雙波長HPLC同時測定白帶丸中芍藥苷、鹽酸小檗堿的含量，靈敏度高，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于該制劑質(zhì)量控制的依據(jù)。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：655－656.

［2］ 鄧君麗，梁洪華.HPLC法測定白帶丸中芍藥苷的含量［J］.中國藥品標準，2005，6（3）：205－206.

［3］ 張玲容.HPLC測定白帶丸中鹽酸小檗堿的含量［J］.中華中醫(yī)藥學刊，2011，29（4）：905－906.

［4］ 師永清，康淑荷，王愛軍.HPLC法同時測定黃連雙清丸中梔子苷、芍藥苷、黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素的含量［J］.藥物分析雜志，2013，33（9）：1612－1616.

［5］ 劉峰.HPLC法測定天麻眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的含量［J］.藥學研究，2014，33（7）：386－388.

［6］ 吳基威，朱銳金.高效液相色譜法測定茴桂婦炎膠囊中芍藥苷的含量［J］.中國中醫(yī)藥雜志，2010，17（11）：43.

［7］ 李啟紅，楊青軍，于紹華.HPLC法測定胃炎康膠囊中芍藥苷、鹽酸小檗堿及甘草酸的含量［J］.中國保健營養(yǎng)，2010，10（1）：32－34.

［8］ 蔡清宇，張沂，郝特，等.HPLC法測定舒利通顆粒中巴馬丁和小檗堿的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16（2）：42－44.

［9］ 董長萍，張丹，李生，等.HPLC測定清胃止痛微丸中鹽酸小檗堿和芍藥苷的含量［J］.中國現(xiàn)代中藥，2014，16（12）：1027－1030.

［10］彭柳，周俊，范開靜，等.HPLC法測定金明和胃膠囊中鹽酸小檗堿的含量［J］.中國現(xiàn)代中藥，2013，27（5）：66－68.

Determ ination of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Baidai Pills by HPLC

MA Shuai1，GE Jie-ying2，ZHOU Peng1
（1．Zibo Institute for Food and Drug Control，Zibo 255086，China；2．Anqiu Luan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Anqiu 262100，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Baidai Pills.M ethodsPaeoniflorin and berberine hydrochloride were separated on Wondasil C18Superb（4.6 mm×250 mm，5μm）column.Themobile phasewas acetonitrile and 0.3%phosphoric acid－solution in gradientmode.The flow rate was 1.0 mL·min－1.The detection wavelength for paeoniflorin was set at 230 nm，and 320 nm for berberine hydrochloride.ResultsThe linear range of paeoniflorin and berberine hydrochloride were 0.106 29～2.125 8μg·mL－1（r＝0.999 9）and 0.060 21～1.204 2μg·mL－1（r＝0.999 9），and their average recoverieswere98.45%and 100.52%respectively.ConclusionThemethod can be used for the quality control of Baidai Pills.

Baidai Pills；Paeoniflorin；Berberine Hydrochloride；HPLC

R927．2

A

2095－5375（2015）07－0398－003

馬帥，女，藥師，研究方向：藥物分析，E－mail：331425710＠qq.com