大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的促凋亡作用及其與JNK信號通路關(guān)系

樊向文，　張　勇，　席　量，　李尚東

論著

大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的促凋亡作用及其與JNK信號通路關(guān)系

樊向文，張勇，席量，李尚東

【摘要】目的探討大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的促凋亡作用及其與JNK信號通路的關(guān)系。方法應(yīng)用倒置顯微鏡觀察人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的生長情況，MTT法檢測大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的影響，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡，應(yīng)用Western blot和免疫組織化學(xué)法檢測JNK信號蛋白及其下游促凋亡蛋白AP-1的表達(dá)。結(jié)果大黃素可降低人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖能力，具有時間依賴性和濃度依賴性。大黃素作用于人乳腺癌細(xì)胞MCF-7后，出現(xiàn)明顯的早期凋亡現(xiàn)象(P<0.05)。不同濃度大黃素處理人乳腺癌細(xì)胞MCF-7后，均可引起JNK和JNK下游信號分子AP-1表達(dá)增強 (P<0.05)。結(jié)論大黃素可降低人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖能力，促進(jìn)早期凋亡，可使人乳腺癌細(xì)胞MCF-7表達(dá)JNK和AP-1增強，促進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的凋亡。大黃素通過活化JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖、促進(jìn)凋亡。

【關(guān)鍵詞】大黃素；乳腺癌；MAPK；JNK；AP-1

惡性腫瘤是一種體細(xì)胞無限制性地克隆擴(kuò)增所致的疾病，尋找能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的藥物已成為腫瘤治療干預(yù)的切入點。中草藥在腫瘤治療方面有著很大的優(yōu)勢，已逐漸成為抗腫瘤藥物研制開發(fā)的熱點。某些中藥具有抗乳腺癌作用，且具有對正常細(xì)胞損傷小的優(yōu)點。大黃素是我國傳統(tǒng)中草藥，具有如抗炎、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)肝臟等多種生物活性作用[1]。以往研究表明，大黃素對多種腫瘤細(xì)胞有生長抑制作用，如人卵巢癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌、人慢性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞、胰腺癌等[2-7]。大黃素具有誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡效應(yīng)及細(xì)胞毒潛能，大黃素對不同的細(xì)胞系抑制生長的機(jī)制有所不同，其誘導(dǎo)凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑主要有Bax-Caspase途徑、ERK途徑、PKC途徑、Fas途徑及ROS途徑等[8-9]。

然而大黃素對乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖抑制和促凋亡作用與JNK/AP-1信號通路關(guān)系如何，未見報道，尚為此我們進(jìn)行了以下研究。

1材料與方法

1.1材料

人乳腺癌細(xì)胞MCF-7(ATCC)，大黃素(純度≥98%)，JNK抑制劑AS601245。

1.2實驗方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7(ATCC)，常規(guī)培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37℃含有5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)。接種細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后，加入不同濃度大黃素(20、40、60、80 μmol/L)，作用24 h后檢測各種觀察指標(biāo)。

1.2.2細(xì)胞增殖抑制率測定(MTT法)取對數(shù)生長期的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7(ATCC)，用RPMI1640培養(yǎng)液配成1×105/ml的細(xì)胞懸液，接種于96孔板中，待細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的大黃素(20、40、60、80 μmol/L)，培養(yǎng)48 h后用MTT法檢測細(xì)胞活性。即：培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入8 μl MTT(5 mg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，棄去上清，每孔加入100 μl DMSO，搖床振蕩10 min，待生成的甲瓚結(jié)晶完全溶解后，以630 nm為參比波長，測定570nm處的吸光值，計算細(xì)胞增殖抑制率，每組設(shè)3個平行孔。試驗設(shè)計每處理重復(fù) 4 次，結(jié)果為4組數(shù)據(jù)的平均值，抑制率(IR) =(1-樣品組OD值/對照組OD值)×100%，即：細(xì)胞增殖抑制率=(1-A570樣品/A570空白)×100%。

1.2.3AnnexinV-FITC/PI法細(xì)胞凋亡分析取對數(shù)生長期人乳腺癌細(xì)胞MCF-7 3 ml，按1×105個細(xì)胞/孔種于6孔板，24 h后依據(jù)上述IC50值分組加藥，即陰性對照組(0 μmol/L)和加藥組(20、40、60、80 μmol/L)和JNK抑制劑AS601245組，每組設(shè)3個復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后在流式細(xì)胞檢測儀上進(jìn)行檢測。

1.2.4Western blot法檢測JNK、AP-1及內(nèi)參β-actin蛋白表達(dá)取對數(shù)生長期的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，調(diào)整細(xì)胞密度為2×105/ml，接種于6孔培養(yǎng)板，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，設(shè)空白對照組、大黃素20 μmol/L組、大黃素40 μmol/L組、大黃素80 μmol/L組、大黃素40 μmol/L﹢20 μmol/L AS601245組，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞，用Brad-ford蛋白濃度測定試劑盒進(jìn)行總蛋白濃度測定。

1.2.5JNK免疫細(xì)胞化學(xué)染色及圖像分析采用S-P法進(jìn)行JNK免疫細(xì)胞化學(xué)染色，取人乳腺癌細(xì)胞MCF-7爬片，按常規(guī)方法用4%多聚甲醛固定，DAB呈色，顯微鏡下控制反應(yīng)，出現(xiàn)陽性結(jié)果后終止反應(yīng)。中性樹膠封片后光學(xué)顯微鏡觀察。每組隨機(jī)取5張免疫組織化學(xué)切片，在高倍鏡下，每張切片隨機(jī)取5個視野，應(yīng)用Image-pro plus 5.0圖像分析軟件進(jìn)行OD值的測量。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包，對計量資料進(jìn)行方差齊性檢驗。方差齊性者，用單因素方差分析(one-way ANOVA)檢驗總體均數(shù)差異性，有顯著性差異者再進(jìn)行兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1MCF-7細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

倒置顯微鏡下見正常對照組(圖1)細(xì)胞生長旺盛，多呈橢圓形或多角形，細(xì)胞體飽滿、完整，細(xì)胞核較大，呈卵圓形且多居中。用大黃素處理人乳腺癌細(xì)胞MCF-7后隨著藥物大黃素濃度的增大、作用時間的延長，表現(xiàn)為細(xì)胞體積縮小，活細(xì)胞數(shù)減少，胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間不再連接成片，有的細(xì)胞黑色顆粒增多(圖2～5)。

2.2MTT法MCF-7細(xì)胞增殖力的測定結(jié)果

與對照組比較，大黃素各濃度組的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖能力均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的抑制作用具有時間依賴性和濃度依賴性。不同濃度大黃素在不同時間段對MCF-7細(xì)胞的抑制率隨大黃素濃度的加大或作用時間的延長，對MCF-7細(xì)胞的抑制率逐漸增大，同一時間80 μmol/L大黃素組為最明顯。同一濃度以作用72 h和96 h時最明顯(表1)。然而，若先用20 μmol/L JNK抑制劑AS601245孵育30 min后，再加入大黃素40 μmol/L處理，并不能明顯抑制MCF-7細(xì)胞的增殖，與對照組比較細(xì)胞增殖率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

抑制率(IR) =(1-樣品組OD值/對照組OD值) ×100%

表1　大黃素對體外培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7

注：★與對照組比較，P<0.05；△與24 h比較，P<0.05。

2.3大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的影響

不同濃度的大黃素作用于人乳腺癌細(xì)胞MCF-7 48 h后，MCF-7細(xì)胞出現(xiàn)明顯的早期凋亡現(xiàn)象，并且這種凋亡現(xiàn)象有明顯的濃度依賴性關(guān)系，隨大黃素濃度升高，細(xì)胞凋亡率也升高，組間比較有顯著差異(P<0.05)。然而，若先用20μmol/L JNK抑制劑AS601245處理細(xì)胞，再加入40 μmol/L大黃素對MCF-7細(xì)胞凋亡率增加不明顯，與對照組比較，MCF-7細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，表2和圖7)。

表2　大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的影響

注：與其他組比較★P<0.05；B、C、D、E 4組間兩兩比較，均P<0.05。

2.4大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7 JNK蛋白表達(dá)的影響

人乳腺癌細(xì)胞MCF-7培養(yǎng)細(xì)胞爬片，經(jīng)S-P法免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察和圖像分析，結(jié)果表明：與空白對照組比較，大黃素各劑量組MCF-7細(xì)胞 JNK表達(dá)存在顯著性差異(P<0.05)，隨著大黃素濃度的增大，JNK表達(dá)(OD值)逐漸增強(P<0.05)。如果對MCF-7細(xì)胞行20 μmol/L AS601245預(yù)處理，MCF-7細(xì)胞JNK表達(dá)并不增強(圖8～10及表3所示)。

表3　大黃素對體外培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞JNK

分組OD值對照組(A)6.03±0.3510μmol/L大黃素組(B)6.83±0.39★20μmol/L大黃素組(C)8.06±0.37★★40μmol/L大黃素組(D)10.12±0.45★★80μmol/L大黃素組(E)12.37±0.52★★20μmol/LAS601245+40μmol/L大黃素組(F)6.21±0.38

注：與對照組相比較，★P<0.05， ★★P<0.01。

2.5不同劑量大黃素對MCF-7細(xì)胞AP-1表達(dá)的影響

Western blot發(fā)現(xiàn)：與對照組比較，10 μmol/L大黃素即可引起人乳腺癌細(xì)胞MCF-7中JNK下游信號分子AP-1在表達(dá)升高(P<0.05)，并且隨著大黃素濃度的增大，AP-1表達(dá)也逐步增強(P<0.05)，與JNK表達(dá)相一致。若用20μmol/L AS601245預(yù)處理MCF-7，MCF-7細(xì)胞AP-1表達(dá)并不增強(圖11)，這與MCF-7細(xì)胞凋亡率一致。

圖11　不同劑量大黃素對MCF-7細(xì)胞AP-1表達(dá)的影響

3討論

3.1大黃素抗腫瘤、抗乳腺癌作用

大黃素(Emodin)(1，3，8-三羥基-6-甲基蒽醌)屬單蒽核類1，8-二經(jīng)基蒽醌衍生物，具有如抗炎、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)肝臟等多種生物活性作用[1]。近幾年來，對蒽醌類大黃素等性能及藥理的研究，已經(jīng)擴(kuò)展到腫瘤治療領(lǐng)域，逐步探究其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)理，正在成為一個重要的研究方向，并取得了一定進(jìn)展。在此基礎(chǔ)上，我們主要討論其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

大量研究表明，大黃素對多種腫瘤細(xì)胞的生長有抑制作用，如人卵巢癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌、人慢性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞、胰腺癌等[2-7]。大黃素表現(xiàn)出強大的抗腫瘤效應(yīng)，可能是由于其抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤血管生成和侵襲、轉(zhuǎn)移，增加腫瘤的化療敏感性和逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥，減輕化療藥物毒副反應(yīng)等多種機(jī)制，其誘導(dǎo)凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑主要有Bax-Caspase途徑、ERK途徑、PKC途徑、Fas途徑及ROS途徑等[8-10]，大黃素可在一定程度上逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐受，具有抑制核苷轉(zhuǎn)運的作用，大黃素能抑制多種惡性腫瘤細(xì)胞生長并誘導(dǎo)凋亡，其機(jī)制是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species，ROS)，然后凋亡調(diào)控基因Bcl-2表達(dá)水平降低、Bax表達(dá)水平升高，導(dǎo)致線粒體內(nèi)cytochromec釋放入胞漿，進(jìn)而激活Caspase 2、3、9的活性，如此通過線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[11-12]。本研究在體外實驗應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率，結(jié)果表明：用大黃素處理人乳腺癌細(xì)胞MCF-7后隨著藥物大黃素濃度的增大、作用時間的延長，表現(xiàn)為細(xì)胞體積縮小，活細(xì)胞數(shù)減少，胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間不再連接成片，有的細(xì)胞黑色顆粒增多。大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的抑制作用具有時間依賴性和濃度依賴性。不同濃度大黃素在不同時間段對MCF-7細(xì)胞的抑制率隨大黃素濃度的加大或作用時間的延長，對MCF-7細(xì)胞的抑制率逐漸增大，說明大黃素可降低人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖能力，促進(jìn)早期凋亡。

3.2大黃素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡與JNK信號通路關(guān)系

絲裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)是細(xì)胞外信號從細(xì)胞表面轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部的重要傳遞者，從細(xì)胞外刺激作用于細(xì)胞至細(xì)胞出現(xiàn)相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)，其間通過了MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路多級蛋白激酶的級聯(lián)反應(yīng)。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)是MAPK家族的一個主要成員，其誘導(dǎo)活化與細(xì)胞凋亡反應(yīng)存在密切關(guān)系。研究表明，激活JNK信號通路是抑制腫瘤細(xì)胞增殖，引起腫瘤細(xì)胞凋亡主要分子機(jī)制[13]。JNK信號途徑可被多種細(xì)胞應(yīng)激因素激活，如紫外線輻射、過氧化氫作用、DNA損傷、熱休克和化學(xué)治療藥物的應(yīng)用等[12]?；罨腏NK通過對其信號通路的下游底物轉(zhuǎn)錄因子c-Jun、ATF-2、Elk-1等的磷酸化，促進(jìn)基因的表達(dá)及新蛋白質(zhì)的合成，新生蛋白質(zhì)可能作用于細(xì)胞凋亡途徑的某一環(huán)節(jié)而促進(jìn)或引起細(xì)胞凋亡[14-15]。近年大量研究表明，在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中，JNK依賴性的凋亡可能受到抑制，提示JNK信號途徑成分是潛在的抑癌基因，因此，JNK信號通路是一個干預(yù)治療的潛在分子靶點。Altiok等[16]研究也報道：JNK信號途徑調(diào)節(jié)雌二醇-誘導(dǎo)的激素依賴性人乳腺癌細(xì)胞凋亡，JNK信號通路激活，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡，有助于乳腺癌治療。然而，大黃素可否抑制乳腺癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，鮮見報道，且機(jī)制不清。周頡等[15]研究表明：大黃素對體外培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞株的多藥耐藥有明顯的逆轉(zhuǎn)作用，同時還下調(diào)了ERCC1的表達(dá)水平，低毒安全，有值得深入研究的價值。Dhanasekaran等[17]研究了p-JNK 在乳腺浸潤導(dǎo)管癌中的表達(dá)，結(jié)果顯示p-JNK表達(dá)水平在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中增強。JNK信號通路誘導(dǎo)活化與細(xì)胞凋亡反應(yīng)存在密切關(guān)系，磷酸化JNK與磷酸化Bcl-2的表達(dá)呈正相關(guān)，JNK與Bcl-2同屬一個信號通路，且具有上下游關(guān)系的JNK與Bcl-2的激活可以抑制腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移。Huang等[18]研究發(fā)現(xiàn)：Hela細(xì)胞M-RIPsiRNA組與對照組比較，其遷移與侵襲能力明顯減低，但M-RIP的這種作用是通過JNK通路的激活而產(chǎn)生的，即JNK通路的激活使M-RIP的表達(dá)增加，從而影響腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。本研究顯示：大黃素對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的抑制作用具有時間依賴性和濃度依賴性。不同濃度的大黃素作用于人乳腺癌細(xì)胞MCF-7 48 h后，MCF-7細(xì)胞出現(xiàn)明顯的早期凋亡現(xiàn)象，并且這種凋亡現(xiàn)象有明顯的濃度依賴性關(guān)系，隨大黃素濃度升高，細(xì)胞凋亡率也升高；若先用20 μmol/L JNK抑制劑AS601245處理細(xì)胞，再加入40 μmol/L大黃素對MCF-7細(xì)胞凋亡率增加不明顯。與空白對照組比較，大黃素各劑量組MCF-7細(xì)胞 JNK表達(dá)存在顯著性差異，隨著大黃素濃度的增大，JNK表達(dá)(OD值)逐漸增強；如果對MCF-7細(xì)胞行20 μmol/L AS601245預(yù)處理，MCF-7細(xì)胞JNK表達(dá)并不增強。說明大黃素可能通過抑制JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡。

3.3核轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白1(AP-1)與JNK信號通路關(guān)系

核轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白1(activator protein 1，AP-1)是位于JNK下游介導(dǎo)促細(xì)胞凋亡效應(yīng)的關(guān)鍵信號蛋白分子，能夠?qū)⒓?xì)胞外刺激信號傳導(dǎo)至細(xì)胞核，并激活具有AP-1結(jié)合位點的靶基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[19]。JNK是一種能夠激活A(yù)P-1的關(guān)鍵上游蛋白激酶，可通過磷酸化Fos、Jun蛋白從而增強AP-1的轉(zhuǎn)錄激活活性。郝一等[20]研究表明：As2O3可誘導(dǎo)JNK持續(xù)性高強度表達(dá)，轉(zhuǎn)錄因子AP-1的轉(zhuǎn)錄激活活性上調(diào)，認(rèn)為JNK/AP-1途徑是介導(dǎo)As2O3誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡反應(yīng)的重要信號通路。AP-1的活性主要受MAPKs家族調(diào)節(jié)，該家族有多個亞家族，其中在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用的有3種：JNK，p38及ERK。在不同的組織和細(xì)胞中，AP-1受不同的激酶調(diào)控。AP-1作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，能夠?qū)⒓?xì)胞外刺激信號傳導(dǎo)至細(xì)胞核，并激活具有AP-1結(jié)合位點的靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[21]。殷詠梅等[22]研究顯示，在MCF-7細(xì)胞中，TNF-α通過JNK信號通路激活A(yù)P-1家族成員，而對其他兩條MAPKs通路沒有明顯影響。本研究結(jié)果顯示：大黃素即可引起人乳腺癌細(xì)胞MCF-7中JNK下游信號分子AP-1在表達(dá)升高，并且隨著大黃素濃度的增大，AP-1表達(dá)也逐步增強，與JNK表達(dá)相一致。若用20 μmol/L AS601245預(yù)處理MCF-7，MCF-7細(xì)胞AP-1表達(dá)并不增強，這與MCF-7細(xì)胞凋亡率一致。進(jìn)一步證明大黃素通過抑制JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡。

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The Emodin inducted human breast cancer MCF-7cell apoptosis and activated JNK signal transduction pathwaysFANXiangwen，ZHANGYong，XILiang，LIShangdong.(DepartmentofSurgicalOncology,BaogangHospital,Baotou014010,China)

Correspondingauthor:FANXiangwen,E-mail：fanxiangwenbill@163.com

Abstract：ObjectiveTo explore the Emodin impact on human breast cancer MCF-7 cell proliferation and apoptosis, as well as related to JNK signal pathway. Method Application of inverted phase contrast microscope observed human breast cancer MCF-7 cell growth in vitro, proliferation of MCF-7 cell was detected by MTT method, and apoptosis of MCF-7 cell was detected by flow cytometer.Using Western blot and immunohistochemistry methods detected expressions of JNK and activator protein 1(AP-1) related apoptosis. ResultsThe Emodin could reduce human breast cancer MCF-7 cell proliferation vary with time and the concentration respectively, and there had a statistically significance (P<0.05). The Emodin reduced human breast cancer MCF-7 cell early apoptosis phenomenon, in a concentration dependence way, with a statistically significant (P<0.05).Different concentration of Emodin could enhance expression of JNK signal downstream of AP-1 gene related apoptosis in human breast cancer MCF-7 cell, and there had a statistically significance (P<0.05). ConclusionsThe Emodin could reduce proliferation capacity of human breast cancer MCF-7 cell in vitro, promote early apoptosis, enhance expressions of JNK and AP-1 related apoptosis in human breast cancer MCF-7 cell. The Emodin could inhibit human breast cancer MCF-7 cell proliferation, promote apoptosis by activation of JNK signal transduction pathways.

Keywords：Emodin; Breast cancer;MAPK;JNK;Activator protein 1(AP-1)

[收稿日期：2015-06-15][本文編輯：李筱蕾]

文章編號：1674-4136(2015)06-0346-06

doi：10.3969/j.issn.1674-4136.2015.06.002

通訊作者:樊向文,E-mail:fanxiangwenbill@163.com

基金項目：內(nèi)蒙古自然基金項目(2013SM1168)
作者單位： 014010內(nèi)蒙古包頭，內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院腫瘤外科
第一作者： 樊向文，男，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：乳腺癌及消化道腫瘤的診治，E-mail：fanxiangwenbill@163.com