桑椹、枳椇子、青果解酒配方的優(yōu)化及解酒作用

唐暉慧

(1黃山學(xué)院旅游學(xué)院，安徽黃山 245021;2揚(yáng)州大學(xué)旅游烹飪學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009)

我國是酒的故鄉(xiāng)，數(shù)千年文化積淀，酒幾乎滲透到社會(huì)生活的各個(gè)角落，形成了悠久深遠(yuǎn)的酒文化。少量飲酒具有益處，如促進(jìn)血液循環(huán)、加快新陳代謝等，但是過量飲酒導(dǎo)致大腦反應(yīng)遲鈍、視力下降、語言能力降低、行為不受控制，此外，還帶來了許多嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)、健康和社會(huì)問題。研究發(fā)現(xiàn)，乙醇在機(jī)體內(nèi)的代謝主要依靠肝臟中的乙醇脫氫酶等酶作用后轉(zhuǎn)化為乙醛，之后在乙醛脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)化為乙酸，從而排出體外［1］。在乙醇的代謝過程中，會(huì)使得機(jī)體肝臟中的自由基大量形成，使得肝臟的氧化性應(yīng)激增強(qiáng)，大大加強(qiáng)了肝臟中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而導(dǎo)致機(jī)體肝臟的損傷。乙醛也會(huì)通過降低肝臟中谷胱甘肽的濃度來增強(qiáng)肝臟的氧化性應(yīng)激。因此，在不能立刻拒絕飲酒時(shí)，解酒保肝成為克服飲酒所帶來的傷害的又一途徑。肝病的發(fā)生過程中自由基起到了極其重要的作用，因此增強(qiáng)肝臟的抗氧化能力是保護(hù)肝臟免受乙醇代謝傷害的主要途徑［2］。我國的藥食同源植物資源豐富，自古以來已發(fā)現(xiàn)眾多具有解酒保肝、抗氧化功效的植物，此外由于價(jià)格便宜、作用獨(dú)特、毒副作用小等特點(diǎn)，廣受青睞。目前，單一植物原料或其所含成分的解酒或抗氧化活性研究較多，但復(fù)合配方的相關(guān)研究極少。

本研究旨在藥食兼用植物中尋找具有解酒保肝功效的植物提取物配方。通過考察10 種常用解酒植物水提物的乙醇保持率、總抗氧化能力、DPPH 自由基清除率、超氧陰離子自由基清除活性，篩選出具有相對(duì)較強(qiáng)活性的原料組成配方。

1 材料與方法

1.1 材料

原料半夏(Pinella ternate)、枳椇子(Hovenia dulcis)、青果(Canarium album)、葛根(Pueraria lobata)、青皮(Vatica mangachapoi Blauco)、五味子(Schisandra chinensis)、菊花 (Chrysanthemun morifolium)、白術(shù)(Atractylodes macrocephala)、肉豆蔻 (Myristica fragrans)、桑椹(Morus alba)，均購自黃山市華氏大藥房;總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒，南京建成生物工程研究所;還原型輔酶I (NADH)，ICN Biomedicals 公司;吩嗪硫酸甲酯(PMS)，上海源葉生物科技有限公司;氯化氮藍(lán)四唑(NBT)，上?；瘜W(xué)試劑公司;無水乙醇(色譜純)、無水正丙醇(色譜純)、其他試劑與藥品，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

Agilent7890 氣相色譜儀、DB-WAX 色譜柱(30m×0.25mm，0.25μm)，美國Agilent 公司;Alpha-D2 凍干機(jī)，德國Christ 公司;PHS-3C pH 計(jì)，上海雷磁有限公司;UV752N 紫外可見分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司;AB135-S 電子天平，梅特勒托利多上海公司。

1.3 方法

1.3.1 受試物的制備

分別取10 種原料的生藥各1 kg，加入5 L 水，分別煎煮3 次，每次1.5 h，合并濾液，經(jīng)負(fù)壓蒸發(fā)濃縮，再抽濾，再減壓濃縮至稠狀，真空冷凍干燥，粉碎，得到粗提物粉末，置于－20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。待測(cè)樣品溶液配制:將上述10 種原料水提物分別稱取0.05 g，定容于10 mL 容量瓶中，配置為0.5%原料水提物溶液，備用。

1.3.2 乙醇保持率測(cè)定

乙醇保持率是指解酒物質(zhì)包裹乙醇，使得游離乙醇量減少，抑制或延緩乙醇的體內(nèi)吸收。待測(cè)樣品溶液制備同1.3.1 項(xiàng)。測(cè)定溶液配制:于10 mL 具塞容量瓶中添加0.2 mL 無水乙醇和0.25 mL 待測(cè)樣品溶液搖勻，靜置1 h，再加入0.2 mL 無水正丙醇，最后用丙酮定容至刻度，測(cè)定溶液中乙醇含量。

乙醇保持率(%)=［(添加乙醇含量－處理后測(cè)定乙醇含量)/添加乙醇含量］×100%

乙醇含量的測(cè)定參考《中國藥典》2010 版一部附錄IX M［3］，采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定，正丙醇為內(nèi)標(biāo)物。色譜條件:升溫程序:初溫50 ℃保留7 min，以10 ℃/min 升至110 ℃，保留3 min;載氣N2:3.0 mL/min;H2:47.0 mL/min;空氣流速:400 mL/min;檢測(cè)器溫度:220 ℃;進(jìn)樣口溫度:200 ℃;分流比:100∶1。

1.3.3 總抗氧化能力測(cè)定

具有抗氧化性質(zhì)的物質(zhì)能將Fe3+還原成Fe2+，而Fe2+能與菲啉物質(zhì)形成穩(wěn)固的絡(luò)合物，因此可以通過比色法來測(cè)定這類物質(zhì)抗氧化能力的高低。總抗氧化能力的定義:在37 ℃時(shí)，每分鐘每毫克樣品使反應(yīng)體系的吸光度(OD)值，每增加0.01 時(shí)，為一個(gè)總抗氧化能力。待測(cè)樣品溶液制備同1.3.1 項(xiàng)。測(cè)定步驟按照試劑盒說明書所列操作流程進(jìn)行。

1.3.4 DPPH 自由基清除能力測(cè)定

通過DPPH 自由基清除率表現(xiàn)待測(cè)樣品的抗氧化活性［4］。待測(cè)樣品溶液制備同1.3.1 項(xiàng)。分別取1 mL 待測(cè)樣品溶液與2 mL 濃度為0.1 mmol/L 的DPPH 乙醇溶液混勻，在避光處靜置30 min 測(cè)定吸光度A 樣品，同時(shí)測(cè)定1 mL 溶劑(水)與2 mL 濃度為0.1 mmol/L 的DPPH 乙醇溶液混勻后的吸光度A 對(duì)照，以及1 mL 待測(cè)樣品溶液與2 mL 無水乙醇混勻后的吸光度A 空白。自由基清除率按(1)式計(jì)算:

1.3.5 超氧陰離子自由基清除活性測(cè)定

由還原型輔酶Ⅰ-吩嗪硫酸甲酯—氯化硝基四氮唑藍(lán)體系(NADH-PMS-NBT)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，還原NBT 為藍(lán)色物質(zhì)，在波長(zhǎng)560nm 處有最大吸收值［5］。待測(cè)樣品溶液制備同1.3.1 項(xiàng)。1 號(hào)溶液配制:加入1 mL 150 μmol/L NBT 溶液、1 mL 468 μmol/L NADH 溶液、2 mL待測(cè)樣品溶液和1 mL 60 μmol/L PMS 溶液;2 號(hào)溶液配制:1 mL NBT 溶液、1 mL NADH 溶液、2 mL 待測(cè)樣品溶液和1 mL 磷酸鹽緩沖液;3 號(hào)溶液配制:1 mL NBT 溶液、1 mL NADH 溶液、2 mL 甲醇和1 mL PMS 溶液。溶液配制后置于常溫下反應(yīng)6 min，然后于560 nm測(cè)定其吸光值，1～3 號(hào)溶液的吸光度分別為A1、A2和A3。根據(jù)(2)式計(jì)算各樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除率:

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

每組試驗(yàn)做6 次平行，以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)表示。組間差異采用SPSS 16.0 進(jìn)行單因素分析(ANOVA)，確定差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 乙醇保持活性

乙醇在機(jī)體中一般經(jīng)過口腔、食管、胃腸黏膜等吸收到體內(nèi)各組織器官中，約5 min 后便會(huì)出現(xiàn)在血液中。通過解酒物質(zhì)包裹乙醇，減少或延緩機(jī)體對(duì)乙醇的吸收。本研究采用氣相色譜法測(cè)定各水提物處理后溶液的乙醇含量，計(jì)算樣品的乙醇保持率，由圖1 可知，10 種原料水提物都具有不同程度的乙醇保持活性。不同原料間的顯著性分析結(jié)果［以字母順序(a－i)表示活性高低］顯示青果水提物的乙醇保持率最高，其次是桑椹，再次是枳椇子。

圖1 不同原料水提物的乙醇保持率

2.2 總抗氧化力

乙醇會(huì)使肝臟產(chǎn)生大量自由基，為了降低自由基對(duì)機(jī)體所帶來的損傷，應(yīng)適當(dāng)?shù)匮a(bǔ)給機(jī)體外源性抗氧化劑或者給予能夠促進(jìn)機(jī)體內(nèi)源性抗氧化劑恢復(fù)到一定水平的藥物。對(duì)所選用的10 種原料水提物進(jìn)行總抗氧化能力測(cè)定，由圖2 知，青果水提物的總抗氧化力最高，其次是枳椇子和菊花。

圖2 不同原料水提物的總抗氧化力

2.3 DPPH 自由基清除活性

DPPH 在有機(jī)溶液中是一種穩(wěn)定的自由基，由于其氮原子上有一個(gè)孤電子，反應(yīng)系統(tǒng)中的自由基清除劑能與DPPH 的孤電子配對(duì)，使得反應(yīng)液的顏色變淺，以變化程度來評(píng)價(jià)抗氧化能力的強(qiáng)弱。由圖3 可知，枳椇子水提物清除DPPH 自由基的活性最強(qiáng)，其次是菊花，再次是青果。

圖3 不同原料水提物的DPPH 自由基清除活性

2.4 超氧陰離子自由基清除活性

乙醇代謝過程中會(huì)產(chǎn)生大量的超氧陰離子自由基，特別是在機(jī)體氧化還原的平衡系統(tǒng)遭到破壞時(shí)，超氧陰離子自由基的濃度急劇升高，超氧陰離子自由基可以在一定條件下轉(zhuǎn)化為其他活性較強(qiáng)的含氧自由基。由此說明，若某物質(zhì)具有較強(qiáng)的清除此自由基活性便能有效地抑制其他含氧自由基的生成，在一定程度上保護(hù)機(jī)體免受氧自由基的損傷。由圖4 可知，菊花水提物清除超氧陰離子自由基的活性最高，其次是枳椇子、青果和青皮。

圖4 不同原料水提物的超氧陰離子自由基清除活性

從以上結(jié)果發(fā)現(xiàn)，青果、枳椇子、桑椹等水提物都具有較高的抗氧化活性，從乙醇代謝機(jī)制上看，這些物質(zhì)理論上能夠在一定程度上減輕機(jī)體氧化損傷的程度。在已有研究中，于修燭等［6］發(fā)現(xiàn)，枳椇子乙醇提取物具有較強(qiáng)抑制脂質(zhì)氧化的能力。姚瑞祺［7］發(fā)現(xiàn)，不同溶劑提取的青果多酚在DPPH 自由基清除試驗(yàn)、總抗氧化能力測(cè)試中表現(xiàn)優(yōu)于BHT 和TBHQ。Isabelle 等［8］闡明桑椹所含多酚、花色苷、原花青素的含量與其過氧化氫自由基的清除能力存在相關(guān)性。顧瑋蕾等［9］研究發(fā)現(xiàn)，桑椹中主要的抗氧化有效成分來自于水溶性成分。醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為枳椇子具有清熱利尿，止咳除痰，解酒毒功效;桑椹能解除酒精中毒、保護(hù)肝臟和腎臟等;青果可防醉、抗菌、抗病毒和解除毒素。綜合乙醇保持率和抗氧化活性結(jié)果，綜合考慮其解酒功效、口感、色澤、原料成本等因素，選擇桑椹、枳椇子和青果水提物組成配方，并進(jìn)一步優(yōu)化配比。

3 結(jié)論

為探索解酒配方，通過測(cè)定10 種植物原料水提物的乙醇保持率、總抗氧化力、DPPH 自由基清除率和超氧陰離子自由基清除率，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，篩選出桑椹、枳椇子和青果水提物作為配方組分。以乙醇保持率與超氧陰離子自由基清除率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過響應(yīng)面法優(yōu)化3 種組分的最佳配比為4.43 g:3.47 g:4.71 g (桑椹:枳椇子:青果)。經(jīng)過急性毒性試驗(yàn)、防醉試驗(yàn)、解酒試驗(yàn)、攀附試驗(yàn)證實(shí)此配方對(duì)小鼠無不良反應(yīng)，而且能增長(zhǎng)醉酒小鼠的睡眠潛伏期，縮短醉酒小鼠的睡眠時(shí)間，并增長(zhǎng)小鼠的攀附時(shí)間，起到一定的防醉解酒效果。桑椹、枳椇子和青果都是藥食同源植物，說明此配方可開發(fā)為防醉解酒保健食品，此配方對(duì)機(jī)體的影響和在體內(nèi)的作用機(jī)理仍需進(jìn)一步研究。

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