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    科爾沁區(qū)女性人乳頭瘤病毒感染基因型檢測

    2015-03-07 02:10:38包常華
    黑龍江科學(xué) 2015年3期
    關(guān)鍵詞:危型病毒感染亞型

    包常華,霍 萬

    (1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院,內(nèi)蒙古 通遼 028000;2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)研究所,內(nèi)蒙古 通遼 028000)

    宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤,且年新增患者數(shù)達(dá)50余萬例,其中80%新增病例發(fā)生在發(fā)展中國家[1]。人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān),已知的HPV基因型達(dá)100余種,多數(shù)感染者呈現(xiàn)短暫并可自行消失的感染[2],但少數(shù)型別尤其是高危型別的感染將導(dǎo)致癌前病變或?qū)m頸癌,是宮頸癌發(fā)生的主要病因[3],因此,HPV感染的基因型檢測已成為臨床篩查和預(yù)防宮頸癌的重要手段之一,本研究通過檢測科爾沁地區(qū)502例婦科門診女性感染的HPV基因型,以期對我區(qū)宣傳預(yù)防宮頸癌的發(fā)生提供參考。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    研究對象為502例來我研究所檢驗室進(jìn)行HPV分型檢測的女性。

    1.2 方法

    1.2.1 儀器與試劑

    DNA提取試劑盒、HPV21導(dǎo)流雜交試劑盒、核酸導(dǎo)流快速雜交儀(凱普生物技術(shù)有限公司)、高速離心機(jī)、PCR儀、水浴箱。

    1.2.2 采集標(biāo)本

    要求檢測對象于檢測前48h內(nèi)不要做陰道沖洗或陰道內(nèi)使用藥物,月經(jīng)正常的婦女,在月經(jīng)來潮后10~18d為最佳檢測時間,檢測人員以專用采樣刷采集宮頸脫落細(xì)胞,標(biāo)本于4℃保存,3d內(nèi)進(jìn)行檢測。

    1.2.3 提取DNA

    吸取500μl標(biāo)本于離心管中,14000rpm離心5min,棄上清液;加溶液Ⅰ400μl于沉淀中,沸水浴15min;再加入 400μl溶液Ⅱ,14000rpm 離心 5min,棄上清液;沉淀即為DNA,60μl無菌水溶解DNA,備用。

    1.2.4 目的片段擴(kuò)增

    預(yù)裝24μl反應(yīng)液的PCR管中加入1μl上述DNA溶液進(jìn)行擴(kuò)增,PCR反應(yīng)條件為95℃9min,40個循環(huán)(94℃ 20s,55℃ 30s,72℃ 30s),72℃ 5min。

    1.2.5 導(dǎo)流雜交

    450μl雜交液混合20μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物浸潤雜交膜,45℃雜交10min,開泵去除液體;加入封阻液500μl,25℃封阻 5min,開泵去除液體;加入 500μl顯色液,36℃條件下顯色5min后,開泵去除液體,觀察并記錄結(jié)果。

    2 結(jié)果

    2.1 HPV感染率

    502例檢測標(biāo)本中病毒感染陽性結(jié)果117例,總陽性率為23.3%(117/502)。病毒感染陽性患者中單一亞型感染率為66.67%(78/117)。多種亞型感染率為33.33%(39/117),其中雙亞型感染率為 25.64%(30/117),三亞型感染率7.69%(9/117),結(jié)果如圖1所示。

    圖1 HPV單亞型與多亞型感染率統(tǒng)計圖Fig.1 The infection rate of HPV single and multiple genotypes

    2.2 HPV基因型分布

    共檢測到18種HPV亞型,其中高危型別14種,所占比例為83.24%;低危型別4種,所占比例為16.76%。低危型別中的43、44型和高危型別中的45型未被檢出。感染者中以HPV16、31、6三種亞型多見,所占比例分別為20.95%、12.57%、8.38%,具體統(tǒng)計結(jié)果見表1。

    表1 科爾沁地區(qū)女性HPV感染亞型統(tǒng)計Tab.1 Distribution of HPV genotype of female patients in Horqin region

    3 討論

    宮頸癌是嚴(yán)重危害女性的一種惡性疾病,HPV的特定型別與宮頸癌的發(fā)生存在緊密聯(lián)系[4],采用基因芯片和導(dǎo)流雜交技術(shù),能及時準(zhǔn)確地進(jìn)行病毒感染的檢測與基因型診斷[5]。本研究結(jié)果表明,502例樣本中共檢出HPV感染117例,總感染率為23.3%,低于臺州(35.08%)、北京(57.10%)、陽泉(35.20%)及鄂州(30.93%)等地區(qū)[6]。本地區(qū)檢測出HPV感染的亞型處于前幾位的分別為 16、31、6、39、18,與上述地區(qū)相比也存在著區(qū)域性的差異:如臺州常見亞型為16、11、52,北京常見亞型為 16、58、52,鄂州常見亞型為 16、58、53。綜上結(jié)果表明,本地區(qū)HPV亞型即與其他地區(qū)的常見感染亞型基本類似,又存在著區(qū)域性差異。HPV是宮頸癌的重要致病因素[7],控制HPV病毒的感染有利于宮頸癌的預(yù)防[8],因此針對女性開展定期的HPV檢測是控制和預(yù)防宮頸癌的重要手段。通過本實驗了解科爾沁地區(qū)女性HPV的感染及基因型分布現(xiàn)狀,為在科爾沁地區(qū)開展預(yù)防宮頸癌的宣傳提供理論依據(jù)。

    [1] 邵軍輝,楊琳,龔逞英.新余地區(qū)2273例女性生殖道人乳頭瘤病毒感染狀況分析[J].甘南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2014,34(4):579-581.

    [2] Trottier H, Franco E. The epidemiology of genital human papillomavirus infection[J]. Vaccine,2006,24(Suppl)1:1-15.

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    [8] 馮陽春,張園,黃艷春.高危型人類乳頭狀瘤病毒負(fù)荷量對宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體的影響[J].中國病原生物學(xué)雜志,2012,7(1):5-7.

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