扶正化積合劑質量標準研究

仕海濤

山東省日照市婦幼保健院，山東日照276826

扶正化積合劑質量標準研究

仕海濤

山東省日照市婦幼保健院，山東日照276826

目的建立扶正化積合劑的質量控制方法。方法對扶正化積合劑中黃芪、淫羊蕾、三七進行薄層色譜鑒別;采用高效液相色譜法對黃芪甲苷進行含量測定。結果扶正化積合劑中黃芪、淫羊蕾、三七的薄層色譜均斑點清晰，陰性對照無干擾;黃芪甲苷進樣量在0.2102～4.2040 μg范圍內線性關系良好(r=0.9997)，平均回收率為96.8%，RSD為0.87%(n=6)。結論本研究建立的薄層色譜法和高效液相色譜法專屬性強，準確度高，重復性好，可用于扶正化積合劑的質量控制。

扶正化積合劑;質量標準;薄層色譜法;高效液相色譜法;黃茂甲苷

扶正化積合劑是山東省日照市婦幼保健院(以下簡稱“我院”)自行研制用于治療氣虛血疲、痰濕積聚，癥見疲乏無力、四肢倦怠、精神不振，痰涎壅盛，舌體胖、舌質黯或有疲斑、疲點，苔厚膩，脈沉弦滑的醫(yī)院制劑，處方由黃芪、炙黃芪、仙鶴草、法半夏、茯荃、三七、雞血藤、淫羊蕾、醋鱉甲、砂仁等十味中藥組方而成，具有補氣扶正、活血化疲、化痰散結功能，用于晚期肺癌、胃癌、食管癌等見上證者。為了有效控制扶正化積合劑的質量，本文參照《中國藥典》2010年版中的有關鑒別方法，采用薄層色譜法對本制劑中三七［1］11、黃芪［1］283、炙黃芪［1］283、淫羊蕾［1］306、進行鑒定分析，筆者參照《中國藥典》2010年版一部黃芪項下黃芪甲苷的含量測定方法及其有關資料對其中的黃芪甲苷含量進行了測定。結果顯示本方法專屬性強，簡便易操作，結果準確，且重現(xiàn)性好，可用于控制扶正化積合劑的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-10ATVP高效液相色譜儀及其工作站(日本島津公司);精密電子天平(瑞士Sartorius);HHS21.4電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械三廠);三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);HS3120超聲波清洗器(天津市蘭博實驗儀器設備有限公司);GZX-9076MBE型數(shù)顯鼓風干燥箱溫控議(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療儀器廠)。

1.2 試藥

黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:0781-200311);黃芪對照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:120974-200609);淫羊蕾對照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:120941-200807);三七對照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110737-200415);甲醇、乙腈為色譜純，水為三重蒸餾水，甲酸、甲醇、乙醇、乙酸乙醋、硫酸、三氯甲烷、正丁醇、丁酮、氨水、三氯化鋁、氫氧化鈉均為分析純，扶正化積合劑(日照市婦幼保健院制劑室制備，批號:140511、140523、140618、10706)，陰性對照品為我院制劑室制備，所用藥材均符合《中國藥典》2010年版一部有關要求;硅膠G薄層板、硅膠H薄層板(青島勝?；び邢薰?。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

本制劑的鑒別主要是對君藥(黃芪、炙黃芪)、淫羊蕾、三七進行了鑒別。

2.1.1 黃芪的薄層色譜鑒別取本品10 mL，加乙酸乙醋提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙醋提取液，濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另精密稱取黃芪對照藥材1.0 g，并加入乙酸乙醋20 mL，超聲10 min后濾過，濾液濃縮至1 mL左右，將其作為對照藥材溶液。參考《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB項下的薄層色譜法進行試驗:各吸取供試品溶液、對照藥材溶液均為5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇(8.5∶1.5)，進行展開，取出并晾干，置NH3蒸氣中熏制，365 nm波長下行紫外光燈檢視。供試品溶液色譜圖片顯示，在與對照藥材溶液色譜的相應位置處，呈現(xiàn)相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液色譜顯示其他藥味無干擾。見圖1(封三)。

2.1.2 淫羊藿的薄層色譜鑒別取淫羊蕾苷對照品，加甲醇制成每1毫升含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取鑒別項下供試品溶液和淫羊蕾對照品溶液各10 μL，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙醋-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照品色譜顯示其他藥味無干擾。見圖2(封三)。

2.1.3 三七的薄層色譜鑒別精密量取本品25 mL，加飽和狀態(tài)的正丁醇提取，共計3次，每次30 mL，合并其提取液，用1%NaOH溶液洗滌，共計2次，每次25 mL，濾液蒸干，并加入甲醇約2.5 mL溶解，將其作為供試品溶液備用。另取三七對照藥材1.0 g，加水10 mL，攪勻，加飽和狀態(tài)的正丁醇10 mL，均勻振蕩10 min，放置2 h，離心取上清液，加3倍量的正丁醇飽和水，振蕩均勻，放置并使之分層，取正丁醇層，蒸干，濾液蒸干，并加甲醇約1 mL溶解，將其作為對照藥材溶液。參考《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB項下薄層色譜法進行試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液均為5 μL，點于同一硅膠G薄層板上，于低于10℃下以三氯甲烷-乙酸乙醋-甲醇-水(15∶50∶25∶10)的下層溶液作為展開劑，進行展開。試驗完畢，取出薄層板并晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰顯現(xiàn)。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上，有相同顏色的熒光斑點出現(xiàn)，陰性對照品溶液色譜顯示其他藥味無明顯干擾。見圖3(封三)。

2.2 檢查

按照《中國藥典》2010年版附錄ⅠJ合劑項下的要求，進行相關的檢查。

2.2.1 相對密度相對密度的檢查按照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅦA應不低于1.02，采用比重瓶法測定。結果顯示，三批樣品(批號:140511、140523、140618)的相對密度測定結果分別為1.06、1.03、1.02。根據(jù)三批樣品測定的結果，暫確定本制劑的相對密度不得低于1.02。

2.2.2 pH值按照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅦG法測定應為4.0～6.0。結果顯示，三批樣品(批號:140511、140523、140618)的pH測定結果分別為4.24、4.79、5.24。根據(jù)三批樣品測定的結果，暫確定本制劑的pH控制在4.0～6.0。

2.2.3 最低裝量檢查按照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅫC最低裝量檢查法。本制劑為多劑量包裝，每一瓶裝量為200 mL。按規(guī)定的方法檢查，結果表明裝量均不小于標示量的97%。

2.3 黃茂甲苷含量測定

2.3.1 色譜條件色譜柱:Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(68∶32);檢測波長:205 nm;柱溫:40℃;流速:1 mL/min;進樣量:10 μL;黃芪甲苷的保留時間為:25.971 min。

2.3.2 黃芪甲苷對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品10.51 mg，用甲醇定容至25 mL的容量瓶中，制成濃度為0.4204 mg/mL的對照品溶液備用。

2.3.3 黃芪甲苷供試品溶液的制備精密量取本品20 mL，用飽和的正丁醇溶液提取，共計3次，每次35 mL，合并濾液，用NH3溶液充分洗滌，共計2次，每次35 mL，棄去NH3溶液，濾液蒸干，并加水約10 mL振搖溶解，室溫放置，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑d= 1.5 cm，柱高H=12 cm)，洗脫，棄去水液，再加30 mL左右的40%乙醇洗脫，棄去洗脫液，并用80 mL左右的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，放干，加甲醇溶液使之溶解，后移入10 mL的容量瓶中，搖勻，即得，備用。

2.3.4 線性關系考察試驗精密吸取黃芪甲苷對照品溶液0.5、1、2、4、6、8 mL，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，并取同黃芪甲苷對照品溶液10 μL左右分別進樣。以峰面積(Y)對進樣量(X)行線性回歸，結果回歸方程為:Y=1691.615X+4.154，r=0.9997，線性范圍為: 0.2102～4.2040 μg，表明在此范圍內線性關系較好。

2.3.5 陰性空白試驗取缺黃芪、炙黃芪的陰性對照品按照扶正化積合劑的方法制備相關溶液，再參考“2.3.3”項下供試品溶液的方法制備陰性對照品溶液，參考“2.3.1”項下的色譜條件進樣檢測。結果，在黃芪甲苷對照品相同位置上無干擾峰(圖4)，表明處方中其他藥味對黃芪甲苷的測定未形成明顯干擾。

2.3.6 精密度試驗取對照品溶液，參考“2.3.1”項下色譜條件進樣檢測測定，連續(xù)6次，結果顯示，對照品溶液中的黃芪甲苷溶液峰面積的RSD為0.85%(n=6)，提示其精密度試驗良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗取樣品溶液，參考“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，依據(jù)“2.3.1”項下色譜條件進樣，分別在0、5、10、15、20、25 h進行測定，結果顯示，在25 h內供試品溶液的黃芪甲苷峰面積的RSD為1.04% (n=6)，提示該方法穩(wěn)定性較好。

2.3.8 重復性試驗精密量取同一批號的樣品(批號: 140511)6份，每份10 mL，參考“2.3.3”項下方法制備供試品溶液。結果顯示，供試品溶液中黃芪甲苷的平均含量值為0.1417 mg/mL，RSD為0.63%(n=6)，提示該方法重復性較好。

2.3.9 加樣回收率試驗精密量取已知含量的樣品溶液6份(批號:140511，測得含量為0.1417 mg/mL)，分別準確加入黃芪甲苷對照品，搖晃均勻，參考“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，用外標法計算含量。結果顯示，黃芪甲苷的平均回收率為96.8%，RSD為0.87% (n=6)。見表1。

2.3.10 樣品測定取4個批號下的扶正化積合劑(批號:140511、140523、140618、140706)，參考“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，依據(jù)“2.3.1”項下色譜條件進樣，測定其相應的峰面積，以外標法計算樣品的含量，測定3次，取其平均值。見表2。

3 討論

3.1 試驗方法的選擇

本研究利用薄層定性來鑒別黃芪、淫羊蕾、三七，結果其分離度好，專屬性強。另外，在《中國藥典》2010年版中，黃芪藥材的含量測定方法已經采用HPLC法［1］［212］，另有資料顯示含黃芪的復方制劑現(xiàn)多采用HPLC法測定黃芪甲苷的含量［2-8］。本文采用HPLC法對扶正化積合劑中黃芪甲苷進行含量測定，操作簡單，分離度好，靈敏度高。

3.2 試驗波長的選擇

采用高效液相色譜法測定黃芪甲苷的含量，需選擇適當?shù)牟ㄩL進行檢測。參考《中國藥典》2010年版一部項下黃芪采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，由于該檢測器普及程度低，不便操作，故筆者參照有關資料［9］選用紫外檢測器檢測。由于黃芪皂苷種類較多，結構相近，紫外掃描只在200 nm有末端吸收，因此定在200 nm處檢測［10-15］，實驗表明，波長越長，噪聲越小，但靈敏度越低;越靠近200 nm，靈敏度越高，但噪聲越大，綜合考察這兩個因素，本實驗選取205 nm作為檢測波長，測得的黃芪甲苷峰峰形好，取得了滿意的效果。

3.3 試驗流動相的選擇

在選用流動相時，筆者分別使用甲醇-水(68∶32)［16］、乙腈-水(32∶68)［17］、(40∶60)［18］、(35∶65)［19-20］、(1∶2)［21-22］等進行試驗。經多次實驗，流動相甲醇-水(68∶32)峰形好，響應值大，理論板數(shù)高。流動相乙腈-水(32∶68)峰形好，理論板數(shù)雖然高，但響應值略小，其他3種流動相峰形不理想，故筆者以甲醇-水(68∶32)作為流動相，取得了滿意的分離效果和測量效果。

3.4 試色譜條件的選擇

對樣品制備時4次正丁醇提取后的水液按“2.3.3”項下方法制備成樣品，按既定色譜條件進行檢測，結果在黃芪甲苷對照品相同位置處未發(fā)現(xiàn)色譜峰，可見本實驗采用的提取方法提取率高。

綜上所述，本研究建立的薄層色譜法和高效液相色譜法專屬性強，簡便易操作，結果準確，且重現(xiàn)性好，可用于扶正化積合劑的質量控制。

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Quality standard of Fuzheng Huaji Mixture

SHI HaitaoRizhao Maternity and Child Care Hospital，Shandong Province，Rizhao276826，China

Objective To establish the method for quality control of Fuzheng Huaji Mixture.Methods Astragali Radix，Eplmedii Folium，Notoginseng Radix Et Rhizoma in Fuzheng Huaji Mixture were indentified by TLC.The content of AstragalosideⅣin Fuzheng Huaji Mixture was determined by HPLC.Results The spots of Astragali Radix，Eplmedii Folium，Notoginseng Radix Et Rhizoma in Fuzheng Huaji Mixture on the TLC plate were clear，and the negative control sample had no interference，a good linearity was obtained for AstragalosideⅣin the range of 0.2102-4.2040 μg(r= 0.9997).The average recovery was 96.8%，RSD=0.87%(n=6).Conclusion The method is specific，accurate and reproducible，it can be used for quality control of Fuzheng Huaji Mixture.

Fuzheng Huaji Mixture；Quality standard；TLC；HPLC；AstragalosideⅣ

R284

A

1673-7210(2015)02(c)-0091-04

2014-11-22本文編輯:衛(wèi)柯)