葡萄糖和鹽度對鹵蟲生長、養(yǎng)殖系統(tǒng)生物絮團形成及其微生物多樣性的影響*

王 嬌 馬灌楠 鄧元告 隋麗英

(天津科技大學 天津市海洋資源與化學重點實驗室 天津 300456)

生物絮團(Biofloc)是以異養(yǎng)微生物為主體, 經(jīng)生物絮凝作用結(jié)合水體中顆粒有機物、原生動物和藻類等形成的絮狀物(Avnimelech, 1999; Hargreaves,2006)。生物絮團技術(shù)(Biofloc techniques, BFT)通過調(diào)節(jié)攪拌強度、溶解氧、pH、溫度、有機碳和有機物負荷率等, 促進養(yǎng)殖體系中排泄物及殘餌吸收和轉(zhuǎn)化, 減少水中氮含量, 并將其轉(zhuǎn)化為微生物蛋白供養(yǎng)殖動物攝食, 使餌料得以循環(huán)利用(De Schryver et al, 2008; Crab et al, 2012)。在養(yǎng)殖水體中添加碳源, 通過有效提高水中碳氮比, 使其中以自養(yǎng)細菌為主的微生物區(qū)系轉(zhuǎn)變?yōu)橐援愷B(yǎng)細菌為主的區(qū)系。而異養(yǎng)細菌數(shù)量的提高, 有利于生物絮團的形成(Avnimelech, 1999; Wilén et al, 2003; Schneider et al,2005)。研究表明, 采用生物絮團技術(shù)可顯著促進雜交羅非魚(Avnimelech, 2006; Crab et al, 2009)、日本囊對蝦Marsupenaeus japonicus(Zhao et al, 2012)、凡納濱對蝦Litopenaeus vannamei(Burford et al, 2003; Hari et al, 2004, 2006; Schveitzer et al, 2013)和巴西褐對蝦Farfantepenaeus brasiliensis(Emerenciano et al, 2012)等水產(chǎn)動物的生長, 提高產(chǎn)量, 減少飼料投入。

鹵蟲(Artemia)廣泛分布于內(nèi)陸鹽湖和日曬鹽場蒸發(fā)池中, 是鹽田生態(tài)系統(tǒng)中的主要消費者和生態(tài)調(diào)節(jié)者, 也是水產(chǎn)苗種極佳的鮮活餌料(Sorgeloos et al, 2001)。作為非選擇性濾食性動物, 鹵蟲一般攝食小于50μm的食物顆粒(D’Agostino, 1980)。與海水和淡水養(yǎng)殖環(huán)境相比, 針對高鹽環(huán)境下生物絮團的形成及其在鹵蟲養(yǎng)殖中應用的相關(guān)研究較少。Ronald等(2013)和 Sui等(2013)通過向養(yǎng)殖水體中添加木薯粉、雞糞和米糠等, 顯著提高了鹵蟲成蟲和鹵蟲卵產(chǎn)量。Toi等(2013)通過向養(yǎng)殖水體中添加蔗糖和淀粉,顯著降低了單胞藻投喂量, 同位素標記結(jié)果顯示, 添加的碳源可被鹵蟲利用。

本研究在高鹽環(huán)境下, 研究碳源添加和不同鹽度對鹵蟲生長、鹵水中生物絮團形成、水質(zhì)及其細菌多樣性的影響, 為生物絮團技術(shù)在高鹽養(yǎng)殖環(huán)境下水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用提供理論依據(jù), 為其在鹵蟲養(yǎng)殖和鹽田生態(tài)調(diào)控中的應用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

養(yǎng)殖用水取自天津漢沽鹽場結(jié)晶池, 鹵水鹽度250, 經(jīng)過消毒和過濾后, 用自來水稀釋到所需鹽度。實驗所用鹵蟲品系為Artemia franciscana (VinhChau strain)。鹵蟲卵于鹽度30海水中孵化20h, 孵化溫度(27±0.5)°C, 光照強度 1000lx, 適量充氣。收集初孵鹵蟲無節(jié)幼體, 在鹽度50和(24±0.5)°C條件下暫養(yǎng)5d,適量充氣。每天早晚投喂適量濃縮杜氏藻 Dunaliella viridis。大量培養(yǎng)的D. viridis采用高速冷凍離心機濃縮(6000r/min, 4°C, 10min, Beckman), 濃縮藻液在4°C下保存。

1.2 實驗設計

本研究以葡萄糖為碳源。考慮到鹵蟲在鹽田中的適宜生長鹽度, 實驗組鹽度設定為50、100和150, 分別表示為“50+Glu”、“100+Glu”和“150+Glu”, 對照組(Control)不添加葡萄糖且鹽度為50, 每組三個平行。單位養(yǎng)殖體系為 1L錐形塑料瓶, 鹵蟲起始密度約為1200ind/L。實驗養(yǎng)殖條件與鹵蟲暫養(yǎng)條件相同, 實驗周期為20天。每天向養(yǎng)殖水體中補充一次蒸餾水, 以維持鹽度穩(wěn)定。

D. viridis投喂量及葡萄糖添加量見表1, 碳氮比(C/N)設定為20。D. viridis投喂量為Vanhaecke等(1984)建議的最適投喂量的60%, 葡萄糖添加量參考Avnimelech(1999)提出的計算方法, 即

式中, ΔCH為系統(tǒng)中碳水化合物的添加量; Feed為飼料投喂量; Nfeed為飼料中氮含量(40%); Nexcretion為養(yǎng)殖動物排氮量占飼料含氮量的比例(一般為50%); 0.05為常數(shù)。

1.3 指標測定

養(yǎng)殖過程中每天測定水體pH (Mettler Toledo FE20)和溶解氧(YSI DO200)。實驗結(jié)束時用100目濾網(wǎng)收集鹵蟲, 除去雜質(zhì), 用蒸餾水洗凈蟲體表面鹽分, 用濾紙吸去外部水分, 稱取鹵蟲總生物量。將鹵蟲冷凍干燥, 用于生化組分的測定。將收獲鹵蟲后的養(yǎng)殖水體沉降4h, 傾掉上清, 將沉積物轉(zhuǎn)入Imhoff管中, 再沉降 24h, 測定生物絮團體積(Biofloc volume, BFV)(Avnimelech, 2012)。從上清中取水50mL, 分別采用重氮-偶氮法、鋅鎘還原法、次溴酸鈉氧化法和過硫酸鉀氧化法測定水體中亞硝酸鹽、硝酸鹽、銨鹽和總氮濃度(GB/T12763.4-200X)。

鹵蟲總蛋白采用凱氏定氮法測定(GB 5009.5-2010)。鹵蟲脂肪酸的測定采用內(nèi)標法, 內(nèi)標脂肪酸為C2:2 n-6?？傊境樘岷椭舅峒柞セ捎肔epage等(1984)提出的方法, 甲酯化脂肪酸(FAME)組成和含量用氣相色譜測定(Shimatzu)。色譜條件: 毛細柱(CBP20-25-50, 50m×0.25mm×0.2μm), 載氣為高純氮氣, 程序升溫初始180°C, 以6°C/min速率升至240°C保持 20min; 氣化室溫度 280°C; FID 檢測器, 溫度280°C; 柱壓 182.2kPa; 分配比率 20∶1。

表1 單胞藻Dunaliella viridis投喂量及葡萄糖添加量Tab.1 The feeding schedules of Dunaliella viridis and the amount of glucose addition

1.4 變性梯度凝膠電泳(DGGE)

實驗結(jié)束后在無菌條件下采集生物絮團, 置于-20°C保存。取500μL絮團樣本, 8000r離心10min, 用DNA提取試劑盒(Promega)提取基因組DNA, 對細菌V3區(qū)域進行16S rDNA特異性擴增(Yu et al, 2004)。PCR擴增引物338F-GC: 5′-CGCCCGCCGCGCCCCG CGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCGCCTACGGGAG GCAGCAG-3′, 534R: 5′-ATTACCGCGGCTGCTGG-3′(Muyzer et al, 1993)。PCR 反應體系為: 10μL 10× PCR緩沖液 (不含 MgCl2), 1.5mmol/L MgCl2, 200μmol/L dNTP, 2.5U Taq DNA聚合酶(Promega), 雙向引物0.5μmol/L, 400ng/μL 牛血清蛋白(Promega), 100ng DNA模板, 加PCR水(Sigma)至50μL。

PCR擴增程序為: 94°C預變性5min, 變性1min,53°C退火 1min, 72°C 延伸1min, 30個循環(huán), 72°C 延伸10min。使用Bio-Rad DCodeTM系統(tǒng)(Hercules)對擴增產(chǎn)物進行變性梯度凝膠電泳(DGGE) (Boon et al,2002), 將 PCR產(chǎn)物上樣在變性梯度 45%—60%的變性凝膠孔內(nèi), 變性凝膠濃度為8%(w/v)。電泳16h, 溫度60°C, 電壓38V。電泳結(jié)束后用1× Gel Red核酸染液(1:10000稀釋) (FMC)染色 20min。采用 Bio-Rad ChemiDoc MP成像系統(tǒng)(Hercules)獲得DGGE圖譜。

1.5 條帶回收與序列比對

從DGGE 凝膠上切下差異條帶于無菌PCR水中搗碎, -20°C過夜。使用無GC夾的338F和518R擴增引物對上清液進行16S rDNA-PCR擴增。PCR 擴增程序為94°C預變性5min, 94°C變性1min, 53°C退火1min,72°C延伸1min, 25個循環(huán), 72°C延伸10min (Boon et al,2002)。用1.5% 瓊脂糖凝膠以DNA marker DL-2000為標準觀察擴增片段所在位置。PCR產(chǎn)物若被確認為在DGGE凝膠的相同位置, 則進行測序(華大基因公司),測序結(jié)果參照GenBank 進行序列BLAST比對。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計分析前, 采用 Levene法進行方差齊性檢驗, 當不滿足齊性方差時, 對數(shù)據(jù)進行反正弦或平方根處理。采用單因子方差分析(One way ANOVA)對實驗結(jié)果進行分析, 用Tukey法進行多重比較(P＜0.05)。

DGGE條帶多樣性用加權(quán)豐富度指數(shù)(Rangeweighted richness, Rr)描述: Rr=(N2×Dg)

式中, N為DGGE圖譜中總條帶數(shù), Dg為圖譜第一條與最后一個條帶之間的變性梯度(Marzorati et al, 2008)。

表2 添加葡萄糖和鹽度50, 100和150條件下鹵蟲粗蛋白含量和脂肪酸組成Tab.2 Protein content and fatty acid profile of Artemia cultured with glucose enrichment at salinities 50, 100, and 150

2 結(jié)果

2.1 添加葡萄糖和不同鹽度對鹵蟲生物量的影響

添加葡萄糖對鹵蟲總生物量具有顯著促進作用(圖1), 50+Glu組鹵蟲生物量顯著高于對照組, 分別為682.5mg和228.4mg (P＜0.05)。隨鹽度的升高, 鹵蟲生物量顯著減少, 50+Glu組鹵蟲生物量顯著高于100+Glu和150+Glu, 分別為297.9mg和271.5mg (P＜0.05)。

圖1 添加葡萄糖和鹽度50, 100和150條件下鹵蟲總生物量Fig.1 Total biomass of Artemia cultured with glucose enrichment at salinities 50, 100, and 150

2.2 添加葡萄糖和不同鹽度對鹵蟲粗蛋白含量和脂肪酸組成的影響

添加葡萄糖和養(yǎng)殖鹽度對鹵蟲成蟲粗蛋白含量無顯著影響(P＞0.05, 表2)。除C16:0含量明顯高于對照組(P＜0.05)外, 添加葡萄糖對其它飽和及不飽和脂肪酸含量無顯著影響(P＞0.05)。除 100+Glu組 C22:0顯著高于其它組別外, 鹽度變化對鹵蟲脂肪酸含量均無顯著影響(P＞0.05)。

2.3 添加葡萄糖和不同鹽度對養(yǎng)殖系統(tǒng)中生物絮團體積的影響

添加葡萄糖對生物絮團形成有明顯促進作用(圖2), 50+Glu組絮團體積(BFV)顯著高于對照組, 分別為6.3mL和4.8mL (P＜0.05)。隨鹽度升高, BFV無顯著差異, 100+Glu組為6.7mL, 150+Glu組為7.0mL(P＞0.05)。

圖2 添加葡萄糖和鹽度50, 100和150條件下生物絮團體積Fig.2 Biofloc volume in the culture medium enriched with glucose at salinities 50, 100 and 150

2.4 添加葡萄糖和不同鹽度對養(yǎng)殖系統(tǒng)中水質(zhì)的影響

養(yǎng)殖過程中水體pH穩(wěn)定在7.86—8.03之間, 溶解氧穩(wěn)定在6.6—7.1mg/L之間。添加葡萄糖明顯降低水中亞硝酸鹽濃度(圖3a), 50+Glu組亞硝酸鹽濃度為12.47μmol/L, 明顯低于對照組 23.66μmol/L (P＜0.05)。隨鹽度升高亞硝酸鹽濃度升高, 50+Glu組最低,100+Glu和150+Glu組分別為20.02μmol/L和25.62μmol/L,但差異不顯著(P＞0.05)。

添加葡萄糖明顯降低水中硝酸鹽濃度(圖 3b),50+Glu組硝酸鹽濃度為87.47μmol/L, 明顯低于對照組117.59μmol/L (P＜0.05)。硝酸鹽濃度隨著鹽度升高有降低趨勢, 50+Glu最高, 100+Glu和150+Glu組分別為 77.42μmol/L 和 67.97μmol/L, 但差異不顯著(P＞0.05)。

添加葡萄糖降低水中銨鹽濃度(圖3c), 50+Glu組銨鹽濃度為32.72μmol/L, 低于對照組38.46μmol/L。銨鹽濃度隨鹽度升高而降低, 50+Glu組銨鹽濃度最高, 100+Glu和 150+Glu組分別為 17.14μmol/L和14.58μmol/L, 但差異不顯著(P＞0.05)。

添加葡萄糖明顯降低水中總氮濃度(圖 3d), 50+Glu組總氮濃度為 232.26μmol/L, 明顯低于對照組629.89μmol/L (P＜0.05)?？偟獫舛入S著鹽度升高而升高, 50+Glu最低, 100+Glu和 150+Glu組分別為313.55μmol/L 和 412.85μmol/L, 差異顯著(P＜0.05)。

圖3 添加葡萄糖和鹽度50, 100和150條件下水體中亞硝酸鹽(圖3a)、硝酸鹽(圖3b)、銨鹽(圖3c)及總氮濃度(圖3d)Fig.3 Concentrations of nitrite (a), nitrate (b), ammonium (c), and total nitrogen (d) in the culture volume enriched with glucose at salinities 50, 100, and 150

2.5 添加葡萄糖和不同鹽度對生物絮團細菌多樣性的影響

生物絮團基因組16S rDNA PCR-DGGE條帶聚類分析表明, 同一實驗組別平行樣分別聚在一起, 相似度＞85%。不同實驗組別生物絮團的細菌組成分為兩大類別, 分別是較高鹽度(100和 150)與較低鹽度(50)的養(yǎng)殖體系, 相似性僅為42%(見圖4)。其中鹽度100與150的養(yǎng)殖體系相似性為69%, 鹽度50養(yǎng)殖體系中對照組與添加葡萄糖組的相似性為60%。說明葡萄糖添加和鹽度對生物絮團微生物區(qū)系均有影響,但鹽度的影響較為顯著。

圖4 添加葡萄糖和鹽度50, 100和150條件下基因組16S rDNA PCR-DGGE條帶聚類分析Fig.4 16S rRNA PCR-DGGE clustering analysis on bioflocs with glucose enrichment at salinities 50, 100, and 150

圖5 DGGE凝膠割膠回收條帶Fig.5 Bands recovered from the DGGE gels

表3 DGGE 凝膠割膠回收條帶16S rDNA-V3序列與GenBank中最相近菌種的序列相似性比對Tab.3 Similarity of 16S rDNA-V3 sequence recovered from the respective bands in DGGE gels to the closest relatives in GenBank database

DGGE目的條帶基因片段的切割和序列比對結(jié)果見圖5和表3。BLAST結(jié)果顯示, 對照組的特異性條帶較多。所有實驗組別中 γ-變形菌綱細菌(γ-proteobacterium)為優(yōu)勢菌群, 條帶 1、6 和 10 均為γ-proteobacterium, 相似性為 97%—99%(Liu et al,2010); 條帶5和8為海洋γ-proteobacterium, 相似性分別為96%和95% (Ben-Dov et al, 2009), 存在于較高鹽度實驗組中。條帶12為α-變形菌綱(α-proteobacterium),相似性為99% (Harwati et al, 2007)。條帶2、3、4、7、9和11分別為海棲桿菌屬Maritalea, 根瘤菌屬Rhizobiales,海桿菌屬 Marinobacter, 冷彎菌屬 Psychroflexus, 海岸單胞菌屬 Litorimonas和 Maribacter。條帶13為不能培養(yǎng)的細菌克隆, 存在于酸性泥炭地中(Chen et al, 2008)。

根據(jù)DGGE圖譜計算的細菌菌群豐富度指數(shù)(Rr)見圖 6。不添加碳源對照組 Rr最高為 15.38, 添加葡萄糖的實驗組中隨鹽度升高而顯著降低, 分別為10.10, 7.09 和 2.04(P＜0.05)。

圖6 添加葡萄糖和鹽度50, 100和150條件下生物絮團中細菌菌群的加權(quán)豐富度指數(shù)(P＜0.05)Fig.6 Range-weighted richness of bioflocs with glucose enrichment at salinities 50, 100, and 150 (P＜0.05)

3 討論

3.1 碳源對生物絮團的形成和鹵蟲生長的影響

生物絮團對水體中的氮轉(zhuǎn)化和利用起到至關(guān)重要的作用。在碳氮平衡的條件下, 源自養(yǎng)殖動物排泄物及殘餌的氨氮的轉(zhuǎn)化可通過藻類的光能自養(yǎng)、自養(yǎng)微生物的硝化作用和異養(yǎng)微生物的同化作用等途徑實現(xiàn)(Hargreaves, 2006)。碳源過剩時(C/N＞10), 異養(yǎng)細菌對氨氮的固定能力是自養(yǎng)微生物的 10倍, 因此添加碳水化合物或直接投放高碳飼料可促進異養(yǎng)細菌的生長, 將水體中更多的銨氮轉(zhuǎn)化為微生物蛋白,大大降低水中氨氮的濃度(Avnimelech, 1999; Wilén et al, 2003; Schneider et al, 2005)。碳源種類在很大程度上決定生物絮團的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性(Oehmen et al, 2005),同時碳源的成本也決定著生物絮團的利用價值。實驗室研究常用乙酸、甘油、葡萄糖、蔗糖、淀粉等作為碳源(Schneider et al, 2005; Crab et al, 2009; 鄧應能等, 2012), 而糖漿、木薯粉、麥麩、玉米粉和高粱粉等廉價農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品是規(guī)?；B(yǎng)殖的首選(Crab et al,2009; Emerenciano et al, 2012)。本研究中向鹵蟲養(yǎng)殖系統(tǒng)中添加葡萄糖, 與對照組相比, 顯著提高了鹵蟲生物量和BFV, 降低了水中無機氮和總氮水平, 說明添加葡萄糖有利于水中異養(yǎng)微生物大量繁殖, 將氨氮轉(zhuǎn)化為微生物蛋白, 為鹵蟲提供充足的食物, 促進了鹵蟲的生長。該結(jié)果與前人針對羅非魚(Crab et al,2009), 凡納濱對蝦(Xu et al, 2012)和日本囊對蝦(趙培, 2011)的研究結(jié)果一致。

3.2 鹽度對生物絮團形成和鹵蟲生長的影響

鹽度作為主要環(huán)境生態(tài)因子對水生生物的生長有重要影響。高鹽環(huán)境中藻類數(shù)量及種類減少, 同時鹵蟲需要消耗能量泵出細胞中的鈉離子以保持體內(nèi)恒定的滲透壓, 不利于鹵蟲的生長和存活(Triantaphyllidis et al, 1995; 王婧等, 2012; 隋麗英等, 2013)。微生物在高鹽環(huán)境中為平衡自身滲透壓消耗大量能量, 新陳代謝速度降低, 生長緩慢, 對底物利用率降低(崔有為等, 2004; Crump et al, 2004)。本研究中隨鹽度升高, 鹵蟲總生物量減少, 主要與鹽度對鹵蟲生長和存活的脅迫作用有關(guān)。另外鹽度升高使異養(yǎng)細菌生長緩慢, 對鹵蟲排泄物的分解和利用降低; 同時高鹽條件下鹵蟲攝食量降低, 致使BFV增加。

鹽度對水中氮濃度的影響與養(yǎng)殖動物的代謝及水中異養(yǎng)細菌有關(guān)。鹽度升高, 鹵蟲生長緩慢, 新陳代謝下降, 水中無機氮水平較低。本研究中鹽度升高,總氮濃度升高, 但對無機氮水平的影響無明顯差異,可能由于異養(yǎng)細菌利用無機氮與鹵蟲排泄無機氮水平的能力相近, 但機理需作進一步研究。

黃凱等(2004)指出, 隨著鹽度升高, 凡納濱對蝦要失去一部分水分來平衡體內(nèi)滲透壓, 蝦體蛋白質(zhì)明顯增加。而作為細胞膜磷脂雙分子層的主要組成部分, 多不飽和脂肪酸(PUFA)和高不飽和脂肪酸(HUFA)的增加, 有利于魚類和對蝦細胞膜的柔韌性和滲透壓調(diào)節(jié)(Watanabe, 1993; Palacio et al, 2004)。本研究中不同鹽度下, 鹵蟲蟲體粗蛋白含量、PUFA和HUFA組成變化不明顯, 可能與鹵蟲作為廣鹽性甲殼動物本身具有較好的滲透壓調(diào)節(jié)能力有關(guān)。細菌中缺乏PUFA和HUFA, 16:1 n-7和18:1 n-7為細菌主要的脂肪酸成分(Intriago et al, 1993)。本研究中雖然沒有顯著差異, 但添加碳源和較低鹽度條件下培養(yǎng)的鹵蟲中兩種脂肪酸的含量均比對照和“Glu+150”組有所提高, 說明鹵蟲攝食和利用了生物絮團中的細菌(Toi et al, 2013)。

3.3 碳源和鹽度對生物絮團細菌多樣性的影響

Marzorati等(2008)指出, 加權(quán)豐富度指數(shù) Rr反映環(huán)境中菌群豐富度和環(huán)境的承載力(Carrying capacity)。Rr＜10表明菌群豐富度低, 環(huán)境承載力差, 如污染的土壤或深海熱泉生態(tài)系統(tǒng); 10＜Rr＜30表明菌群豐富度和環(huán)境承載力處于中等水平; Rr＞30則表明菌群豐富度高, 環(huán)境承載力大, 如活性污泥或種植土壤生態(tài)系統(tǒng)。本研究中碳源和鹽度對絮團微生物多樣性均有顯著影響, Rr隨著碳源的添加和鹽度的升高而降低, 葡萄糖的添加有利于利用這種碳源的細菌生長, 而且較高鹽度進對耐鹽和嗜鹽細菌的生長有利, 因此菌群豐富度逐漸降低, 系統(tǒng)承載力減弱。

部分特異性DGGE條帶割膠回收測序結(jié)果表明,變形菌門細菌γ-proteobacterium在各實驗組中均為優(yōu)勢菌群。Zhao等(2012)和夏耘等(2012)針對日本囊對蝦和草魚的研究均發(fā)現(xiàn)變形菌門細菌在生物絮團中占優(yōu)勢, 但ɑ-proteobacterium高于γ-proteobacterium。變形菌門細菌的主要功能是清除污水中的有機物(Wanger et al, 1995; Witzig et al, 2002)。本研究中γ-proteobacterium 占優(yōu)勢, 表明該條件下形成的生物絮團對鹵蟲養(yǎng)殖水體具有有效的調(diào)節(jié)作用。

4 結(jié)語

綜上所述, 在零換水鹵蟲養(yǎng)殖系統(tǒng)中, 添加葡萄糖可顯著促進生物絮團的形成, 提高鹵蟲生物量, 減低水體中的氮濃度。鹽度升高, 鹵蟲生物量降低, 生物絮團體積顯著增加, 亞硝酸鹽和總氮水平升高。添加碳源和不同鹽度對鹵蟲的粗蛋白和脂肪酸含量無顯著影響。生物絮團中以γ-變形菌綱細菌為優(yōu)勢菌群,添加碳源和升高鹽度顯著降低細菌菌群的加權(quán)豐富度指數(shù)(Rr)。今后可針對不同碳源和采用異養(yǎng)細菌調(diào)控等方面, 深入研究高鹽條件下生物絮團的形成機制?？紤]到生產(chǎn)實際, 應進一步實驗農(nóng)業(yè)和食品工業(yè)的副產(chǎn)品等低成本碳源在鹵蟲養(yǎng)殖中的應用前景。

致謝本研究中生物絮團 DGGE分析在比利時根特大學Laboratory of Aquaculture & Artemia Reference Center進行, 得到Prof. Gilbert van Stappen, Prof. Peter Bossier, Dr. Peter de Schryver和 Dr. Yufeng Niu的大力支持, 天津農(nóng)學院、天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室王曉梅教授和天津科技大學王靜副教授在DGGE條件摸索和數(shù)據(jù)處理等方面提供幫助, 謹致謝忱。

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