miRNA-185在前列腺癌中的臨床意義研究

朱 清

（河南省南陽市中心醫(yī)院泌尿外科 473000）

前列腺癌（prostate cancer）是歐美國(guó)家男性常見的惡性腫瘤，近年來，因?yàn)槲覈?guó)人們生活習(xí)慣及飲食結(jié)構(gòu)的改變，前列腺癌的發(fā)病率也在逐漸增加，已成為常見的泌尿腫瘤[1]。前列腺特異性抗原（PSA）是前列腺癌篩選、診斷及預(yù)后判斷的經(jīng)典血清學(xué)指標(biāo)，但PSA的臨床運(yùn)用存在一定的局限性，因此尋找可靠、有效的分子標(biāo)記物來指導(dǎo)前列腺癌的診斷和預(yù)后分析仍然是臨床上研究的熱點(diǎn)[2]。miRNA（miRNA）是一類長(zhǎng)約18～24個(gè)核苷酸的小分子非編碼單鏈RNA，其通過與靶基因互補(bǔ)配對(duì)，在翻譯水平調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA廣泛表達(dá)于各種組織和器官，在細(xì)胞的增殖和凋亡、器官形成、發(fā)育等生命過程中發(fā)揮著重要的作用[3]。miRNA-185是一種新發(fā)現(xiàn)的具有抑癌活性的短小RNA[4]，本研究檢測(cè)了前列腺癌患者miRNA-185表達(dá)的情況，探討其與前列腺癌的關(guān)系，以期為前列腺癌的早期預(yù)防及分子靶向治療提供更多的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年1月至2013年1月本院泌尿外科收治的前列腺癌患者64例，年齡44～76歲，平均（63.5±8.3）歲，所有病例術(shù)前均未經(jīng)放化療處理，病例標(biāo)本取自臨床前列腺癌根治術(shù)，每例患者均留取前列腺癌標(biāo)本和癌旁正常對(duì)照組織，上述樣品均經(jīng)病理確診。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 Trizol、RNA提取試劑盒、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自大連寶生物科技公司，Has-miRNA-185莖環(huán)引物由上海吉瑪生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成，Real-time PCR儀為美國(guó)羅氏公司產(chǎn)品。

1.2.2 Real time-PCR檢測(cè)miRNA-185的表達(dá) 采集患者靜脈血2mL，1 500g 15min分離上清液，加入1mL Trizol，按照試劑盒說明提取細(xì)胞RNA，逆轉(zhuǎn)錄莖環(huán)引物和M-mLV逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄，TaqDNA聚合酶、Has-miRNA-185莖環(huán)引物和SYBR Green熒光染料定量檢測(cè)miRNA-185的表達(dá)量。HasmiRNA-126莖環(huán)引物序列為：上游序列5′-GCT GTG GAG AGA AAG GCA GTC TG-3′；下游序列5′-GTG CAG GGT CCG AGG T-3′。miRNA-185的表達(dá)量使用2-△Ct評(píng)估。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用±s表示，使用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌組織中miRNA-185表達(dá)的變化 前列腺癌組織和癌旁正常組織中miRNA-185的表達(dá)量分別為（0.175±0.083）2-△Ct、（0.344±0.112）2-△Ct，前列腺癌組織miRNA-185的表達(dá)量顯著低于癌旁正常組織（P＜0.01）。

2.2 前列腺癌患者miRNA-185表達(dá)變化與臨床各相關(guān)指標(biāo)之間的關(guān)系 將前列腺癌患者根據(jù)患者年齡、PSA表達(dá)水平、Gleason評(píng)分、臨床分期、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移進(jìn)行分組，結(jié)果顯示前列腺癌患者miRNA-185表達(dá)與年齡無顯著的相關(guān)性（P＞0.05），然而前列腺癌患者患者miRNA-185表達(dá)在不同PSA表達(dá)水平、Gleason評(píng)分、臨床分期、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 前列腺癌患者不同臨床指標(biāo)中DACH1基因啟動(dòng)子甲基化陽性率的比較（±s）

表1 前列腺癌患者不同臨床指標(biāo)中DACH1基因啟動(dòng)子甲基化陽性率的比較（±s）

a：P＜0.05，同指標(biāo)不同分組之間比較。

臨床指標(biāo) n miRNA-185表達(dá)量（2-△Ct ）年齡（歲）≥65 38 0.176±0.081＜65 26 0.174±0.084 PSA表達(dá)水平（ng／mL）≥10 34 0.131±0.062＜10 30 0.225±0.113a Gleason評(píng)分（分）≥8 29 0.124±0.058＜8 35 0.217±0.108a臨床分期≥T2A 39 0.144±0.061＜T2A 25 0.223±0.112a遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無40 0.203±0.091有24 0.128±0.052a

3 討論

前列腺癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多步驟變化過程，其中涉及多種基因的激活，或者多個(gè)基因的失活[5-6]。miRNAs控制著機(jī)體60%以上的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[7]，miRNA-185可以抑制細(xì)胞的增殖，阻止細(xì)胞周期的進(jìn)展，例如在H1299細(xì)胞中可以使細(xì)胞停滯在G1期[8]。本研究采用莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量的方法檢測(cè)了64份前列腺癌組織中miRNA-185的表達(dá)，與癌旁的正常前列腺組織比較，發(fā)現(xiàn)前列腺癌組織中miRNA-185的表達(dá)顯著低于癌旁的正常對(duì)照前列腺組織，提示了miRNA-185表達(dá)的下調(diào)可能參與了前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。

本研究觀察到miRNA-185表達(dá)在高PSA表達(dá)水平、Gleason評(píng)分、臨床分期和有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的前列腺癌患者顯著低于低PSA表達(dá)水平、Gleason評(píng)分、臨床分期和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的前列腺癌患者。Gleason評(píng)分代表著腫瘤分化的程度中、高分化腫瘤小于或等于8分，低分化腫瘤大于8分，可以推斷miRNA-185低表達(dá)可能參與了前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移，并可能成為前列腺癌預(yù)后評(píng)估的監(jiān)測(cè)因子。去雄激素治療是前列腺癌效果較好的一種方法，但其效果是暫時(shí)的，大部分患者經(jīng)過一段時(shí)間的治療后會(huì)發(fā)展為激素非依賴性前列腺癌，目前一些臨床上使用的化療藥物絕大多數(shù)為細(xì)胞毒性藥物，不良反應(yīng)大，而且容易誘發(fā)腫瘤多藥耐藥的產(chǎn)生，最終會(huì)導(dǎo)致治療的無效[9]。尋找新的靶點(diǎn)就顯得很有必要，慢病毒攜帶miRNA-185就是一種很有前景的治療方法，隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展，miRNA-185有可能成為前列腺癌的一個(gè)潛在治療靶點(diǎn)[10]。

綜上所述，本研究顯示前列腺組織中miRNA-185低表達(dá)參與了前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程，有可能作為前列腺癌分級(jí)、預(yù)后評(píng)估的新指標(biāo)和潛在治療靶點(diǎn)。

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