異煙肼糖漿劑的制備及穩(wěn)定性研究

蔣梅香，毛群芳，陳雙華，邱艷明，唐 婷

(湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，湖南 株洲 412012)

異煙肼對(duì)結(jié)核桿菌有強(qiáng)大的抑制和殺滅作用，是WHO推薦兒童結(jié)核病治療的一線藥物，推薦兒童使用劑量范圍為7～15mg/kg，最大劑量300mg/d[1]，但是國(guó)內(nèi)缺乏適合兒童服用的易控制劑量、易吞咽的劑型[2]，如異煙肼糖漿劑。由于異煙肼結(jié)構(gòu)中含有酰肼基，受光、熱、pH等影響易分解，所以根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)以單糖漿為矯味劑，山梨醇為穩(wěn)定劑[3]，苯甲酸鈉為防腐劑，鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉為緩沖鹽，以85%(g/mL)單糖漿和異煙肼水溶液采用混合法制備異煙肼糖漿劑1(pH值7.04)和2(pH值5.47)，然后采用強(qiáng)化試驗(yàn)(高溫、強(qiáng)光)和室溫[4]、2～8℃[5]試驗(yàn)對(duì)異煙肼糖漿劑1、2的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，探討各因素對(duì)異煙肼糖漿劑穩(wěn)定性的影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Mettler AE240型萬(wàn)分之一分析天平(梅特勒，瑞士)；雷磁PHS-3E型pH計(jì)(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)；島津LC-20AT型高效液相色譜儀(Shimadzu，日本)；附溫比重瓶(上海市崇明建設(shè)玻璃儀器廠有限公司，25mL)。

1.2 試藥

異煙肼標(biāo)準(zhǔn)品(河南省萬(wàn)佳首化生物科技有限公司，批號(hào)ED00936，HPLC≧99%)；異煙肼原料藥(武漢拉那白醫(yī)藥化工有限公司，批號(hào)190712)；山梨醇(廣西南寧化學(xué)制藥有限責(zé)任公司)；苯甲酸鈉(湖南爾康制藥股份有限公司)；蔗糖(湖南爾康制藥股份有限公司)；鄰苯二甲酸氫鉀(上海豪申化學(xué)試劑有限公司)；氫氧化鈉(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)；甲醇為色譜純；水為去離子水。

2 方法

2.1 異煙肼糖漿劑的制備

按照預(yù)試驗(yàn)結(jié)果取異煙肼10g加水100mL溶解，再加山梨醇60g、苯甲酸鈉2g、85%(g/mL)單糖漿706mL(pH值=7.66)，攪拌均勻，最后加水至1000mL，得淡黃色的澄清透明的60%(g/mL)異煙肼糖漿劑1(規(guī)格：10mg/mL)。異煙肼糖漿劑1用雷磁PHS-3E型pH計(jì)測(cè)得pH值為7.04，用附溫比重瓶測(cè)得25℃時(shí)相對(duì)密度為1.231。

另取異煙肼10g加水100mL溶解，再加山梨醇60g、苯甲酸鈉2g、85%(g/mL)單糖漿706mL，攪拌均勻，加鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉緩沖鹽溶液(pH值=5.0)100mL，最后加水至1000mL，得淡黃色的澄清透明的60%(g/mL)異煙肼糖漿劑2(規(guī)格：10mg/mL)。異煙肼糖漿劑2用pH計(jì)測(cè)得pH值為5.47，用附溫比重瓶測(cè)得25℃時(shí)相對(duì)密度為1.250。

2.2 糖漿劑中異煙肼含量的測(cè)定

取0.104mg/mL異煙肼對(duì)照品水溶液進(jìn)行HPLC分析，采用DiamonsilC18(2)色譜柱(4.6mm×250mm，5.0μm)，柱溫30℃，進(jìn)樣量10μL，流動(dòng)相：甲醇-水(55:45)[5]，流速1.0mL/min等度洗脫10min；DAD檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描，顯示在262nm處有最大吸收波長(zhǎng)。

配制0.0209、0.0417、0.0626、0.0835、0.1044、0.1565、0.2087mg/mL的7個(gè)不同濃度異煙肼對(duì)照品溶液進(jìn)行HPLC分析(進(jìn)樣量10μl)，以異煙肼進(jìn)樣質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y、進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=1807292X-166107，R2=0.9994，結(jié)果表明異煙肼在0.209～2.087μg區(qū)間內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 高溫對(duì)異煙肼糖漿劑的影響

分別取異煙肼糖漿劑1、2各100mL分裝于2個(gè)棕色藥瓶中，置于40℃的環(huán)境中，于第0、5、10天分別取樣進(jìn)高效液相測(cè)定含量，同時(shí)觀察其顏色變化。如果在40℃時(shí)含量沒(méi)有出現(xiàn)明顯變化，則在60℃的環(huán)境中按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.4

強(qiáng)光對(duì)異煙肼糖漿劑的影響分別取異煙肼糖漿劑1、2各100mL裝于2個(gè)白色藥瓶中，室溫25℃，置于光照強(qiáng)度為(4500±500)Lx的環(huán)境中，于第0、5、10天分別取樣進(jìn)高效液相測(cè)定含量，同時(shí)觀察其顏色變化。

2.5

pH值對(duì)異煙肼糖漿劑的影響由于異煙肼結(jié)構(gòu)中含有酰肼基，在中性或堿性溶液中易分解，光、熱、氧等加速其分解。預(yù)試驗(yàn)顯示異煙肼水溶液在pH值4.5-5.5間較穩(wěn)定，所以本次穩(wěn)定性研究時(shí)制備了2個(gè)pH值不同的異煙肼糖漿劑，即異煙肼糖漿劑1(pH值7.04)和2(pH值5.47)平行進(jìn)行高溫和強(qiáng)光試驗(yàn)，考察pH值對(duì)異煙肼糖漿劑的影響。

2.6

室溫和2-8℃對(duì)異煙肼糖漿劑的影響根據(jù)pH值對(duì)異煙肼糖漿劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果，選擇較穩(wěn)定的異煙肼糖漿劑再進(jìn)一步考察保存溫度(室溫和2-8℃)對(duì)異煙肼糖漿劑的影響。

3 結(jié)果

3.1 高溫對(duì)異煙肼糖漿劑的影響見表1、圖1。

圖1 高溫對(duì)異煙肼糖漿劑含量的影響

表1 高溫、強(qiáng)光試驗(yàn)結(jié)果

在溫度為40℃的條件下，異煙肼糖漿劑1、2的顏色均略有加深，異煙肼糖漿劑1(pH值=7.04)的含量在第5天與第0天相比較下降了7.65%，第10天與第0天相比較下降了13.25%；異煙肼糖漿劑2(pH值=5.47)的含量在第5天與第0天相比較下降了4.49%，第10天與第0天相比較下降了8.58%；這說(shuō)明高溫會(huì)使異煙肼分解加速，大大降低異煙肼糖漿劑1、2中異煙肼的含量，所以異煙肼糖漿劑應(yīng)避免高溫保存。

3.2 強(qiáng)光對(duì)異煙肼糖漿劑的影響見表1、圖2

圖2 強(qiáng)光對(duì)異煙肼糖漿劑含量的影響

在上述強(qiáng)光的照射下，異煙肼糖漿劑1、2的顏色均略有加深，異煙肼糖漿劑1(pH值=7.04)的含量在第5天與第0天相比較下降了6.66%，第10天與第0天相比較下降了10.58%；異煙肼糖漿劑2(pH值=5.47)的含量在第5天與第0天相比較下降了3.62%，第10天與第0天相比較下降了6.49%；這說(shuō)明強(qiáng)光也會(huì)使異煙肼分解加速，大大降低了異煙肼糖漿劑1、2中異煙肼的含量，故應(yīng)將異煙肼糖漿劑保存在避光的環(huán)境中。

3.3 pH值對(duì)異煙肼糖漿劑的影響見表1、圖1、圖2

在上述高溫和強(qiáng)光條件下，異煙肼糖漿劑1、2的顏色均略有加深，但異煙肼糖漿劑2(pH值=5.47)的含量無(wú)論是第5天、還是第10天下降的速度都比異煙肼糖漿劑1(pH值=7.04)含量下降的速度慢。如高溫40℃時(shí)，異煙肼糖漿劑1第10天含量下降13.25%；而異煙肼糖漿劑2第10天含量下降8.58%；強(qiáng)光照射時(shí)，異煙肼糖漿劑1第10天含量下降10.58%；而異煙肼糖漿劑2第10天含量下降6.49%。這說(shuō)明在pH值=5.47時(shí)，異煙肼糖漿劑比在pH值=7.04時(shí)更穩(wěn)定。故應(yīng)在制備異煙肼糖漿劑時(shí)將pH值調(diào)至5.47較好。

3.4 室溫和2～8℃保存對(duì)異煙肼糖漿劑的影響表2、圖3

圖3 室溫和2～8℃保存對(duì)異煙肼糖漿劑的影響

表2 室溫和2～8℃實(shí)驗(yàn)結(jié)果

異煙肼糖漿劑2(pH值=5.47)在室溫保存的含量在第5天與第0天相比較下降了3.35%，第10天與第0天相比較下降了5.63%；異煙肼糖漿劑2在2～8℃保存的含量在第5天、第10天與第0天相比較幾乎無(wú)變化；說(shuō)明異煙肼糖漿劑2(pH值=5.47)在2～8℃保存更穩(wěn)定。

4 討論

本文對(duì)異煙肼糖漿劑的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示高溫時(shí)，異煙肼糖漿劑1和2的含量在第10天時(shí)出現(xiàn)13.25%和8.58%的大幅下降，這是因?yàn)楫悷熾陆Y(jié)構(gòu)中含酰肼基不穩(wěn)定，也說(shuō)明高溫會(huì)使異煙肼分解加速，所以異煙肼糖漿劑應(yīng)避免高溫貯存。在強(qiáng)光照射下，異煙肼糖漿劑1和2的含量在第10天時(shí)出現(xiàn)10.58%和6.49%的下降，下降幅度雖比高溫條件略低，但含量下降仍然較多，說(shuō)明強(qiáng)光也會(huì)影響異煙肼的穩(wěn)定性，所以異煙肼糖漿劑應(yīng)密封、避光貯存。在上述高溫和強(qiáng)光條件下，異煙肼糖漿劑2(pH值=5.47)的含量下降速度均比異煙肼糖漿劑1(pH值=7.04)慢，說(shuō)明將異煙肼糖漿劑的pH值調(diào)至5.47可使其更穩(wěn)定，所以異煙肼糖漿劑在制備時(shí)應(yīng)調(diào)節(jié)pH值至穩(wěn)定pH。進(jìn)行第二步實(shí)驗(yàn)，在室溫條件下，異煙肼糖漿劑2中異煙肼含量在第10天出現(xiàn)5.63%的下降；2～8℃條件下，異煙肼糖漿劑2中異煙肼的含量在第5天、第10天與第0天相比較幾乎無(wú)變化。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，異煙肼糖漿劑應(yīng)調(diào)節(jié)pH值至穩(wěn)定pH，密封避光、冷處(2～8℃)貯存。