桔梗水煎劑對順鉑致小鼠腎損傷的影響

吳志麗，張瑤紓，周晶

(1天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，天津300211;2天津醫(yī)科大學(xué))

順鉑廣泛應(yīng)用于臨床各種惡性腫瘤的治療［1，2］，療效顯著，其療效與用藥劑量呈正比，但順鉑具有嚴(yán)重的腎毒性［3，4］，限制了其臨床使用。順鉑所致腎毒性與其抑制腎皮質(zhì)清除自由基及增強脂質(zhì)過氧化，進而損害腎組織有關(guān)［5～7］，但其確切作用機制目前尚不明確。桔梗為桔?？浦参铮瑲w肺經(jīng)，具有宣肺、利咽、祛痰、排膿等作用，臨床用于咳嗽痰多、胸悶不暢、肺癰吐膿等治療。2010年7月 ～2013年11月，我們觀察了桔梗水煎劑對順鉑致小鼠腎毒性的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種小鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，購自中國人民解放軍科學(xué)院實驗動物中心(許可證號:SCXK-軍2007-004)。

1.2 方法

1.2.1 試藥制備 順鉑(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，批號090515):精密稱取順鉑9 mg，置于10 mL的容量瓶中，加入生理鹽水定容，60℃水浴加熱助溶，即得0.9 mg/mL的順鉑溶液。桔梗(購于天津藥材公司，由天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)教研室周曄教授鑒定):取桔梗15、20、25 g分別加入120、160、200 mL水，于100℃水浴回流提取2 h，過濾，濾渣再用90、120、150 mL水100℃水浴回流提取1 h，合并濾液濃縮定容至100 mL，即配成濃度為0.15、0.20、0.25 g/mL的桔梗水溶液。

1.2.2 動物分組及處理 50只小鼠隨機分為5組，每組10只。對照組:連續(xù)7 d灌胃給予生理鹽水;造模組:連續(xù)7 d灌胃給予生理鹽水，于第8天腹腔注射順鉑(9 mg/kg);桔梗低、中、高劑量組:連續(xù)7 d灌胃分別給予0.15、0.2、0.25 g/mL的桔梗水煎劑，于第8天腹腔注射順鉑(9 mg/kg)。

1.2.3 標(biāo)本采集及檢測方法 全部小鼠于腹腔注射順鉑后第3天眼眶取血，然后處死取腎組織。提取血清，采用二乙酰一肟法測定血尿素氮(BUN)水平，堿性苦味酸比色法測定血肌酐(Cr)水平;稱取一定量的腎組織加生理鹽水勻漿;另取部分腎組織，用稀甲醛溶液固定，切片處理。采用黃嘌呤氧化酶法測定腎組織超氧化物歧化酶(SOD)活性，化學(xué)比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力，具體操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。HE染色法觀察腎組織病理學(xué)變化。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料采用s表示，組間比較采用方差分析，采用SNK法進行兩兩比較。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清BUN、Cr比較 見表1。

2.2 各組腎組織GSH-PX、SOD含量比較 見表2。

2.3 各組腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果 對照組腎組織形態(tài)基本正常;造模組腎小管上皮細(xì)胞明顯濁腫，局部上皮細(xì)胞水腫;桔梗低劑量組與造模組腎組織形態(tài)基本相同;桔梗中劑量組腎組織局部水腫，且水腫僅局部于腎小管上皮細(xì)胞;桔梗高劑量組腎組織形態(tài)大致同對照組，未見明顯異常。見插頁Ⅰ圖1。

表1 各組血清BUN、Cr比較(n=10，s)

表1 各組血清BUN、Cr比較(n=10，s)

注:與對照組比較，*P＜0.05;與造模組比較，△P＜0.05。

組別 BUN(mmol/L) Cr(μmol/L) 52.66±6.94 77.71±15.73造模組 88.71±16.39* 115.33±16.37*桔梗低劑量組 80.37±10.89* 98.43±10.18*桔梗中劑量組 69.22±11.69＊△ 87.17±11.39△桔梗高劑量組 62.70±9.87△ 81.67±13.06對照組△

表2 各組腎組織GSH-PX、SOD含量比較(n=10，s)

表2 各組腎組織GSH-PX、SOD含量比較(n=10，s)

注:與對照組比較，*P＜0.05;與造模組比較，△P＜0.05。

組別 GSH-PX(U/mg) SOD(U/mg) 1 174.54±182.14 212.54±25.06造模組 686.26±96.61* 155.41±15.94*桔梗低劑量組 794.52±143.83* 175.29±23.36*桔梗中劑量組 970.49±115.08△ 197.53±21.32＊△桔梗高劑量組 1 094.48±144.65△ 210.63±22.23對照組△

3 討論

藥物化療在臨床治療惡性腫瘤過程中發(fā)揮重要作用，但其在殺死腫瘤細(xì)胞的同時對機體正常組織細(xì)胞也產(chǎn)生損害。順鉑是國際推薦的首選化療藥物之一，但其致腎毒性嚴(yán)重［8～11］。在本研究中，造模組腎小管上皮細(xì)胞明顯水腫，血清BUN、Cr明顯升高，說明順鉑已造成明顯腎損害。針對順鉑致腎損傷，臨床有一些防護措施，主要為應(yīng)用抗氧化劑、改變給藥方式、應(yīng)用利尿劑等。

桔梗作為藥食同源的傳統(tǒng)中藥，具有祛痰、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、保肝、利尿消腫、降血脂等作用。桔梗在中藥方劑中作為引經(jīng)藥使用由來已久。它的引經(jīng)作用主要體現(xiàn)在“舟楫”之說，認(rèn)為桔?！翱蔀橹T藥舟楫，載之上浮”。引經(jīng)中藥歸經(jīng)理論的一部分指某些藥物能帶引其他藥物直達病灶而起向?qū)ё饔谩，F(xiàn)代研究中對中藥引經(jīng)藥物的實驗研究很少，尤其是利用中藥的引經(jīng)作用實現(xiàn)對化學(xué)藥物的“引經(jīng)”。研究發(fā)現(xiàn)，桔梗與異煙肼合用可顯著提高異煙肼在小鼠體內(nèi)的血藥濃度［12］，并促進異煙肼向肺組織分布。此外，桔梗對異煙肼和利福平致小鼠肝損傷具有保護作用，能降低MDA含量、提高SOD活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)［13～15］。李英倫等［16］認(rèn)為，由桔梗皂苷表面活性所決定的增溶作用和對細(xì)胞膜通透性的影響是桔梗引經(jīng)作用的內(nèi)在基礎(chǔ)。

本實驗結(jié)果顯示，與造模組比較，桔梗中、高劑量能明顯降低小鼠血清BUN、Cr水平;桔梗中、高劑量組與造模組比較，腎組織GSH-PX、SOD含量均升高;HE染色顯示，桔梗高、中劑量組可顯著改善順鉑致腎組織損害。由此推測，中藥桔梗水煎劑對順鉑致小鼠腎損傷具有保護作用，抗氧化作用可能是其作用機制之一，但其確切作用機制還有待進一步研究。

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