黃連羊肝丸中小檗堿百分含量測定

楊新宇，徐蓓蕾,2，沈 蕓

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱 150076；2 哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150076)

黃連羊肝丸中小檗堿百分含量測定

楊新宇1，徐蓓蕾1,2，沈 蕓1

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱 150076；2 哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150076)

考察不同廠家黃連羊肝丸中小檗堿百分含量，比較不同廠家黃連羊肝丸的質(zhì)量.主要通過高效液相色譜法(HPLC)，對不同廠家的黃連羊肝丸中主要成分小檗堿進(jìn)行百分含量測定，高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿的回歸方程為：Y= 37.643X+0.987 4，r= 0.999 3，線性關(guān)系良好.測定結(jié)果顯示，以小檗堿百分含量計，百分含量最高為“赤峰天奇制藥有限責(zé)任公司(水蜜丸)”，為0.23%；百分含量最低為“北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠(蜜丸)”，為0.11%.不同廠家的黃連羊肝丸由于制作工藝不同，原材料差異，導(dǎo)致藥品質(zhì)量存在差異，但均在藥典規(guī)定范圍內(nèi)，不影響產(chǎn)品使用.高效液相色譜法應(yīng)用于中成藥的百分含量測定具有簡便、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)勢，可以為黃連羊肝丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定奠定基礎(chǔ).

黃連羊肝丸；鹽酸小檗堿；超聲提??；高效液相色譜法；百分含量測定

黃連羊肝丸具有瀉火明目的作用，多用于肝火旺盛，目赤腫痛，視物昏暗，羞明流淚，胬肉攀睛[1-2].黃連是黃連羊肝丸的君藥，其主要成分為小檗堿，小檗堿以鹽酸鹽的形式存在于植物之中，故又叫鹽酸小檗堿，均為黃色結(jié)晶體[3-5].市面上中成藥黃連羊肝丸的種類繁多，為保證用藥安全有效，采用超聲提取的方法，對不同廠家黃連羊肝丸中小檗堿進(jìn)行提取分離.以鹽酸小檗堿為對照品，通過高效液相色譜法[6-8]，測定不同廠家黃連羊肝丸中小檗堿的百分含量，為黃連羊肝丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供了科學(xué)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(四川維克奇對照品有限公司)；黃連羊肝丸1(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠 蜜丸，批號2013178)；黃連羊肝丸2(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠 蜜丸，批號2013439)；黃連羊肝丸3(赤峰天奇制藥有限責(zé)任公司 蜜丸，批號20120922)；黃連羊肝丸4(赤峰天奇制藥有限責(zé)任公司 水蜜丸，批號20120507)；黃連羊肝丸5(赤峰丹龍藥業(yè)有限公司 水蜜丸，批號20120838)；黃連羊肝丸6(藥都制藥集團(tuán)股份有限公司 蜜丸，130101).甲醇(色譜純，天津市啟邦化工產(chǎn)品銷售有限公司)；乙腈(色譜純，F(xiàn)isher公司)；水(娃哈哈純凈水).

1.2 儀器與設(shè)備

Thermo u3000高效液相色譜儀(戴安公司)；分析天平(上海器械廠)KS-600D超聲清洗機(寧波科生儀器廠).

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱量5.2 mg鹽酸小檗堿于50 mL燒杯中，用甲醇溶液溶解，將溶解后的溶液用甲醇定容到10 mL容量瓶中，得到0.5 mg/mL鹽酸小檗堿溶液；用移液管精密吸取上一步配得的0.5 mg/mL鹽酸小檗堿溶液，分別取0.02、0.04、0.1、0.2、1、2、5 mL，分別用甲醇稀釋定容到10 mL容量瓶中，即得到7個呈梯度濃度的鹽酸小檗堿對照品溶液，質(zhì)量濃度分別為：0.001、0.002、0.005、0.01、0.05、0.1、0.25 mg/mL.

1.4 試樣的處理

取質(zhì)量差異項下的不同廠家黃連羊肝丸(1-6)(取藥量詳見表1)，剪碎，混勻，分別取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇溶液25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，搖勻，浸泡過夜，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇溶液補足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液.即得6份供試品溶液.

表1 不同廠家黃連羊肝丸取藥量

藥品取藥量/g黃連羊肝丸10．5258黃連羊肝丸20．5139黃連羊肝丸30．5111黃連羊肝丸40．4968黃連羊肝丸50．5065黃連羊肝丸60．5172

1.5 高效液相色譜條件

色譜柱：Agilent C18(150 mm×5 μm); 流動相：乙腈：KH2PO4(0.02 mol/L)(35∶65)流速1 mL/min；檢測波長：345 nm；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：室溫.

1.6 進(jìn)樣

將供試品和對照品溶液分別注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量10 μL，在最佳的色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，并記錄數(shù)據(jù).

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制結(jié)果

依1.5項下色譜條件測定，得出標(biāo)準(zhǔn)品峰面積測定結(jié)果.

以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，做回歸曲線見圖1.計算求得回歸方程見公式：Y= 37.643X+0.987 4，r= 0.999 3.

圖1 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 精密度試驗

取上述同一批鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，每次取10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，分別測得5個峰面積，得出其RSD值為1.54%，表明精密度良好.

2.3 重復(fù)性試驗

取同一批樣品6份，照上述方法溶解、測定，得RSD值為0.88%.表明重復(fù)性良好.

2.4 回收率試驗

精密稱取同法測定的已知百分含量為2.5的樣品6份，精密加入鹽酸小檗堿對照品2.5 mg，依法測定，別計算其回收率，求得平均回收率為102.7%，RSD值為1.52%.

2.5 不同廠家黃連羊肝丸小檗堿百分含量測定結(jié)果

依1.5項下色譜條件測定，得出色譜圖.從色譜圖中可以看出，與對照品比較，所有供試品都在鹽酸小檗堿峰處有明顯的對應(yīng)峰出現(xiàn).對照品及不同廠家黃連羊肝丸中鹽酸小檗堿色譜圖見圖2.

圖2 鹽酸小檗堿高效液相色譜圖

根據(jù)其峰面積，再由2.1項下得出的回歸方程，可以計算出不同廠家黃連羊肝丸中鹽酸小檗堿百分含量.具體百分含量測定結(jié)果見表2.

表2 供試品百分含量測定結(jié)果

樣品樣品1樣品2樣品3樣品4樣品5樣品6峰面積8．95712．84610．99018．79410．32014．120百分含量/%0．110．160．130．230．160．17

根據(jù)《中國藥典》2010版規(guī)定，每丸(含9 g)黃連羊肝丸含鹽酸小檗堿的量不得低于6.3 mg.即百分含量不得低于0.07%.

根據(jù)以上所得供試品百分含量測定結(jié)果，對比藥典標(biāo)準(zhǔn)，做出圖3供試品百分含量與藥典標(biāo)準(zhǔn)比較.從圖3 中可以清晰看出，實驗中所用所有供試品都符合藥典規(guī)定，為合格產(chǎn)品.在合格的基礎(chǔ)上，產(chǎn)品質(zhì)量有所差異，但并無較大差異.

圖3 供試品百分含量與藥典標(biāo)準(zhǔn)比較

3 討 論

實驗數(shù)據(jù)表明，不同廠家黃連羊肝丸中小檗堿百分含量在合格的基礎(chǔ)上有所差異，原因可能是多方面的：其一，黃連羊肝丸是由多味中藥組成的復(fù)方中藥丸劑，其藥物成分多且復(fù)雜，因此影響測定因素較多且互有干擾；其二，實驗過程中由于儀器、設(shè)備的問題或是人為因素造成的誤差.方中藥味較多，其效用是靠多種成分共同作用而成，本實驗只測定不同廠家黃連羊肝丸中小檗堿的百分含量，一種成分的百分含量測定不足以說明藥品的內(nèi)在質(zhì)量[9]，本實驗中還可加入對黃芩苷進(jìn)行了百分含量測定，從而達(dá)到全面控制藥品質(zhì)量的目的[10].本文參照藥典提取方法，采用甲醇等溶劑進(jìn)行了萃取，可將多余繁雜的水溶性成分除去，以達(dá)到分離、純化目標(biāo)物的目的.并選用超聲波提取方法，可以縮短提取時間，同時還不破壞有效物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)，比冷浸法、滲漉法、蒸餾法等提取方法，操作簡便.實驗中加入了精密度實驗、重復(fù)性試驗和回收率方

法學(xué)的驗證，以提高實驗的準(zhǔn)確性并對本實驗中的測定方法進(jìn)行評估[11-12].

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010.1068-1069.

[2] 張貴君. 中藥鑒定學(xué)[M]. 北京: 北京科學(xué)出版社, 2009.84-87.

[3] YI P, LU F E, XU L J,etal. Berberine reverses free-fatty-acid-induced insulin resistance in 3T3-L1 adipocytes through targeting IKKβ[J]. World J Gastroenterol, 2008, 14(6): 876-883.

[4] 徐西強. 鹽酸小檗堿治療骨肉瘤的作用及其機制[D]. 武漢: 華中科技大學(xué), 2012.

[5] IKEMOTO S, SUGIMUKA K, YOSHIDA N,etal. Antitum or effects of scutellariae radix and its components baicalein, baicalin, and wogonia on bladder cancer cell lines [J].Urology, 2010, 55(6): 951.

[6] 李紅星, 王金平, 陳建英, 等. 高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用概述[J].重慶中草藥研究, 2010, 23(02): 38-39.

[7] 劉建新, 張同寶. 高效液相色譜法在中藥指紋圖譜中的研究與現(xiàn)狀分析[J].華章, 2011, 17(35): 366.

[8] MICHAL, SRBEK J, R DL S,etal. Identification, characterization, synthesis and HPLC quantification of new process-related impurities and degradation products in retigabine [J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2014, 42(01): 1016.

[9] 劉征輝, 葉挺祥, 趙洪芝, 等. 黃連羊肝片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥, 2009, 31(08): 3-6.

[10] 吳 陽. 黃連羊肝丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[D]. 錦州: 遼寧醫(yī)學(xué)院, 2011.

[11] WANG D F, XU Q L, ZUO D,etal. Determination of Berberine Hydrochloride in Shihu Yeguang pillss by HPLC[J].Medicinal Plant,2010, 8(1): 74-75, 78.

[12] 沈 蕓，徐蓓蕾，楊新宇.黃蓮功效藥對配伍中鹽酸小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定[J].哈濱濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2015，31(2)：155-158.

Determination of berberine in Huanglian Yanggan pills

YANG Xin-yu1, XU Bei-lei1,2, SHEN Yun1

(1. Research Center on Life Sciences and Environmental Sciences, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China; 2. School of Pharmacy, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China)

To investigate determination of berberine in Huanglian Yanggan pills from different manufacturers, the qualities of Huanglian Yanggan pills from different manufacturers were compared. High performance liquid chromatography (HPLC) was used to determine the content of berberine which is the main components of Huanglian Yanggan pills that came from different manufacturers. By high performance liquid chromatography, a regression equation of berberine hydrochloride:Y=37.643X+0.987 4,r=0.999 3 was obtained which had a good linear relationship. All samples were in line with Pharmacopoeia requirements of berberine. Huanglian Yanggan pills from Tianqi Chifeng Pharmaceutical Co., Ltd. (water pill) had the highest content of berberine, 0.23%,while from Beijing Tong Ren Tang Pharmaceutical Co., Ltd. (pill) had the lowest content of berberine,0.11%. The different production process and raw materials led to the different quality of Huanglian Yanggan pills from different manufacturers, but all were within the range specified in the Pharmacopoeia. The method of high performance liquid chromatography (HPLC) was rapid, sensitive, simple and highly reproducible in determination of the content of Chinese patent medicines, and capable to lay a foundation to establish the quality standards of Huanglian Yanggan pills.

Huanglian Yanggan pills; berberine hydrochloride; ultrasonic extraction; HPLC; ddetermination.

2014-12-13.

哈爾濱商業(yè)大學(xué)研究生創(chuàng)新科研項目(YJSCX2014-322HSD)；黑龍江省博士后基金資助項目(LBH-Z13121)；哈爾濱商業(yè)大學(xué)科研啟動基金資助項目(13DL024)

楊新宇(1991-)，男，碩士，研究方向：抗腫瘤藥物研究.

徐蓓蕾(1983-)，女，博士，教師，研究方向：抗腫瘤藥物研究.

R286

A

1672-0946(2015)03-0267-04