結(jié)腸癌組織中Beclin1及Bcl-2表達(dá)變化及意義

任宇鵬，宋純，張昊

(遼寧省腫瘤醫(yī)院，沈陽110042)

結(jié)腸癌的惡性行為以腫瘤體積的迅速生長及浸潤為特點。自噬相關(guān)性蛋白Beclin1參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，主要作用于自噬性活性激活的細(xì)胞程序性死亡過程中［1］?？拐{(diào)亡基因 Bcl-2為促癌基因，對腫瘤細(xì)胞惡性增生行為的啟動有重要作用［2］。Beclin1、Bcl-2對腫瘤細(xì)胞生長及浸潤等惡性行為可能有協(xié)同作用，在細(xì)胞調(diào)亡通路中具有相關(guān)性［3，4］。本研究觀察結(jié)腸癌組織中Beclin1、Bcl-2表達(dá)變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年6月～2014年5月遼寧省腫瘤醫(yī)院大腸外科手術(shù)治療的結(jié)腸癌患者97例，男59例、女38例，年齡(63±27.9)歲，術(shù)前均未接受化療、放療等抗腫瘤治療，術(shù)中均切除腫瘤;除外腫瘤未切除姑息造瘺病例。術(shù)中分別取腫瘤組織、癌旁組織、距離腫瘤邊緣6 cm以上的正常結(jié)腸組織。

1.2 方法

1.2.1 Beclin1、Bcl-2檢測方法 采用免疫組化法。組織標(biāo)本以4%甲醛緩沖液固定、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，切片后進(jìn)行脫蠟，PBS洗滌。加入Ⅰ抗，孵育過夜后加Ⅱ抗，37℃孵育30 min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染后自來水洗凈，鹽酸乙醇分化后流水沖洗，脫水，透明。二甲苯干燥前中性樹膠封片。以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。根據(jù)染色陽性細(xì)胞百分比和陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度兩項綜合判斷結(jié)果［5，6］。陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比:≤10%為1分、10%～50%為2分、50%～70%為3分、＞70%為4分。著色強(qiáng)度:無染色為0分，淺棕黃色為1分，較深棕黃色為2分，深棕黃色伴濃染顆粒為3分。根據(jù)兩項分?jǐn)?shù)之和判定結(jié)果:1分為陰性(－); 2～3分為弱陽性(+);4～5分為中度陽性(++); 6～7分為強(qiáng)陽性(+++)。+、++、+++均為陽性;－和+為低表達(dá)，++和+++為高表達(dá)。

1.2.2 統(tǒng)計學(xué)方法 采用PASW Statistics18.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗;相關(guān)關(guān)系采用Spearman等級相關(guān)分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Beclin1、Bcl-2檢測結(jié)果 Beclin1陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，Bcl-2陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜。結(jié)腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達(dá)陽性率分別為80.4%(78/ 97)、75.3%(73/97)，癌旁組織分別為60.8%(59/ 97)、64.9%(63/97)，正常結(jié)腸組織分別為36.1% (35/97)、26.8%(26/97);結(jié)腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達(dá)陽性率均高于癌旁組織及正常結(jié)腸組織(P均＜0.01)。

2.2 Beclin1、Bcl-2表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Beclin1表達(dá)與結(jié)腸癌腫瘤浸潤深度、腫瘤直徑、TNM分期有關(guān)(P均＜0.01);Bcl-2表達(dá)與結(jié)腸癌腫瘤直徑、TNM分期有關(guān)(P均＜0.05)。見表1。

2.3 結(jié)腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達(dá)的關(guān)系 結(jié)腸癌組織中Beclin1、Bcl-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.324，P＜0.01)。

3 討論

目前，結(jié)腸癌發(fā)病率居所有腫瘤第3位，且呈逐年升高趨勢。結(jié)腸癌多以貧血或急性腸梗阻為首發(fā)癥狀，發(fā)現(xiàn)時多為晚期。因此，尋找早期診斷結(jié)腸癌的特異性標(biāo)志物至關(guān)重要［7］。Bcl-2為抗調(diào)亡基因，定位于人染色體18q21上，在惡性腫瘤細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜表達(dá)［8］。自噬相關(guān)基因Beclin1定位在人染色體17q21上，在調(diào)節(jié)自噬活性激活細(xì)胞程序性死亡過程中發(fā)揮重要作用［9］，但其抑癌或促癌活性目前仍存在爭議。研究發(fā)現(xiàn)，Beclin1及Bcl-2過表達(dá)與乳腺癌、肝癌、胃癌、舌癌等腫瘤體積及TNM分期密切相關(guān)［10，11］。本研究發(fā)現(xiàn)，Beclin1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)陽性率高于正常結(jié)腸組織及癌旁組織;其表達(dá)與腫瘤直徑、TNM分期及浸潤深度均有關(guān)，Beclin1高表達(dá)提示腫瘤體積更大，TNM分期更差，而且往往浸破漿膜層。在正常結(jié)腸癌組織及癌旁組織均有Beclin1表達(dá)，提示Beclin1可能在結(jié)腸癌早期即有升高趨勢，伴隨腫瘤惡性行為的全過程。Beclin1雖然作為抑癌基因出現(xiàn)，但其生物學(xué)行為中可能同時伴有促癌基因活動，或伴有在其作用通道中發(fā)揮主導(dǎo)作用的促癌基因［12］。Bcl-2作為一個重要刺激因子，在腫瘤血管生成與發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究顯示，Bcl-2在結(jié)腸癌細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜均有表達(dá)，其在結(jié)腸癌組織中表達(dá)陽性率高于正常結(jié)腸組織及癌旁組織;其表達(dá)水平與腫瘤直徑及TNM分期有關(guān)。

表1 Beclin1、Bcl-2表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

PTEN的下游通路PI3K/AKT信號通路是獨立于其他通路之外的生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，對細(xì)胞的生長、增殖、凋亡、代謝等具有重要作用，并主導(dǎo)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)變［13，14］。研究發(fā)現(xiàn)，Beclin1及Bcl-2活性均與抑癌基因PTEN活性缺失相關(guān)。Beclin1是Bcl-2的結(jié)合蛋白，Bcl-2的抗自噬活性與Beclin1表達(dá)密切相關(guān)。Bcl-2通過下調(diào)Vps34和Beclin相關(guān)Vps34酶活性進(jìn)行自噬活性的調(diào)節(jié)，這種自噬活性對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性行為具有重要的調(diào)節(jié)功能［15］。本研究顯示，結(jié)腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達(dá)呈正相關(guān)，即Beclin1及Bcl-2在同一結(jié)腸癌組織中表達(dá)共同上調(diào)，進(jìn)一步證明了二者在結(jié)腸癌中的協(xié)同作用。但Beclin1及Bcl-2協(xié)同作用的確切機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。

總之，Beclin1、Bcl-2高表達(dá)與結(jié)腸癌的發(fā)生及惡性生長行為相關(guān)，提示結(jié)腸癌的不良預(yù)后;二者可能作為結(jié)腸癌的標(biāo)志物，為結(jié)腸癌靶向治療提供新的目標(biāo)基因。

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