草菇液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化研究

任海霞等

摘要：為了完善草菇液體菌種的生產(chǎn)和應(yīng)用，盡快使草菇實(shí)現(xiàn)工廠化栽培，本試驗(yàn)以天達(dá)V901為試材，通過(guò)搖瓶發(fā)酵，進(jìn)行了草菇液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化研究。結(jié)果表明，液體培養(yǎng)條件下，適宜草菇菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源是淀粉，最佳氮源是蛋白胨，最佳碳氮比是10∶1，最佳淀粉濃度是3.0%。草菇菌絲生長(zhǎng)的最適溫度為30℃，最適初始pH為7.0。

關(guān)鍵詞：草菇；液體培養(yǎng)；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；培養(yǎng)條件；優(yōu)化試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S646.1+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）01-0058-03

草菇（Volvariellavolvacea）味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，素有“放一片，香一鍋”之美譽(yù)，同時(shí)它還有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體抗病力的作用，是一種優(yōu)良的食藥兼用型營(yíng)養(yǎng)保健食品[1]。由于我國(guó)草菇的出口量較大，素有“中國(guó)蘑菇”之稱[2]。草菇是典型的高溫型食用菌，在熱帶和亞熱帶地區(qū)被廣泛栽培[3]。我國(guó)南方各省均有栽培，是我國(guó)南方的一種著名食用菌。近幾年我國(guó)北方省區(qū)也逐步在夏季進(jìn)行廣泛栽培。

由于生產(chǎn)工藝、技術(shù)條件及資金的限制，目前我國(guó)多數(shù)食用菌生產(chǎn)企業(yè)仍然以固體制種為主，液體制種的應(yīng)用只局限于杏鮑菇、金針菇和蟹味菇等品種[4]。而草菇一般都是傳統(tǒng)方法栽培，多采用固體接種，生物學(xué)效率明顯低于其他主要品種的食用菌[5]，故其制種技術(shù)和栽培技術(shù)急需改進(jìn)。為了完善草菇液體菌種的生產(chǎn)和應(yīng)用，盡快使草菇實(shí)現(xiàn)工廠化栽培，本試驗(yàn)通過(guò)搖瓶發(fā)酵，對(duì)草菇液體菌種培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化研究。1材料與方法

1.1供試菌株

天達(dá)V901，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所保藏。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，麩皮80g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水1000ml，pH自然。121℃滅菌20min。

1.2.2基礎(chǔ)培養(yǎng)基葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水1000ml，pH自然。121℃滅菌20min。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

液體培養(yǎng)條件對(duì)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響。

（1）在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，依次對(duì)碳源、氮源、碳源濃度及碳氮比進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。

（2）在最佳營(yíng)養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上分別設(shè)定不同發(fā)酵初始pH值以及培養(yǎng)溫度進(jìn)行試驗(yàn)，篩選最佳初始pH值和培養(yǎng)溫度。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1接種從試管斜面上挑取草菇菌絲接種到種子培養(yǎng)基中，150r/min、35℃恒溫培養(yǎng)5天，接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基上進(jìn)行試驗(yàn)。

1.4.2培養(yǎng)條件250ml三角瓶中裝入100ml培養(yǎng)液，接種后，35℃、150r/min培養(yǎng)5天，檢測(cè)。

1.4.3檢測(cè)方法（1）菌絲干重的測(cè)定[6]：取80ml發(fā)酵液離心收集菌絲，洗滌兩次后涂布到表面皿上，80℃烘至恒重，稱重。

（2）菌球數(shù)量測(cè)定：取1ml發(fā)酵液倒入平板中計(jì)數(shù)，取3次的平均值。

（3）菌球大小測(cè)定：隨機(jī)取15個(gè)菌球，在平板上排成一排，測(cè)定總長(zhǎng)度，計(jì)算出單個(gè)菌球的直徑，測(cè)量3次取平均值[7]。

2結(jié)果與分析

2.1不同碳源物質(zhì)對(duì)液體培養(yǎng)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從表1可以看出，以淀粉為碳源，菌絲生長(zhǎng)最快，菌絲干重為9.14mg/ml；其次是麥芽糖，菌絲干重為8.12mg/ml；菌絲生長(zhǎng)最慢的是葡萄糖，僅為4.01mg/ml。從菌球來(lái)看，淀粉為碳源，菌球小、數(shù)量多；其次是麥芽糖、果糖、糊精、蔗糖，以葡萄糖為碳源生長(zhǎng)差，菌球數(shù)量最少。作為液體菌種，不僅要考慮菌絲量，還要綜合考慮菌球的指標(biāo)，菌球小、數(shù)量多、菌絲量大的液體菌種比較好，故最適碳源為淀粉。

2.2不同氮源物質(zhì)對(duì)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從表2可以看出，以蛋白胨為氮源菌絲生長(zhǎng)最快，菌絲干重為10.23mg/ml；其次是酵母粉，菌絲干重為8.12mg/ml；以硝酸銨為氮源菌絲生長(zhǎng)最慢。從菌球來(lái)看，以蛋白胨和酵母粉為氮源，菌球數(shù)多且大小均勻；其次是以硝酸鉀和尿素為氮源的培養(yǎng)基；以硫酸銨、硝酸銨為氮源，菌球數(shù)量少，幾乎不長(zhǎng)。綜合分析，有機(jī)氮源比無(wú)機(jī)氮源更適于草菇菌絲生長(zhǎng)，且以蛋白胨為氮源效果最好。endprint

摘要：為了完善草菇液體菌種的生產(chǎn)和應(yīng)用，盡快使草菇實(shí)現(xiàn)工廠化栽培，本試驗(yàn)以天達(dá)V901為試材，通過(guò)搖瓶發(fā)酵，進(jìn)行了草菇液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化研究。結(jié)果表明，液體培養(yǎng)條件下，適宜草菇菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源是淀粉，最佳氮源是蛋白胨，最佳碳氮比是10∶1，最佳淀粉濃度是3.0%。草菇菌絲生長(zhǎng)的最適溫度為30℃，最適初始pH為7.0。

關(guān)鍵詞：草菇；液體培養(yǎng)；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；培養(yǎng)條件；優(yōu)化試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S646.1+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）01-0058-03

草菇（Volvariellavolvacea）味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，素有“放一片，香一鍋”之美譽(yù)，同時(shí)它還有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體抗病力的作用，是一種優(yōu)良的食藥兼用型營(yíng)養(yǎng)保健食品[1]。由于我國(guó)草菇的出口量較大，素有“中國(guó)蘑菇”之稱[2]。草菇是典型的高溫型食用菌，在熱帶和亞熱帶地區(qū)被廣泛栽培[3]。我國(guó)南方各省均有栽培，是我國(guó)南方的一種著名食用菌。近幾年我國(guó)北方省區(qū)也逐步在夏季進(jìn)行廣泛栽培。

由于生產(chǎn)工藝、技術(shù)條件及資金的限制，目前我國(guó)多數(shù)食用菌生產(chǎn)企業(yè)仍然以固體制種為主，液體制種的應(yīng)用只局限于杏鮑菇、金針菇和蟹味菇等品種[4]。而草菇一般都是傳統(tǒng)方法栽培，多采用固體接種，生物學(xué)效率明顯低于其他主要品種的食用菌[5]，故其制種技術(shù)和栽培技術(shù)急需改進(jìn)。為了完善草菇液體菌種的生產(chǎn)和應(yīng)用，盡快使草菇實(shí)現(xiàn)工廠化栽培，本試驗(yàn)通過(guò)搖瓶發(fā)酵，對(duì)草菇液體菌種培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化研究。1材料與方法

1.1供試菌株

天達(dá)V901，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所保藏。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，麩皮80g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水1000ml，pH自然。121℃滅菌20min。

1.2.2基礎(chǔ)培養(yǎng)基葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水1000ml，pH自然。121℃滅菌20min。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

液體培養(yǎng)條件對(duì)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響。

（1）在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，依次對(duì)碳源、氮源、碳源濃度及碳氮比進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。

（2）在最佳營(yíng)養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上分別設(shè)定不同發(fā)酵初始pH值以及培養(yǎng)溫度進(jìn)行試驗(yàn)，篩選最佳初始pH值和培養(yǎng)溫度。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1接種從試管斜面上挑取草菇菌絲接種到種子培養(yǎng)基中，150r/min、35℃恒溫培養(yǎng)5天，接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基上進(jìn)行試驗(yàn)。

1.4.2培養(yǎng)條件250ml三角瓶中裝入100ml培養(yǎng)液，接種后，35℃、150r/min培養(yǎng)5天，檢測(cè)。

1.4.3檢測(cè)方法（1）菌絲干重的測(cè)定[6]：取80ml發(fā)酵液離心收集菌絲，洗滌兩次后涂布到表面皿上，80℃烘至恒重，稱重。

（2）菌球數(shù)量測(cè)定：取1ml發(fā)酵液倒入平板中計(jì)數(shù)，取3次的平均值。

（3）菌球大小測(cè)定：隨機(jī)取15個(gè)菌球，在平板上排成一排，測(cè)定總長(zhǎng)度，計(jì)算出單個(gè)菌球的直徑，測(cè)量3次取平均值[7]。

2結(jié)果與分析

2.1不同碳源物質(zhì)對(duì)液體培養(yǎng)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從表1可以看出，以淀粉為碳源，菌絲生長(zhǎng)最快，菌絲干重為9.14mg/ml；其次是麥芽糖，菌絲干重為8.12mg/ml；菌絲生長(zhǎng)最慢的是葡萄糖，僅為4.01mg/ml。從菌球來(lái)看，淀粉為碳源，菌球小、數(shù)量多；其次是麥芽糖、果糖、糊精、蔗糖，以葡萄糖為碳源生長(zhǎng)差，菌球數(shù)量最少。作為液體菌種，不僅要考慮菌絲量，還要綜合考慮菌球的指標(biāo)，菌球小、數(shù)量多、菌絲量大的液體菌種比較好，故最適碳源為淀粉。

2.2不同氮源物質(zhì)對(duì)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從表2可以看出，以蛋白胨為氮源菌絲生長(zhǎng)最快，菌絲干重為10.23mg/ml；其次是酵母粉，菌絲干重為8.12mg/ml；以硝酸銨為氮源菌絲生長(zhǎng)最慢。從菌球來(lái)看，以蛋白胨和酵母粉為氮源，菌球數(shù)多且大小均勻；其次是以硝酸鉀和尿素為氮源的培養(yǎng)基；以硫酸銨、硝酸銨為氮源，菌球數(shù)量少，幾乎不長(zhǎng)。綜合分析，有機(jī)氮源比無(wú)機(jī)氮源更適于草菇菌絲生長(zhǎng)，且以蛋白胨為氮源效果最好。endprint

摘要：為了完善草菇液體菌種的生產(chǎn)和應(yīng)用，盡快使草菇實(shí)現(xiàn)工廠化栽培，本試驗(yàn)以天達(dá)V901為試材，通過(guò)搖瓶發(fā)酵，進(jìn)行了草菇液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化研究。結(jié)果表明，液體培養(yǎng)條件下，適宜草菇菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源是淀粉，最佳氮源是蛋白胨，最佳碳氮比是10∶1，最佳淀粉濃度是3.0%。草菇菌絲生長(zhǎng)的最適溫度為30℃，最適初始pH為7.0。

關(guān)鍵詞：草菇；液體培養(yǎng)；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；培養(yǎng)條件；優(yōu)化試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S646.1+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）01-0058-03

草菇（Volvariellavolvacea）味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，素有“放一片，香一鍋”之美譽(yù)，同時(shí)它還有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體抗病力的作用，是一種優(yōu)良的食藥兼用型營(yíng)養(yǎng)保健食品[1]。由于我國(guó)草菇的出口量較大，素有“中國(guó)蘑菇”之稱[2]。草菇是典型的高溫型食用菌，在熱帶和亞熱帶地區(qū)被廣泛栽培[3]。我國(guó)南方各省均有栽培，是我國(guó)南方的一種著名食用菌。近幾年我國(guó)北方省區(qū)也逐步在夏季進(jìn)行廣泛栽培。

由于生產(chǎn)工藝、技術(shù)條件及資金的限制，目前我國(guó)多數(shù)食用菌生產(chǎn)企業(yè)仍然以固體制種為主，液體制種的應(yīng)用只局限于杏鮑菇、金針菇和蟹味菇等品種[4]。而草菇一般都是傳統(tǒng)方法栽培，多采用固體接種，生物學(xué)效率明顯低于其他主要品種的食用菌[5]，故其制種技術(shù)和栽培技術(shù)急需改進(jìn)。為了完善草菇液體菌種的生產(chǎn)和應(yīng)用，盡快使草菇實(shí)現(xiàn)工廠化栽培，本試驗(yàn)通過(guò)搖瓶發(fā)酵，對(duì)草菇液體菌種培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化研究。1材料與方法

1.1供試菌株

天達(dá)V901，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所保藏。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，麩皮80g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水1000ml，pH自然。121℃滅菌20min。

1.2.2基礎(chǔ)培養(yǎng)基葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水1000ml，pH自然。121℃滅菌20min。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

液體培養(yǎng)條件對(duì)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響。

（1）在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，依次對(duì)碳源、氮源、碳源濃度及碳氮比進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。

（2）在最佳營(yíng)養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上分別設(shè)定不同發(fā)酵初始pH值以及培養(yǎng)溫度進(jìn)行試驗(yàn)，篩選最佳初始pH值和培養(yǎng)溫度。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1接種從試管斜面上挑取草菇菌絲接種到種子培養(yǎng)基中，150r/min、35℃恒溫培養(yǎng)5天，接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基上進(jìn)行試驗(yàn)。

1.4.2培養(yǎng)條件250ml三角瓶中裝入100ml培養(yǎng)液，接種后，35℃、150r/min培養(yǎng)5天，檢測(cè)。

1.4.3檢測(cè)方法（1）菌絲干重的測(cè)定[6]：取80ml發(fā)酵液離心收集菌絲，洗滌兩次后涂布到表面皿上，80℃烘至恒重，稱重。

（2）菌球數(shù)量測(cè)定：取1ml發(fā)酵液倒入平板中計(jì)數(shù)，取3次的平均值。

（3）菌球大小測(cè)定：隨機(jī)取15個(gè)菌球，在平板上排成一排，測(cè)定總長(zhǎng)度，計(jì)算出單個(gè)菌球的直徑，測(cè)量3次取平均值[7]。

2結(jié)果與分析

2.1不同碳源物質(zhì)對(duì)液體培養(yǎng)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從表1可以看出，以淀粉為碳源，菌絲生長(zhǎng)最快，菌絲干重為9.14mg/ml；其次是麥芽糖，菌絲干重為8.12mg/ml；菌絲生長(zhǎng)最慢的是葡萄糖，僅為4.01mg/ml。從菌球來(lái)看，淀粉為碳源，菌球小、數(shù)量多；其次是麥芽糖、果糖、糊精、蔗糖，以葡萄糖為碳源生長(zhǎng)差，菌球數(shù)量最少。作為液體菌種，不僅要考慮菌絲量，還要綜合考慮菌球的指標(biāo)，菌球小、數(shù)量多、菌絲量大的液體菌種比較好，故最適碳源為淀粉。

2.2不同氮源物質(zhì)對(duì)草菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從表2可以看出，以蛋白胨為氮源菌絲生長(zhǎng)最快，菌絲干重為10.23mg/ml；其次是酵母粉，菌絲干重為8.12mg/ml；以硝酸銨為氮源菌絲生長(zhǎng)最慢。從菌球來(lái)看，以蛋白胨和酵母粉為氮源，菌球數(shù)多且大小均勻；其次是以硝酸鉀和尿素為氮源的培養(yǎng)基；以硫酸銨、硝酸銨為氮源，菌球數(shù)量少，幾乎不長(zhǎng)。綜合分析，有機(jī)氮源比無(wú)機(jī)氮源更適于草菇菌絲生長(zhǎng)，且以蛋白胨為氮源效果最好。endprint