溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞抗氧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響

亢玉靜，趙 文，魏 杰

大連海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧省水生生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，大連 116023

溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞抗氧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響

亢玉靜，趙 文*，魏 杰

大連海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧省水生生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，大連 116023

采用實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)方法，研究了溫度(T=16、19、22、25、28℃)、鹽度(S=5、10、15、20、25)對(duì)西藏?cái)M溞總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活力以及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量的影響。結(jié)果表明：溫度和鹽度能夠誘導(dǎo)西藏?cái)M溞抗氧化應(yīng)激反應(yīng)，脅迫24h后，SOD、GPX活性及MDA含量在28℃、鹽度20時(shí)均達(dá)到最高值，分別為(37.18±1.97) U mg-1μg-1、(75.1±9.96) U mg-1μg-1和(12.24±2.12) nmol mg-1μg-1；48h后，高溫低鹽組(25—28℃、5—10)和高溫高鹽組(25—28℃、20—25)SOD、GPX活性及MDA含量顯著高于其他處理組(P<0.05)，在28℃，鹽度5時(shí)均達(dá)到最大值，分別為(19.25±3.48) U mg-1μg-1、(59.95±4.66) U mg-1μg-1和(4.98±0.66) nmol mg-1μg-1；溫度、鹽度以及這兩個(gè)因子之間對(duì)西藏?cái)M溞體內(nèi)SOD、GPX活性和MDA含量均有極顯著影響(P<0.01)。

西藏?cái)M溞；溫度；鹽度；總超氧化物歧化酶；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶；丙二醛

西藏?cái)M溞(DaphniopsistibetanaSars，1903)隸屬溞科(Daphniidae)擬溞屬Daphniopsis，是一種冷水性鹽水枝角類，在我國(guó)主要分布于西藏、青海、新疆等高海拔、高寒、貧營(yíng)養(yǎng)型鹽水水體。分布水體多為碳酸鹽型，水溫-2—18℃、鹽度2.7—35、pH8.7—10.4[1- 6]。枝角類作為海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖中的一種新的活餌料，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)其進(jìn)行了一系列的研究，其中蒙古裸腹溞(MoinamongolicaDaday)在海水中的大量培養(yǎng)和投喂試驗(yàn)獲得了一定的成效[1]，但該溞屬喜暖性種類，在北方低水溫期培養(yǎng)需升溫而有其局限性，而西藏?cái)M溞雖發(fā)育期比較長(zhǎng)，繁殖力也低于蒙古裸腹溞，但仍高于海產(chǎn)橈足類，其耐低溫性可彌補(bǔ)上述缺憾，比較適合北方多數(shù)海產(chǎn)魚(yú)、蝦類育苗期的水溫條件，有望成為海水魚(yú)、蝦苗種階段的活餌料[7]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)西藏?cái)M溞的自然分布[1]、生物學(xué)特征[1]、形態(tài)構(gòu)造[8]、生活習(xí)性[9]、染色體核型[10]、耗氧率[7]和排氨率[11]等方面進(jìn)行了研究，但有關(guān)于西藏?cái)M溞對(duì)環(huán)境因子(溫度、鹽度、pH等)脅迫的生物抗性與細(xì)胞內(nèi)保護(hù)酶系統(tǒng)的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。環(huán)境脅迫可造成機(jī)體自由基代謝紊亂，體內(nèi)活性氧含量及抗氧化酶活性發(fā)生變化，產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，若長(zhǎng)期處于應(yīng)激狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫防御能力下降，從而影響生物正常生長(zhǎng)?？寡趸妇哂邢龣C(jī)體氧自由基的功能，對(duì)增強(qiáng)吞噬細(xì)胞防御能力和機(jī)體免疫功能有重要作用[12]。因此，研究西藏?cái)M溞抗氧化效應(yīng)對(duì)于探索其環(huán)境適應(yīng)機(jī)制和提高機(jī)體抗氧化免疫能力具有重要意義。本文研究了溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)活力以及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的影響，旨在為西藏?cái)M溞室內(nèi)馴化及規(guī)?；囵B(yǎng)條件、作為海水環(huán)境監(jiān)測(cè)生物的可行性提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用的西藏?cái)M溞系于2007年6月采自西藏那曲的納木卡錯(cuò)，馴化培養(yǎng)于鹽度15的稀釋海水中，以混合餌料為食物。試驗(yàn)前挑選300只相對(duì)同步、體格健壯的帶卵成溞，在溫度16℃、鹽度為15的稀釋海水中培養(yǎng)，待孤雌生殖第一代后，將幼溞挑出，繼續(xù)培養(yǎng)幼溞，如此反復(fù)，以獲得試驗(yàn)所需的同步性良好的成溞，避免由于個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

1.2 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)用水來(lái)源于大連黑石礁近海，經(jīng)沉淀、砂濾、300目篩絹網(wǎng)過(guò)濾、煮沸消毒，用純水調(diào)整到試驗(yàn)所需鹽度。所有試驗(yàn)均用250mL燒杯，裝入200 mL培養(yǎng)液，每燒杯放入成溞20只。溫度以光照培養(yǎng)箱控制，光照強(qiáng)度為1500lx，光周期為12 L∶12 D。培養(yǎng)期間用混合餌料(蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidosa)：鹽生杜氏藻(Dunaliellasalina)：牟氏角毛藻(Chaetocerosmuelleri)：湛江等鞭金藻(Isochrysiszhanjiangensis)=1∶1∶1∶2)作為餌料投喂。將配好的餌料，用淡水稀釋1倍后進(jìn)行投喂，餌料濃度約為8.5—9.5×106個(gè)/mL。試驗(yàn)所用個(gè)體均為20日齡成溞，其平均體長(zhǎng)為(1.75±0.05) mm。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)西藏?cái)M溞對(duì)溫度及鹽度的耐受范圍，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)溫度分為16、19、22、25℃和28℃，鹽度分為5、10、15、20、25五個(gè)梯度，脅迫時(shí)間為24h和48h，共50個(gè)處理組，每一處理組設(shè)置3個(gè)重復(fù)。將在溫度16℃，鹽度15下培養(yǎng)出來(lái)的同步成溞(平均體長(zhǎng)為(1.75±0.05)mm)放入250mL燒杯，每個(gè)燒杯20只，培養(yǎng)液200mL，試驗(yàn)在光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行，溫度變幅在±0.5℃以內(nèi)，試驗(yàn)過(guò)程中不投餌。試驗(yàn)結(jié)束后，將溞從燒杯中挑出，用濾紙吸除體表的水分，放入2mL離心管中，經(jīng)電子天平稱得最終體質(zhì)量(精確至0.0001g)。

1.4 粗酶液制備

用移液槍量取0.5mL預(yù)冷(4℃)的勻漿介質(zhì)(pH 7.36，濃度0.01mol/L 的PBS緩沖液)加入裝有溞體的2mL離心管中，在冰浴的條件下進(jìn)行超生波破碎(400安培，5s每次，間隔10s反復(fù)3—5次)，低溫高速離心(4℃,10000r/min，10min)，上清液備用。

1.5 酶活測(cè)定

采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定T-SOD、GPX活性和MDA、蛋白質(zhì)含量，操作步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

SOD活性的測(cè)定 采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，SOD活性定義：每毫克組織蛋白在1mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50.0%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為1個(gè)SOD活力單位(U)。

GPX活性的測(cè)定 采用二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)消耗法測(cè)定，GPX活性定義：每毫克蛋白質(zhì)，每分鐘扣除非酶反應(yīng)的作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1μmol/L為1個(gè)酶活力單位(U)。

MDA含量的測(cè)定 采用硫代巴比妥酸法測(cè)定，過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛(MDA)可與硫代巴比妥酸(TBA)縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰，從而計(jì)算MDA含量。

可溶性蛋白含量的測(cè)定 采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。數(shù)據(jù)結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(Mean±S.D.)表示，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞SOD活性的影響

圖1 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞SOD活性的影響Fig.1 Effect of temperature and salinity on the SOD activity of Daphniopsis tibetana Sars小寫(xiě)字母不同表示同一鹽度下不同溫度處理組差異顯著(P<0.05)；大寫(xiě)字母不同表示同一溫度下不同鹽度處理組差異顯著(P<0.05); SOD：超氧化物歧化酶 Superoxide dismutase

溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞SOD活性的影響示于圖1。從圖1可見(jiàn)，溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞體內(nèi)SOD活性均有顯著影響(P<0.05)。脅迫24h后，同一鹽度下，西藏?cái)M溞SOD活性隨著溫度的升高而升高，25℃和28℃與其他處理組相比，差異顯著(P<0.05)，在溫度28℃、鹽度20時(shí)SOD活性最高，為(37.18±1.97) U mg-1μg-1，其中鹽度為15時(shí)，隨著溫度的升高，西藏?cái)M溞SOD活性變化不明顯，范圍(1.67±0.76)—(3.27±0.1) U mg-1μg-1。而在溫度分別為25℃、28℃時(shí)，隨著鹽度的升高，溞體內(nèi)SOD活性變化幅度較為明顯，其范圍分別為(3.27±0.1)—(10.78±2.98) U mg-1μg-1，(1.67±0.76)—(37.18±1.97) U mg-1μg-1；在低溫組，隨著鹽度的升高其SOD活性變化較小。脅迫48h后，西藏?cái)M溞SOD活性隨著溫度和鹽度的改變與24h有相同的趨勢(shì)，在鹽度5，28℃時(shí)，SOD活性達(dá)到最高(19.25±3.48) U mg-1μg-1，在相同溫度、鹽度條件下，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，西藏?cái)M溞SOD活性變化不明顯(圖1)。

2.2 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞GPX活性的影響

溫度和鹽度影響西藏?cái)M溞體內(nèi)GPX活性(圖2)。脅迫24h后，當(dāng)鹽度為20及25時(shí)，隨著溫度的升高，西藏?cái)M溞體內(nèi)GPX活性呈先降低后升高的趨勢(shì)，變化較為明顯，其范圍分別(7.92±2.75)—(75.1±9.96) U mg-1μg-1、(8.07±0.98)—(31.65 ±1.7) U mg-1μg-1，而其他處理組GPX活性隨著溫度的升高而呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢(shì)；同一溫度下，隨著鹽度的升高，溞體內(nèi)GPX活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。在溫度28℃，鹽度20時(shí)達(dá)到最高值(75.1±9.96) U mg-1μg-1，其中溫度為16℃時(shí)，隨著鹽度的升高，GPX活性變化不明顯。脅迫48h后，同一鹽度下，西藏?cái)M溞GPX活性隨著溫度的升高呈先降低后升高趨勢(shì)，鹽度5，溫度25℃和28℃時(shí)，GPX活性顯著高于其他處理組(P<0.05)；同一溫度下，鹽度的升降能夠引起GPX活性的顯著改變(P<0.05)。在相同的溫度、鹽度條件下，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，高溫低鹽組(25—28℃、5—10)GPX活性顯著增強(qiáng)，其他處理組變化不明顯(圖2)。

圖2 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞GPX活性的影響Fig.2 Effect of temperature and salinity on the GPX activity of Daphniopsis tibetana SarsGPX：谷胱甘肽過(guò)氧化物酶Glutathione peroxidase

2.3 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞MDA含量的影響

溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞MDA含量有顯著影響(P<0.05)(圖3)。脅迫24h后，同一鹽度，MDA含量隨著溫度的升高呈先降低后升高的趨勢(shì)，其中，當(dāng)溫度為28℃，鹽度為20時(shí)MDA含量最高(12.24±2.12) nmol mg-1μg-1；最小值為(0.26±0.02) nmol mg-1μg-1，對(duì)應(yīng)的溫度為22℃，鹽度25。另外，鹽度為20時(shí)，MDA含量隨著溫度的升高而升高的幅度最大，范圍(0.43±0.13)—(12.24±2.12) nmol mg-1μg-1，鹽度為15時(shí)，溞體內(nèi)MDA含量隨著溫度超過(guò)25℃而急劇降低(3.41±0.53)—(0.74±0.1) nmol mg-1μg-1；同一溫度下，MDA含量隨著鹽度的升高而先升高后降低，溫度為16℃時(shí)，隨著鹽度的升高，溞體內(nèi)MDA含量變化不明顯。脅迫48h后，同一鹽度，隨著溫度的升高M(jìn)DA含量先降低后升高，鹽度15時(shí)，MDA含量隨著溫度的升高變化不明顯；高于16℃，同一溫度下，隨著鹽度的升高，MDA含量均有顯著變化(P<0.05)，在28℃，鹽度為5時(shí)達(dá)到最高值(4.98±0.66) nmol mg-1μg-1。在相同溫度、鹽度下，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，在高溫組(25—28℃)鹽度改變，MDA含量有所降低，其他處理組變化不明顯，其中在28℃，鹽度為25時(shí)，西藏?cái)M溞全部死亡(圖3)。

圖3 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞MDA含量的影響Fig.3 Effect of temperature and salinity on the MDA content of Daphniopsis tibetana SarsMDA：丙二醛Maleic dialdehyde

2.4 西藏?cái)M溞體內(nèi)抗氧化酶活性方差分析

由表1統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果所示，經(jīng)雙因子方差分析，溫度、鹽度以及這兩個(gè)因子之間的交互作用對(duì)西藏?cái)M溞SOD、GPX活性和MDA含量影響極顯著(P<0.01)。

表1 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞SOD、GPX活性和MDA含量影響的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果Table 1 Results of two-way ANOVA of the SOD、GPX and MDA for Daphniopsis tibetana Sars in different temperature and salinity

**為差異極顯著(P<0.01)

3 討論

3.1 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞抗氧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響

鹽度作為影響海洋無(wú)脊椎動(dòng)物生存、生長(zhǎng)和發(fā)育的一個(gè)重要環(huán)境因子，能夠直接影響動(dòng)物體內(nèi)滲透壓和離子濃度的調(diào)節(jié)[17]。西藏?cái)M溞是一種能進(jìn)行低滲和高滲雙向調(diào)節(jié)的廣鹽性鹽水枝角類，調(diào)節(jié)機(jī)制較為復(fù)雜。王巧晗等[15]通過(guò)鹽度(5、10、15、20、25)對(duì)西藏?cái)M溞存活、生長(zhǎng)、繁殖的影響發(fā)現(xiàn)，鹽度10，15組生長(zhǎng)最快，壽命長(zhǎng)于其他組，說(shuō)明在最適鹽度范圍內(nèi)，機(jī)體體內(nèi)各器官的活動(dòng)代謝處于平衡狀態(tài)，鹽度改變能夠影響西藏?cái)M溞的生長(zhǎng)發(fā)育。趙文等人曾在實(shí)驗(yàn)室條件下設(shè)置鹽度5、10、15、20和25測(cè)定西藏?cái)M溞耗氧率[7]、排氨率[11]。結(jié)果表明，該溞的個(gè)體耗氧率(IO)、比耗氧率(SO)及排氨率(NR)均隨鹽度升高而升高，說(shuō)明隨著鹽度的升高，西藏?cái)M溞的呼吸代謝增強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GPX活性和MDA含量變化趨勢(shì)相同，隨著鹽度的升高呈先上升后下降趨勢(shì)，在鹽度20時(shí)達(dá)到最大值，而SOD活性隨著鹽度的升高呈先降低后上升趨勢(shì)，在鹽度15時(shí)達(dá)到最小值，說(shuō)明鹽度的升降能夠引起西藏?cái)M溞體內(nèi)抗氧化酶及MDA含量的變化。有研究表明，抗氧化酶活力能夠隨代謝率和耗氧率的增加而升高[18]，本試驗(yàn)結(jié)果與之相符，外界鹽度的改變，使西藏?cái)M溞體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)多的活性氧自由基，為保護(hù)體內(nèi)細(xì)胞免受氧化損傷，抗氧化酶活力升高。GPX活性變化趨勢(shì)與SOD活性相反，說(shuō)明在低鹽度條件下GPX發(fā)揮主要作用，在高鹽度下SOD起主導(dǎo)作用，這可能與西藏?cái)M溞對(duì)于低滲和高滲調(diào)節(jié)的機(jī)制有關(guān)。在低鹽度下，機(jī)體出現(xiàn)了一定的氧化損傷，可能是因?yàn)槲鞑財(cái)M溞對(duì)低鹽度較為敏感，體內(nèi)產(chǎn)生的大量活性氧自由基超過(guò)了抗氧化酶的清除能力。在高鹽度下，MDA含量有所降低，可能是由于SOD的大量合成，清除了機(jī)體產(chǎn)生的大部分氧自由基，因而細(xì)胞內(nèi)生成的脂質(zhì)過(guò)氧化物較少，對(duì)西藏?cái)M溞的氧化損傷有所降低。通過(guò)目前對(duì)西藏?cái)M溞所做的研究發(fā)現(xiàn)，盡管西藏?cái)M溞能夠在低鹽以及高鹽條件下生長(zhǎng)一段時(shí)間，但是會(huì)導(dǎo)致機(jī)體自由基代謝紊亂，影響其健康生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2 溫度和鹽度交互作用對(duì)西藏?cái)M溞抗氧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響

以往的研究多集中于溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞生長(zhǎng)生殖的影響，關(guān)于溫鹽交互作用對(duì)其抗氧化酶的研究還尚未見(jiàn)報(bào)道。通過(guò)本試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，溫度、鹽度以及兩個(gè)因子交互作用對(duì)西藏?cái)M溞體內(nèi)SOD、GPX活性和MDA含量均有極顯著影響(P<0.01)，說(shuō)明西藏?cái)M溞體內(nèi)抗氧化酶活力不僅與溫度密切相關(guān)，還與鹽度有關(guān)。在本研究范圍內(nèi)，溫度16℃時(shí)，隨著鹽度的改變以及脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，西藏?cái)M溞體內(nèi)抗氧化酶活性和MDA含量變化相對(duì)不明顯，可能是與溫度較低有關(guān)；在19—22℃，低鹽或是高鹽條件下，西藏?cái)M溞體內(nèi)SOD、GPX活性以及MDA含量均相對(duì)較低，這與王巧晗等[15]的相關(guān)研究結(jié)果不一致，分析其原因是經(jīng)過(guò)多年的實(shí)驗(yàn)室條件馴化，隨著四季溫度的改變，遺傳基因可能有所變化，改變了原始的特性；通過(guò)本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，高溫低鹽環(huán)境下，西藏?cái)M溞體內(nèi)SOD、GPX活性以及MDA含量均有明顯增加，在高溫高鹽環(huán)境(28℃，鹽度25)下，西藏?cái)M溞全部死亡，說(shuō)明超過(guò)一定的溫度鹽度后，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，雖然機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活性增強(qiáng)，但是仍然無(wú)法避免機(jī)體損傷甚至造成死亡現(xiàn)象。

在試驗(yàn)過(guò)程中選擇不投餌，是因?yàn)榭紤]到餌料生物體內(nèi)也含有SOD、GPX和MDA，而溫度和鹽度的改變也會(huì)影響西藏?cái)M溞的攝食率，從而可能會(huì)導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)的生理生化指標(biāo)發(fā)生變化，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，西藏?cái)M溞在饑餓48h后仍然能夠進(jìn)行正常的生理活動(dòng)，因此為了避免餌料對(duì)結(jié)果的影響，選擇試驗(yàn)過(guò)程中不投餌。

綜上，通過(guò)本試驗(yàn)可以反映出西藏?cái)M溞體內(nèi)SOD、GPX活性以及MDA含量能夠反映對(duì)水體溫度和鹽度的敏感性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高溫條件下，鹽度改變能夠引起SOD、GPX活性和MDA含量的顯著升高，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，低溫條件下，鹽度的改變，西藏?cái)M溞SOD、GPX活性以及MDA含量較少，高溫低鹽及高溫高鹽促進(jìn)了GPX的合成，但同時(shí)也增加了MDA含量，說(shuō)明對(duì)機(jī)體造成了一定的氧化損傷，在28℃，鹽度25脅迫48h后，西藏?cái)M溞全部死亡。由此可以看出，西藏?cái)M溞對(duì)低溫條件下鹽度的升降有更強(qiáng)的適應(yīng)能力，能夠存活一段時(shí)間；而對(duì)高溫條件下，鹽度的大幅度改變的適應(yīng)力較差。西藏?cái)M溞在短時(shí)間內(nèi)能夠通過(guò)調(diào)動(dòng)體內(nèi)抗氧化酶活性等生理機(jī)制來(lái)緩解對(duì)外界環(huán)境的改變，但是隨著溫度的升高以及鹽度的改變，機(jī)體各機(jī)能會(huì)受到抑制，從而影響其生長(zhǎng)發(fā)育乃至存活。因此，在今后大規(guī)模培養(yǎng)的過(guò)程中應(yīng)避免長(zhǎng)時(shí)間的溫度升高以及鹽度的大幅度升降，要注意保持水體溫度和鹽度的穩(wěn)定。通過(guò)本試驗(yàn)對(duì)西藏?cái)M溞在溫度和鹽度脅迫不同時(shí)間后生理變化的研究，為環(huán)境因子對(duì)其他枝角類抗氧化酶系統(tǒng)的影響提供了數(shù)據(jù)和資料，并且為今后做較為系統(tǒng)的研究奠定了基礎(chǔ)。

[1] 趙文, 王巧晗, 鄭綿平, 趙元藝, 王海雷. 西藏?cái)M溞生物學(xué)的初步研究. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2002, 17(3): 209- 214.

[2] 蔣燮治, 堵南山. 中國(guó)動(dòng)物志. 淡水枝角類. 北京: 科學(xué)出版社, 1979: 297- 297.

[3] 蔣燮治, 沈韞芬, 龔循矩. 西藏?zé)o水無(wú)脊椎動(dòng)物. 北京: 科學(xué)出版社, 1983: 443- 492.

[4] 趙文. 內(nèi)陸鹽水水體枝角類研究述評(píng). 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 1991, 6(2): 31- 41.

[5] 趙文, 姜宏, 何志輝. 三北地區(qū)內(nèi)陸鹽水的浮游甲殼類. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 1996, 11(1): 1- 13.

[6] 沈嘉瑞, 宋大祥. 西藏枝角類的初步研究. 動(dòng)物學(xué)報(bào), 1964, 16(1): 61- 69.

[7] 趙文, 張琳, 霍元子. 溫度、鹽度和體長(zhǎng)對(duì)西藏?cái)M溞耗氧率的影響. 生態(tài)學(xué)報(bào), 2005, 25(7): 1549- 1553.

[8] 趙文, 王巧晗. 西藏?cái)M溞形態(tài)構(gòu)造的再描述. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2005, 20(3): 165- 173.

[9] Manca M, Carnmarano P, Spagnuolo T. Notes on Cladocera and Copepoda from high altitude lakes in the Mount Everest Region (Nepal). Hydrobiologia, 1994, 287(3): 225- 231.

[10] 趙文, 張鵬, 霍元子, 王海雷. 西藏?cái)M溞的染色體核型研究. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2004, 19(3): 167- 170.

[11] 趙文, 梁蕭, 謝璽, 張琳, 魏杰. 溫度、鹽度和體長(zhǎng)對(duì)西藏?cái)M溞 (DaphniopsistibetanaSars) 排氨率的影響. 生態(tài)學(xué)報(bào), 2008, 28(12): 6385- 6389.

[12] Rudneva I J. Blood antioxidant system of Black Sea elasmobranch and teleost. Comparative Biochemistry and Physiology, 1997, 118C(2): 255- 260.

[13] 孔繁翔. 環(huán)境生物學(xué). 北京: 高等教育出版社, 2002: 55- 55.

[14] 呂慶, 鄭容梁. 干旱及活性氧引起小麥膜脂過(guò)氧化與脫脂化. 中國(guó)科學(xué)(C輯), 1996. 26(1): 26- 30.

[15] 王巧晗. 溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞 (Daphniopsistibetana) 存活、生長(zhǎng)、發(fā)育和生殖的影響 [D]. 大連: 大連水產(chǎn)學(xué)院, 2004.

[16] 劉鴻艷, 鄭曙明, 吳青, 劉代金, 蔣禮, 賀蓉, 張耀光. 隆線溞營(yíng)養(yǎng)成分分析及高溫脅迫對(duì)抗氧化酶活性的影響. 淡水漁業(yè), 2012, 42(5): 45- 48.

[17] Estudillo C B, Duray M N, Marasigan E T, Emata A C. Salinity tolerance of larvae of the mangrove red snapper (Lutjanusargentimaculatus) during ontogeny. Aquaculture, 2000, 190(1/2): 155- 167.

[18] Fjlho D W, Boveris A. Antioxidant defences in marine fish-II Elasmobranchs. Comparative Biochemistry and Physiology, 1993, 106(2): 415- 418.

Effects of temperature and salinity on the activities of antioxidant enzymes and lipid peroxidation ofDaphniopsistibetanaSars

KANG Yujing, ZHAO Wen*, WEI Jie

CollegeofFisheriesandLifeScience,KeyLaboratoryofHydrobiologyinLiaoningProvince,DalianOceanUniversity,Dalian116023,China

The experiment was designed to evaluate the effects of temperature (16,19,22,25,28℃) and salinity (5,10,15,20,25) on the activity of total superoxide dismutase(T-SOD), glutathione peroxidase(GSH-PX) and maleic dialdehyde (MDA) ofDaphniopsistibetanaSars by means of the experimental ecology method under the laboratory conditions. The results showed that stress responses to temperature and salinity were induced in theD.tibetana.The activities of SOD,GPX and the content of MDA increased with temperature and salinity raised. After 24h-stress, the maxima were (37.18±1.97)U mg-1μg-1,(75.10±9.96)U mg-1μg-1and (12.24±2.12)nmol mg-1μg-1, respectively, when the temperature and salinity simultaneously reached 28℃ and 20;48 hours later, the activities of SOD,GPX and the content of MDA in the groups of high temperature of 25 and 28℃ except for those held at salinity of 15 were significantly higher than the others. While the maxima of (19.25±3.48)U mg-1μg-1, (59.95±4.66)U mg-1μg-1, (4.98±0.66)nmol mg-1μg-1, respectively,were observed in the group of temperature of 28℃ and salinity of 5. The above results indicated that there were significant affects of temperature and salinity on the antioxidant enzymatic activities(SOD, GPX) and lipid peroxidation(MDA) inD.tibetana(P<0.01).

DaphniopsistibetanaSars; temperature; salinity; total superoxide dismutase; glutathione peroxidase; maleic dialdehyde.

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31072210,40776065)

2013- 05- 05;

日期:2014- 04- 11

10.5846/stxb201305050925

*通訊作者Corresponding author.E-mail: zhaowen@dlou.edu.cn

亢玉靜，趙文，魏杰.溫度和鹽度對(duì)西藏?cái)M溞抗氧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響.生態(tài)學(xué)報(bào),2015,35(4):1037- 1044.

Kang Y J, Zhao W, Wei J.Effects of temperature and salinity on the activities of antioxidant enzymes and lipid peroxidation ofDaphniopsistibetanaSars.Acta Ecologica Sinica,2015,35(4):1037- 1044.