HPLC法同時測定復方片劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量

張 寧，孫 進

（沈陽藥科大學 藥學院，遼寧 沈陽 110016）

HPLC法同時測定復方片劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量

張 寧，孫 進*

（沈陽藥科大學 藥學院，遼寧 沈陽 110016）

目的建立HPLC法同時測定復方片劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量。方法采用Thermo C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-15 mmol·L-1磷酸二氫鉀（pH=2.5）（體積比48:52），流速為1.0 mL·min-1，紫外檢測波長為237 nm，柱溫為30 ℃。結果奧美沙坦酯質量濃度在0.01～0.5 g·L-1內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.999 8），平均回收率為 99.71%；苯磺酸氨氯地平質量濃度在 5.000～125.0 mg·L-1內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.999 9），平均回收率為 100.06%。結論本方法可用于同時測定復方片劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量。

藥劑學；含量測定；高效液相色譜法；奧美沙坦酯；苯磺酸氨氯地平

奧美沙坦酯（olmesartan medoxomil，OLM，化學結構式見圖1）是選擇性血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，它可以選擇性阻斷血管緊張素Ⅱ與血管平滑肌ATⅠ受體結合，從而阻斷血管緊張素Ⅱ收縮血管的作用，進而起到降低血壓的作用[1-2]。苯磺酸氨氯地平（amlodipine besylate，AMB，化學結構式見圖 2）屬于二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，它可以選擇性阻斷鈣離子通道，松弛阻力血管平滑肌，降低外周血管阻力，起到降壓作用[3-4]。目前國外已有復方奧美沙坦酯苯磺酸氨氯地平片（商品名為Azor，生產商為 Daiichi Sankyo）上市，用于高血壓的治療。有文獻報道[5-7]，奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平聯合用藥可有效治療高血壓，并較其他類型的藥物組合能更顯著降低心血管疾病的發(fā)生率。

Fig. 1 The structure of olmesartan medoxomil (1) and amlodipine besylate (2)圖 1 奧美沙坦酯（1）與苯磺酸氨氯地平（2）的化學結構式

文獻報道采用分光光度法測定制劑中奧美沙坦酯和苯磺酸氨氯地平的含量[8-9]，但分光光度法中波長的選擇對測定結果的準確度影響很大，而且計算過程較繁瑣。文獻報道采用HPLC法同時測定復方制劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量[10-13]，但所采用的方法均有不足之處，如：兩個藥物的保留時間較長或是在保留時間短的條件下使用較為復雜的流動相或是梯度洗脫。本文作者采用高效液相色譜法，優(yōu)化流動相使奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平保留時間分別為4.4 min和5.3 min，保留時間較短且流動相系統(tǒng)簡單，并對該含量測定方法進行方法學驗證。經驗證本法簡單、快速、準確、穩(wěn)定性好、適用性強，為其質量控制提供了試驗依據。

1 儀器與材料

高效液相色譜儀（配有2489紫外檢測器、2695輸液泵、Empower 3色譜工作站，美國Waters公司），ALC-11014電子天平（德國賽多利斯科學儀器有限公司）。

奧美沙坦酯對照品（含量質量分數為99.8%，中國藥品生物制品檢定所，批號100864-200601），苯磺酸氨氯地平對照品（含量質量分數為99.3%，中國藥品生物制品檢定所，批號100374-201204），復方奧美沙坦酯苯磺酸氨氯地平片劑樣品（自制，規(guī)格：每片含奧美沙坦酯40 mg、苯磺酸氨氯地平5 mg，批號：20140320、20140321、20140323）。乙腈（色譜純，天津康科德科技有限公司），磷酸二氫鉀（汕頭西隴化工廠有限公司），其他試劑（分析純，市售），純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Thermo C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-15 mmol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（pH=2.5）（體積比為48:52）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：237 nm；柱溫：30 ℃；理論塔板數按奧美沙坦酯峰計算大于3 000，分離度大于1.5。

2.2 溶液的配制

對照溶液：分別取奧美沙坦酯對照品約20 mg，苯磺酸氨氯地平對照品約2.5 mg，精密稱定。置于100 mL量瓶中，加入流動相溶解并稀釋制成奧美沙坦酯質量濃度為200 mg·L-1、苯磺酸氨氯地平質量濃度為25 mg·L-1的混合對照溶液。

供試溶液：取樣品10片，研細，取適量（約相當于奧美沙坦酯20 mg，苯磺酸氨氯地平2.5 mg），精密稱定。置100 mL量瓶中，加流動相適量，超聲15 min，放冷，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 專屬性考察

按處方比例稱取空白輔料，置100 mL量瓶中，加入適量流動相，超聲15 min，放冷后稀釋至刻度，搖勻過濾，作為空白輔料溶液。稱取奧美沙坦酯對照品及苯磺酸氨氯地平對照品適量，用流動相制成奧美沙坦酯質量濃度為200.0 mg·L-1和苯磺酸氨氯地平質量濃度為25 mg·L-1混合對照溶液，作為標準溶液。取上述空白輔料溶液和標準溶液，按照“2.1”條色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖2。由圖2可知，輔料不干擾奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的測定。

Fig. 2 HPLC chromatograms of blank excipents (A) and standard solution (B)圖 2 空白輔料溶液（A）與對照溶液(B)的高效液相色譜圖

2.4 線性關系考察

稱取奧美沙坦酯對照品約10 mg，精密稱定。置于10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為1 g·L-1奧美沙坦酯對照儲備液；稱取苯磺酸氨氯地平對照品約10 mg，精密稱定。置于10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為1 g·L-1苯磺酸氨氯地平對照儲備液。精密量取奧美沙坦酯對照儲備液0.1、0.5、1、2、3、4、5 mL各置編號為1、2、3、4、5、6、7的10 mL量瓶中，再精密量取苯磺酸氨氯地平對照儲備液0.05、0.1、0.2、0.25、0.5、1.0、1.25 mL依次加入上述編號為1～7的各量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，制得奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的系列混合標準溶液，按照“2.1”條色譜條件進樣，記錄色譜圖。以峰面積（A）對質量濃度（ρ）進行線性回歸，分別得奧美沙坦酯回歸方程：A=2.255×104ρ-2.225×104，r=0.999 8；苯磺酸氨氯地平回歸方程：A=1.534×104ρ+1.261×104，r=0.999 9。結果表明，奧美沙坦酯和苯磺酸氨氯地平質量濃度分別在0.01～0.5 g·L-1和5.000～125.0 mg·L-1內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

分別取“2.4”條下編號分別為1、4、7號的低、中、高三個質量濃度混合標準溶液，于日內每隔2 h測定一次，連續(xù)3次，另于每日進樣測定1次（當天配制），連續(xù)3次，記錄色譜圖。通過日間精密度與日內精密度的考察，各RSD值均在限度以內，表明方法精密度良好，結果見表1。

Table 1 Precision of the method（n=9）表 1 精密度試驗結果（n=9）

2.6 回收率試驗

精密稱取奧美沙坦酯對照品16.0、20.0、24.0 mg，分別置于100 mL量瓶中，再精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品2.0、2.5、3.0 mg，分別依次置于上述100 mL量瓶中。加入處方量混合空白輔料，用流動相制成一定質量濃度的溶液，搖勻，制成相當于含奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平質量分數80%、100%、120%的溶液，濾過，作為供試溶液；另精密稱取奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平對照品適量，用流動相溶解并制成每1 mL中約含奧美沙坦酯200 μg、苯磺酸氨氯地平25 μg的溶液，作為對照溶液，將上述溶液按照“2.1”條色譜條件進樣，記錄色譜圖，回收率試驗結果見表2。

Table 2 Recoveries of the assay（n=9）表 2 回收率試驗結果（n=9）

2.7 穩(wěn)定性試驗

按照“2.2”條方法制備供試溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8和10 h，按照“2.1”條色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果顯示，在不同時間點所測奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平峰面積的RSD分別為0.46%和0.83%，表明供試溶液室溫放置10 h內穩(wěn)定。

2.8 耐用性試驗

檢測方法的耐用性試驗是在改變一些試驗條件（包括水相pH、流速、流動相組成等）考察其檢測相同樣品的重復性。在流速、流動相組成等試驗條件不變的情況下，改變水相pH，水相pH分別為2.4、2.5和2.6。同理，改變流動相組成，有機相與水相的體積比分別為43:57、48:52和53:47。同理，改變流速，流速分別為0.9、1.0和1.1 mL·min-1，分別在不同條件下檢測相同樣品的重復性。

試驗結果表明該方法在適當改變檢測條件時重復性良好，方法耐用性良好，結果見表 3。

Table 3 Robustness test of the method表 3 方法耐用性試驗結果

2.9 樣品含量測定

按照“2.2”條方法制備對照溶液及3批樣品的供試溶液，進樣，記錄色譜圖。按外標法計算樣品中兩主成分（以百分標示量計）含量，每批次樣品測定3次，結果見表4。

Table 4 Drug content of samples表 4 樣品含量測定結果

3 討論

a. 奧美沙坦酯最大吸收波長為250 nm，苯磺酸氨氯地平最大吸收波長為237 nm，考慮在該檢測條件下同時保證兩藥吸收較大，故選擇237 nm為檢測波長。

b. 奧美沙坦酯對流動相比例及水相pH較為敏感，隨著水相pH值的升高，兩個主藥的保留時間增大，且苯磺酸氨氯地平比奧美沙坦酯增大的程度要大，最后綜合考慮水相 pH值與流動相中水相與有機相的比例，選擇水相pH值為2.5，水相與有機相的體積比為52:48，該分析方法快速、準確。

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Simultaneous determination of the content in compound tablets of olmesartan medoximil and amlodipine besylate

ZHANG Ning, SUN Jin*
（School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China）

ObjectiveTo establish an high performance liquid chromatography (HPLC) method to simultaneously determinate the content of olmesartan medoxomil and amlodipine besylate in compound tablets.MethodThe separation was achieved on the Thermo C18column (150 mm×4.6 mm, 5 μm) using a mobile phase consisting of acetonitrile-15 mmol·L-1KH2PO4(V:V=48:52) at a flow rate of 1.0 mL·min-1and UV detection at 237 nm.ResultsThe linearity of the proposed method was investigated in the range of 0.01-0.5 g·L-1(r=0.999 8) for olmesartan medoxomil and 5.000-125.0 mg·L-1(r=0.999 9) for amlodipine besylate. The recoveries were 99.71% for olmesartan medoxomil and 100.06% for hydrochlorothiazide, respectively.ConclusionThis method can be used to simultaneously determinate the content of olmesartanmedoxomil and amlodipine besylate.

pharmaceutics; content determination; HPLC; olmesartan medoxomil; amlodipine besylate

R94

A

(本篇責任編輯：馬麗麗)

（2015）02-0056-07

10.14146/j.cnki.cjp.2015.02.003

2014-04-24

張寧（1988-），女（漢族），遼寧海城人，碩士研究生，E-mail zhangning-0613@163.com；*通訊作者：孫進（1975-），男（漢族），安徽金寨人，教授，博士，博士生導師，主要從事生物藥劑學與藥動學、基于納米技術的藥物傳遞系統(tǒng)的研究，Tel. 024-23986325，E-mail sunjin0529@aliyun.com 。