XRCC1基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌易患性的關(guān)聯(lián)性研究

龔文鋒，張秋明，鐘鑒宏，白　濤，黃　山，向邦德，馬　良， 黎樂群※

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肝膽外科，南寧 530021； 2.廣西醫(yī)科大學(xué)第十附屬醫(yī)院綜合病區(qū)，廣西 欽州 535000)

XRCC1基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌易患性的關(guān)聯(lián)性研究

龔文鋒1，張秋明2，鐘鑒宏1，白濤1，黃山1，向邦德1，馬良1， 黎樂群1※

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肝膽外科，南寧 530021； 2.廣西醫(yī)科大學(xué)第十附屬醫(yī)院綜合病區(qū)，廣西 欽州 535000)

摘要：目的評(píng)價(jià)X線交叉互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1) Arg280His位點(diǎn)基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性。方法檢索PubMed、EMABSE及中國知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫，收集關(guān)于XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與HCC易患性的病例對照研究，提取數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta分析。以病例組及對照組XRCC1 Arg280His基因型分布的比值比(OR)為效應(yīng)指標(biāo)，計(jì)算合并OR值及其95%置信區(qū)間(CI)。 結(jié)果共7篇文獻(xiàn)符合納入標(biāo)準(zhǔn)，累計(jì)病例1448例，對照1529例。Arg/Arg基因型與His/His基因型比較的OR=0.69 (95%CI0.47~1.01,P=0.05)。而Arg/Arg基因型與Arg/His+His/His基因型比較的OR=0.78(95%CI0.52~1.17,P=0.24)。Arg-allele 與 His-allele比較的OR=0.74 (95%CI0.52~1.04,P=0.09)。 結(jié)論XRCC1 Arg280His位點(diǎn)基因多態(tài)性可能不參與HCC的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞癌；X線交叉互補(bǔ)修復(fù)基因1；多態(tài)性； Meta分析

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是在全世界男性癌性死亡原因中排第二、女性癌性死亡原因中排第六的惡性腫瘤[1]，發(fā)病率在全球范圍分布不均，以東南亞及撒哈拉以南非洲地區(qū)的發(fā)病率最高[2]。HCC的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，流行病學(xué)及臨床研究表明，HCC與肝炎病毒[3-4]、黃曲霉素B1感染[5]、酒精性肝硬化[6]等相關(guān)。然而，暴露在這些環(huán)境的個(gè)體并不都罹患HCC，提示HCC的發(fā)生不僅取決于環(huán)境因素，還可能受個(gè)體遺傳易患性[7-8]的影響。致病因素和(或)其代謝產(chǎn)物通過損傷機(jī)體的DNA導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞不穩(wěn)定從而誘發(fā)癌變，而機(jī)體通過DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)參與修復(fù)以維持基因組穩(wěn)定性。X線交叉互補(bǔ)修復(fù)基因1(X-ray repair cross-complementing group 1，XRCC1)是機(jī)體非常重要的DNA損傷修復(fù)基因，其第280密碼子編碼的氨基酸發(fā)生G→A變異從而導(dǎo)致Arg→His改變，該變異可能改變XRCC1基因的功能而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。關(guān)于XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與腫瘤發(fā)病易患性的研究較多，包括HCC，但由于各研究樣本量相對不大且結(jié)果缺乏一致性。因此，本研究擬采用Meta分析方法來評(píng)估XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與HCC發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。

1材料與方法

1.1文獻(xiàn)檢索中文以肝癌、XRCC1、X線交叉互補(bǔ)修復(fù)基因1、多態(tài)性，英文以HCC/Hepatocellular Carcinoma；XRCC1/X-ray Repair Cross-Complementing group 1/DNA repair genes為主題詞、關(guān)鍵詞，分別在中國知網(wǎng)、維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫、萬方全文數(shù)據(jù)庫及PubMed、EMBASE數(shù)據(jù)庫上進(jìn)行檢索，檢索日期截至2014年4月，收集關(guān)于XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與HCC易患性的病例對照研究。

1.2文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)①國內(nèi)外關(guān)于XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與HCC易患性的病例-對照研究；②研究方法相同或相似，暴露定義相同，能提供病例組(HCC患者)和對照組(健康人群)的觀察人數(shù)、基因型頻率分布及相關(guān)原始數(shù)據(jù)；③HCC病例組均經(jīng)組織病理學(xué)確診。

1.3質(zhì)量評(píng)估通過以下幾方面對文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估來評(píng)定其偏倚及影響程度:①研究對象是否有明確的納入標(biāo)準(zhǔn);②病例組及對照組來源情況; ③統(tǒng)計(jì)方法是否恰當(dāng);④對研究存在的偏倚是否進(jìn)行了討論;⑤實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理;⑥對照組哈迪-溫伯格遺傳平衡(Hardy-Weinberg Equilibrium,HWE)情況。

1.4統(tǒng)計(jì)分析按Meta分析的要求分別收集、整理、核實(shí)及校對數(shù)據(jù)。采用RevMan 5.14統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行Meta分析，對文獻(xiàn)結(jié)果進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)(P>0.10 表示結(jié)果一致性較好，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；P≤0.10則采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行效應(yīng)量的合并)。以比值比(odds ratio,OR) 及其95% 置信區(qū)間 (confidence interval,CI) 作為每個(gè)研究結(jié)果的研究效應(yīng)測定指標(biāo)。HWE采用http://krunch.med.yale.edu/hwsim/網(wǎng)站提供的HWSIM程序進(jìn)行計(jì)算(P>0.05時(shí)表示群體基因遺傳平衡，數(shù)據(jù)來自同一蒙德爾群體，且具有代表性；P<0.05表示群體缺乏代表性)。采用敏感性分析評(píng)價(jià)結(jié)果的穩(wěn)定性，對納入的文獻(xiàn)使用倒漏斗圖進(jìn)行發(fā)表偏倚評(píng)價(jià)。

2結(jié)果

2.1文獻(xiàn)概述檢索符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)7篇[9-15]，6篇為中國人群[10-15]，1篇為印度人群[9]；3篇英文及4篇中文文獻(xiàn)，累計(jì)病例1448例，對照1529例。納入研究的基本特點(diǎn)如表1。

2.2Meta分析結(jié)果

2.2.1Arg-allele vs His-allele異質(zhì)性檢驗(yàn)P<0.001，I2=78%，存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算，OR=0.74，95%CI0.52~1.04,P=0.09 (圖2)。

表1　納入文獻(xiàn)中觀察組與對照組的一般資料

PCR-RFLP：限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)；PCR-CTPP：四引物擴(kuò)增受阻突變體系聚合酶鏈反應(yīng)；TaqMan:實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)；病例組：肝細(xì)胞癌患者，對照組：健康人群; 同一研究中的病例組及對照組中的基因檢測方法均為同一檢測方法(如均為PCR-RFLP、PCR-CTPP、TaqMan);基因分型中包含純合子及雜合子，其中純合子包含Arg/Arg(野生型)及His/His(突變型)，而雜合子指Arg/His

圖1　XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與HCC易患性關(guān)系的Meta分析森林圖(Arg-allele vs His-allele)

2.2.2Arg/Arg vs His/His異質(zhì)性檢驗(yàn)P=0.82，I2=0%，異質(zhì)性較好，采用固定效應(yīng)模型計(jì)算，OR=0.69，95%CI0.47~1.01,P=0.05。

2.2.3Arg/Arg vs.Arg/His+His/His異質(zhì)性檢驗(yàn)P=0.0003，I2=76%，存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算，OR=0.78，95%CI0.52~1.17,P=0.24。

2.3亞組分析

2.3.1中國人群Arg-allele vs His-allele;Arg/Arg vs His/His;Arg/Arg vs Arg/His+His/His；Arg/Arg+Arg/His vs His/His比較，合并OR值分別為0.78 (95%CI0.53~1.15,P=0.20)；0.74(95%CI0.48~1.15,P=0.18)；0.91 (95%CI0.64~1.30,P=0.59)；0.70 (95%CI0.46~1.05,P=0.09) 。

2.3.2印度人群對印度人群進(jìn)行分層分析，只有1個(gè)研究[2]共63例病例及155對照納入分析，結(jié)果顯示XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與HCC易患性的關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)，尚不能認(rèn)為XRCC1 Arg280His Arg/Arg分型是HCC的易患基因或保護(hù)基因型。

2.3.3樣本量>300例亞組分析將樣本量>300例的研究重新進(jìn)行Meta分析，共納入4個(gè)研究[2]共1195例病例及1224例對照，結(jié)果顯示對于總?cè)巳?，Arg-allele vs His-allele;Arg/Arg vs His/His;Arg/Arg vs Arg/His+His/His；Arg/Arg+Arg/His vs His/His比較，合并OR值分別為1.00 (95%CI0.74~1.37,P=0.98)；0.75 (95%CI0.48~1.16,P=0.19)；1.03 (95%CI0.71~1.51,P=0.87)；0.87 (95%CI0.56~1.37,P=0.55) 。

2.4敏感性分析去除HWE檢驗(yàn)P<0.05的研究[2]重新進(jìn)行Meta分析，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)明顯改變；去除權(quán)重大的文獻(xiàn)重新進(jìn)行Meta分析結(jié)果亦未發(fā)現(xiàn)顯著改變；分別采用固定效應(yīng)模型及隨機(jī)效應(yīng)模型對研究進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果亦無顯著改變。以上提示結(jié)果穩(wěn)定性較好，見表2。

表2　Meta分析結(jié)果敏感性分析

2.5發(fā)表偏倚Arg/Arg基因型與His/His基因型比較，Arg/Arg基因型與Arg/His+His/His基因型比較，Arg-allele與His-allele比較，發(fā)表偏倚均采用RevMan 5.14軟件進(jìn)行分析。漏斗圖顯示各研究之間分布均勻，提示存在發(fā)表偏倚的風(fēng)險(xiǎn)比較低，見圖2。

圖2　Arg-allele vs His-allele比較漏斗圖

3討論

XRCC1位于人第19號(hào)染色體的長臂(q13.2～13.3)，編碼633個(gè)氨基酸，其編碼的蛋白質(zhì)與DNA聚合酶β、多聚ADP核糖聚合酶以及DNA連接酶Ⅲ結(jié)合形成復(fù)合體參與對機(jī)體DNA損傷的修復(fù)，是機(jī)體重要的DNA 修復(fù)基因。該基因第280密碼子編碼的氨基酸發(fā)生G→A變異引起Arg→His改變，該變異可能改變XRCC1基因的功能而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。國內(nèi)外很多關(guān)于XRCC1 Arg280His基因多態(tài)性與腫瘤易患性的關(guān)聯(lián)研究，包括食管癌[16]、甲狀腺癌[17]、乳腺癌[18]、前列腺癌[19]等。然而，關(guān)于XRCC1 Arg280His多態(tài)性與HCC易患性的研究樣本量不大，且結(jié)果不盡相同，本研究擬采用Meta分析的方法評(píng)估該基因與HCC的關(guān)聯(lián)性。

本研究納入7個(gè)病例對照研究共1448 HCC病例及1529例健康對照，有4個(gè)[9-12]研究結(jié)果顯示XRCC1 Arg280His與HCC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，3個(gè)[13-15]研究顯示否定兩者相關(guān)性。本研究合并結(jié)果表明，XRCC1 Arg280His與HCC無關(guān)聯(lián)性，得出無關(guān)聯(lián)性結(jié)果最可能的原因是本研究納入的很多屬于小樣本的研究，這可能導(dǎo)致在計(jì)算XRCC1 Arg280His與HCC關(guān)聯(lián)性出現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)選擇性偏倚的可能。因此，該結(jié)果仍需要有更大樣本量更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯考{入后重新證實(shí)其關(guān)聯(lián)性，將>300例樣本量的研究重新進(jìn)行Meta分析，結(jié)果未顯示實(shí)質(zhì)性的改變，因此可以認(rèn)為本研究Meta分析存在選擇性偏倚的風(fēng)險(xiǎn)較低。在去除對照組的HWE<0.05的研究后重新進(jìn)行分析，結(jié)果亦顯示XRCC1 Arg280His與HCC無關(guān)聯(lián)性(P>0.05)；同時(shí)，分別采用隨機(jī)模型及固定模型進(jìn)行分析，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)實(shí)質(zhì)性改變。以上敏感性分析結(jié)果一致性表明本研究結(jié)果可信度比較高。

然而，本研究仍存在以下局限性：首先，盡管所有納入的病例及對照組均采用了一致的納入標(biāo)準(zhǔn)，然而，仍有可能存在潛在其他的因素影響計(jì)算結(jié)果；其次，HCC是多因素共同導(dǎo)致的疾病，由于缺乏原始的數(shù)據(jù)而無法在有無病毒感染、有無黃曲霉素B1暴露、有無酒精背景等方面進(jìn)行亞組分析；最后，由于數(shù)據(jù)缺乏而不能對納入的研究進(jìn)行基因-環(huán)境、基因-基因的相互作用進(jìn)行分析。

盡管如此，本研究表明XRCC1 Arg280His與HCC無關(guān)聯(lián)性。但結(jié)果仍需從基因-基因及基因-環(huán)境方面進(jìn)行更大樣本、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯縼碜C實(shí)，從而得到更可靠的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，為HCC提供更進(jìn)一步的防治措施。

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The Association Study of XRCC1 Gene Polymorphism and Hepatocellular Carcinoma Suspetibility

GONGWen-feng1,ZHANGQiu-ming2,ZHONGJian-hong1,BAITao1,HUANGShan1,XIANGBang-de1,MALiang1,LILe-qun1.

(1.DepartmentofHepatobiliarySurgery,AffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021，China; 2.DepartmentofComprehensiveMedicalTreatment,theTenthAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Qinzhou535000，China)

Abstract:ObjectiveTo explore the association between X-ray repair cross-complementing group 1(XRCC1) Arg280His polymorphism and risk of hepatocellular carcinoma(HCC).MethodsPubMed,EMBASE and the Chinese National Knowledge Infrastructure databases were systematically searched to identify relevant studies.Odds ratios (ORs) with 95% confidence intervals (CIs) were used to assess the strength of the association.ResultsAltogether 7 studies were included in the meta-analysis,involving 1448 cases and 1529 controls.The XRCC1 Arg280His polymorphism were not significantly associated with increasing or decreasing risk of HCC (Arg-allele vs His-allele:OR=0.74,95%CI0.52-1.04,P=0.09;Arg/Arg vs His/His:OR=0.69,95%CI0.47-1.01,P=0.05;Arg/Arg vs Arg/His+His/His:OR=0.78,95%CI0.52-1.17,P=0.24).ConclusionXRCC1 Arg280His polymorphism may not be involved in HCC.

Key words:Hepatocellular carcinoma; X-ray repair cross-complementing group 1; Polymorphism; Meta-analysis

收稿日期：2014-08-04修回日期：2015-09-23編輯：樓立理

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金(81160262)；廣西科學(xué)技術(shù)廳(桂科攻2011GXNSFD018032)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.23.041

中圖分類號(hào)：R735.7； R181.23

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)23-4337-04