• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同溶劑的食用菌提取液對煙草病原菌的抑制作用*

    2015-03-07 07:20:10鐘永麗高現(xiàn)亮羅華元董石飛王偉丹王麗萍蘭建強
    中國食用菌 2015年1期
    關(guān)鍵詞:青枯病濾紙提取液

    鐘永麗,高現(xiàn)亮,羅華元,王 娜,董石飛,王偉丹,饒 智,王麗萍,蘭建強,**

    (1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院,云南 昆明 650201;2.紅云紅河煙草(集團)有限責(zé)任公司,云南 昆明 650231;3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院,云南 昆明 650201)

    不同溶劑的食用菌提取液對煙草病原菌的抑制作用*

    鐘永麗1,高現(xiàn)亮1,羅華元2,王 娜3,董石飛2,王偉丹1,饒 智2,王麗萍3,蘭建強1,3**

    (1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院,云南 昆明 650201;2.紅云紅河煙草(集團)有限責(zé)任公司,云南 昆明 650231;3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院,云南 昆明 650201)

    采用濾紙圓片法和試管二倍稀釋法研究了食用菌的不同溶劑提取液對煙草3種致病菌異絲腐霉、黑脛病菌、青枯病菌的抑菌作用。結(jié)果表明,乙醇、丙酮、乙醚、三氯甲烷4種溶劑提取10種食用菌得到的提取液,對煙草異絲腐霉菌和黑脛病菌的菌絲生長均未表現(xiàn)出明顯的抑制效果,而對煙草青枯病菌的抑制作用有明顯差異。4種溶劑提取液對受試菌的抑菌濃度(MIC)范圍在0.03 mg·mL-1~7.63 mg·mL-1之間;抑菌能力大小順序為三氯甲烷提取液>乙醇提取液>乙醚提取液≥丙酮提取液。

    食用菌;溶劑;病原菌;抑制

    食用菌是一類可供食用、子實體碩大的高等真菌。中國已知的食用菌350多種,大多屬于擔(dān)子菌亞門,常見的有香菇、猴頭、木耳、銀耳、牛肝菌、竹蓀等;少數(shù)屬于子囊菌亞門,如羊肚菌、馬鞍菌、塊菌。食用菌蛋白質(zhì)含量高,脂肪含量低,維生素種類齊全,礦物質(zhì)含量豐富,不含淀粉,具有很高的營養(yǎng)價值。食用菌還含有多糖、甾體、嘌呤等對人體起保健作用的有益成分[1]。

    食用菌除具有極大的營養(yǎng)價值和藥用價值外,其抑菌作用逐漸成為新的研究熱點。目前研究主要集中在食用菌水提物、有機溶劑提取物、食用菌發(fā)酵液,越來越多食用菌對人類疾病病原菌、植物病害病原菌、食物腐敗菌抑制作用的研究被報道。研究表明,食用菌含有的一些活性成分對某些種類的微生物有一定的抑制作用。馬學(xué)萍等[2]測試了8種食用菌提取物在體外對煙草花葉病毒的鈍化、預(yù)防、治療效果,推測提取物中可能含有小分子抗病毒活性物質(zhì)。吳麗萍等[3]研究發(fā)現(xiàn)金針菇、木耳和平菇提取液對西瓜炭疽(Colletotrichum orbiculareArx)、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)的菌絲生長有一定的抑制活性。劉瑩[4]采用K-B法進行的體外抗菌活性研究表明,3種食用菌粗多糖對革蘭氏陰性菌的大腸桿菌、沙門氏菌及革蘭氏陽性菌的金黃色葡萄球菌都有抑制性,且抑菌活性都隨著濃度的升高而增強。姜麗等[5]研究發(fā)現(xiàn)木蹄層孔菌Fomes fomentarius(L.: Fr.) Kick.子實體的不同溶劑提取物對白色念珠菌JLC31680、白色念珠菌 JLC31681、大腸桿菌ATCC8099、金黃色葡萄菌ATCC6538均有不同程度的抑制作用。寧安紅等[6]研究發(fā)現(xiàn)篩選出的香菇C91-3菌的深層發(fā)酵液對革蘭氏陰性菌的抑制作用明顯,對革蘭氏陽性菌無效。有研究表明,虎奶菌乙酸乙酯發(fā)酵液對革蘭氏陽性菌的抑制效果顯著高于幾種食品防腐劑[7]。不同品種的食用菌由于產(chǎn)地和所處的生態(tài)地理環(huán)境不同,其所含的有效抑菌成分的種類和含量差別較大。云南省食用菌資源豐富,作為新型植物源殺菌劑先導(dǎo)物的開發(fā)潛力非常大。本實驗室高現(xiàn)亮等[8]已初步研究了11種食用菌水提液對異絲腐霉菌、黑脛病菌、青枯病菌的抑制作用,均表現(xiàn)出一定的抑制活性。鑒于同一種食用菌不同提取方式的抑菌物質(zhì)活性不一樣,本實驗使用4種不同有機溶劑對10種不同食用菌進行提取,并進一步探究其提取液對3種重要煙草病原菌的抑菌效果,旨在找到一種能獲得高抑菌活性成分的提取液溶劑,為研制開發(fā)高效、低毒、無殘留、無污染的植物源殺菌劑提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試品種和菌株

    紅蔥(E.americanaMerr.ex Heyne)、黑牛肝(Boletus aereusFr.ex Bull.)、香菇(Lentinus edodes)、塊菌 (Tuber melanosporum)、美味牛肝菌(Boletus edulisBull.ex Franch)、黃牛肝 [Termitomyces eurrhizus(Berk.)Heim]、奶漿菌(Lactarius volemus)、大紅菇(Russula alutaceaFr.)、虎掌菌(Sarcodon imbricatus) 和青頭菌 [Russula virescens(Schaeff.)ex Zanten Fr.]10種食用菌干樣,購自云南昆明木水花野生菌批發(fā)市場。煙草異絲腐霉病菌(Pythium diclinumTokunaga in Ito&Tokunaga)、青枯病菌(Ralstonia solanacearum) 和黑脛病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae) 由本實驗室培養(yǎng)保存。

    1.2 培養(yǎng)基及主要試劑

    煙草異絲腐霉病菌、黑脛病菌的培養(yǎng)及生長抑制試驗采用燕麥培養(yǎng)基;青枯病菌的培養(yǎng),用牛肉浸膏瓊脂培養(yǎng)基,生長抑制試驗采用TTC瓊脂培養(yǎng)基,最低抑菌濃度(MIC)的測定采用TTC液體培養(yǎng)基[9]。提取活性成分所用的有機溶劑為無水乙醇、三氯甲烷、乙醚、丙酮,4種試劑均為分析純,重慶川東化工(集團)有限公司生產(chǎn)。烘箱、攪拌機、粉碎機、索氏提取器由本實驗室提供。

    1.3 活性成分的提取

    將10種食用菌子實體去雜、洗凈,65℃烘干,粉碎備用。稱取各子實體粉5 g,用濾紙包裹起來,線扎實,置于索氏提取器。采用回流提取6 h進行提取,提取完成后,250 mL燒瓶里的溶液定容至20 mL。提取器里的固體風(fēng)干后稱重,所得提取液置于4℃冰箱備用。

    提取液濃度等于提取前粉末重量與提取后干粉重量之差除以定容的體積。

    1.4 菌液的制備

    將所有供試菌活化2代后,分別接入試管斜培養(yǎng)基,32℃恒溫培養(yǎng)18 h~24 h。試驗時分別取各供試菌株的培養(yǎng)物適量接種于TTC液體培養(yǎng)基內(nèi),32℃培養(yǎng)16 h~18 h,采用10倍稀釋法,用生理鹽水稀釋至10 000倍備用。

    1.5 濾紙片法測定抑菌效果

    1.5.1 病原真菌菌絲生長抑制定性實驗

    使用直徑0.8 cm的打孔器在濾紙片上打小圓片,試管中進行密封滅菌。無菌條件下,分別將圓片濾紙置于不同溶劑食用菌提取液中浸漬24 h,以提取液溶劑浸漬為對照。用打孔器在已活化的菌株平板中打菌柄,取1塊轉(zhuǎn)入燕麥培養(yǎng)基平板中央。圓片濾紙取出,吸干多余水分,置于平板中央距菌柄2 cm~3 cm處,每皿等距放置3片。28℃恒溫培養(yǎng)2 d~3 d,觀察濾紙圓片周圍抑菌圈的有無及大小。

    1.5.2 病原細菌生長抑制定性實驗

    使用直徑0.8cm的打孔器在濾紙片上打小圓片,試管中進行密封滅菌。無菌條件下,濾紙片每3個為一組放入不同溶劑食用菌提取液中浸漬24 h,以提取液溶劑浸漬為對照。將配制好的一定濃度的青枯病菌菌懸液0.2 mL,均勻涂布到TTC瓊脂培養(yǎng)基平板上,待風(fēng)干后,將不同提取液浸泡的圓片濾紙等距置于平板上,每皿3片。32℃恒溫培養(yǎng)48 h,觀察濾紙片周圍抑菌圈有無及其大小。

    1.6 最低抑菌濃度(MIC)的測定

    采用二倍稀釋法測定食用菌提取液對煙草青枯病菌生長的最低抑菌濃度。將青枯病菌配制成一定濃度的菌懸液。取無菌試管(10mL)若干,排成一排,在各試管中加入1 mLTTC液體培養(yǎng)基,然后在第一支試管中加入1 mL食用菌有機溶劑提取液,混勻,依次從前一支試管中取1 mL混合液加入后一支試管,所得到的濃度為前一支的二分之一。再吸取配置好的一定濃度的青枯病菌菌懸液0.25 mL加入各試管中,封口置于32℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后,觀察各試管中顏色變化。

    1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    實驗數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2010處理,采用DPS 6.55版本進行方差分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 4種不同溶劑提取10種食用菌得到的提取液對供試菌株的抑制效果

    采用生長速率法和抑菌圈法測定抑菌作用的實驗中,各提取液對供試菌株的抑制效果見表1~表3。

    (續(xù)表1)

    表2 不同有機溶劑的食用菌提取液對煙草黑脛病菌絲生長的抑制效果Tab.2 Inhibitingeffectsofdifferentmushroomextractsbydifferentorganicsolventsonhyphaegrowthof Phytophthoraparasitica var.nicotianae

    (續(xù)表2)

    表3 不同有機溶劑的食用菌提取液對煙草青枯病菌的抑菌效果Tab.3 Inhibiting effects of different mushroom extracts by different organic solvents on Ralstonia solanacearum

    從表1~表3可以看出,用4種不同溶劑提取10種食用菌得到的提取液抑菌效果不同,同一種食用菌的不同溶劑提取液的抑菌效果也不同。不同溶劑提取液對煙草異絲腐霉菌和黑莖病菌的菌絲生長均未表現(xiàn)出明顯的抑制效果,而對煙草青枯病菌的抑制作用有明顯的差異。其中,使用三氯甲烷提取的10種食用菌提取液對煙草青枯病菌抑制效果顯著,以奶漿菌提取液的抑制作用最好,抑菌圈直徑為1.78 cm;使用乙醚提取的10種食用菌提取液中,黑牛肝、塊菌、美味牛肝菌、虎掌菌、青頭菌提取液對煙草青枯病菌有明顯的抑制作用;無水乙醇提取液對煙草青枯病菌的抑制作用次之;丙酮提取液對煙草青枯病菌未表現(xiàn)出抑制活性。

    2.2 4種不同有機溶劑的食用菌提取液對煙草青枯病菌的最低抑菌濃度(MIC)

    4種不同溶劑提取10種食用菌得到的提取液對青枯病菌的最低抑菌濃度測定結(jié)果見表4。

    從表4得知,4種不同有機溶劑提取10種食用菌得到的提取液對煙草青枯病菌的抑制作用有明顯的差異。4種溶劑提取10種食用菌得到的提取液對供試菌的抑菌濃度(MIC)范圍在0.03 mg·mL-1~7.63 mg·mL-1之間;抑菌能力大小順序為三氯甲烷提取液>乙醇提取液>乙醚提取液≥丙酮提取液。不同溶劑的提取液抑菌活性有差異,其中以三氯甲烷、乙醇溶劑的提取液抑菌效果最理想,其次為乙醚提取液,丙酮提取液無抑菌活性。

    表4 不同有機溶劑的食用菌提取液對煙草青枯病菌的最低抑菌濃度(MIC)Tab.4 The minimal inhibitory concentrations(MIC)of different mushroom extracts by different organic solvents on Ralstonia solanacearum

    3 討論

    食用菌抑菌效果既與提取物的濃度有關(guān),與提取溶劑、方法也有一定的相關(guān)性。郝景雯等[10]對長裙竹蓀水提物和乙醇提取物的抑菌活性進行比較,發(fā)現(xiàn)水提物對各供試菌均未顯現(xiàn)出明顯抑制作用,而乙醇提取物的抑菌作用十分顯著。食用菌中含有的活性物質(zhì)對溫度有一定的敏感性。金針菇提取液經(jīng)高溫處理后對西瓜炭疽菌的活性降低,對辣椒疫霉菌反而有促進作用[3]。檀東飛等[11]在關(guān)于棘托竹蓀乙酸乙酯提取物抑菌作用的報道中指出,該菌提取物對蛋白質(zhì)類食物的防腐效果80℃提取物比常溫的好。

    本試驗通過對10種食用菌4種不同溶劑的提取液抑菌活性進行比較,結(jié)果表明,各提取液對煙草異絲腐霉菌和黑莖病菌的菌絲生長均未表現(xiàn)出明顯的抑制效果,對煙草青枯病菌的有一定的抑制作用,且抑制強度有顯著性差異。對煙草青枯病菌抑制效果較好的抑菌物質(zhì)主要集中在三氯甲烷和無水乙醇提取液中,尤其是三氯甲烷提取液的抑菌活性最高。有研究表明,提取溶劑對竹蓀抑菌效果的影響大于打漿時間、濃縮程度、浸提溫度[12]。郝景雯等[10]的研究也證實不同溶劑的提取液抑菌活性存在一定差異。據(jù)此可以推測以上10種食用菌含有的抑菌活性物質(zhì)為極性大小不一樣的小分子化合物,不同極性的溶劑對他們的溶解度不一樣,且這些活性成分對不同病原菌的作用機理不一樣,導(dǎo)致抑菌活性存在差異。因此,選擇合適的提取溶劑是獲得食用菌有效活性成分的關(guān)鍵。此外,本試驗還測定了不同溶劑的食用菌提取液對煙草青枯病菌的最低抑菌濃度,為進一步提取、純化抑菌活性成分并對其抑菌機制進行研究提供理論依據(jù)。

    [1]喬德生,王玉彥,鄒向英,等.淺談食用菌的營養(yǎng)特點與藥用價值 [J].濱州職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報,2005,2(4):67-69.

    [2]馬學(xué)萍,段云暉,孔寶華,等.食用菌提取物對煙草花葉病毒的抑制作用 [J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2007,22(2):296-298.

    [3]吳麗萍,袁建贛,李飛,等.4種食用菌提取物對2種植物病原真菌的抑菌作用 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(8):3587-3589.

    [4]劉瑩.三種食用菌粗多糖體外抗菌活性的研究 [J].食用菌,2009(2):66-68.

    [5]姜麗,包海鷹.木蹄層孔菌子實體提取物體外抑菌活性研究 [J].中國食用菌,2011,30(2):39-43.

    [6]寧安紅,曹婧,黃敏,等.香菇C91-3菌發(fā)酵液的抑菌作用的初步探討 [J].中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報,2006,8(6):17-19.

    [7]林陳強,林戎斌,蔡海松,等.虎奶菌抑菌物質(zhì)與食品防腐劑抑菌活性的比較[J].食用菌學(xué)報,2007,14(3):62-66.

    [8]高現(xiàn)亮,羅華元,梅友坤,等.多種食用菌粗提液對煙草病原菌的抑制效果 [J].中國食用菌,2014,33(3):34-37.

    [9]方中達.植病研究方法[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998

    [10]郝景雯,賈士儒,張剛.長裙竹蓀乙醇提取物與水提取物抑菌作用研究 [J].食品研究與開發(fā),2010,31(10):8-9.

    [11]檀東飛,蘇燕卿,吳若菁,等.棘托竹蓀乙酸乙酯提取物的抑菌作用研究 [J].海峽藥物,2002,14(5):101-103.

    [12]譚敬軍,胡亞軍,吳晗晗.竹蓀抑菌作用研究 [J].食品科學(xué),2000,21(10):54-56.

    Inhibiting Effects of Mushroom Extracts by Different Solvents on Tobacco Pathogens

    ZHONG Yong-li1,GAO Xian-liang1,LUO Hua-yuan2,WANG Na3,DONG Shi-fei2, WANG Wei-dan1,RAO Zhi2,WANG Li-ping3,LAN Jian-qiang1,3
    (1.College of Plant Protection,Yunnan Agricultural University,Kunming 650201,China;2.Hongyun-Honghe Group Co.Ltd., Kunming 650231,China;3.College of Tobacco,Yunnan Agricultural University,Kunming 650201,China)

    The inhibiting effects of mushroom extracts by different solvents on three kinds of plant pathogens,Pythium diclinum Tokunaga in Ito&Tokunaga,Phytophthora parasitica var.nicotianae and Ralstonia solanacearum in tobacco were studied by filter paper disc method and the tube double dilution method.The results showed that 10 different edible mushroom extracts obtained by 4 different organic solvents including ethanol,acetone,diethyl ether,trichloromethane had no certain inhibiting effects on Pythium diclinum Tokunaga in Ito&Tokunaga,Phytophthora parasitica var.nicotianae in tobacco,while the inhibiting effects on Ralstonia solanacearum in tobacco were different significantly.The minimal inhibitory concentrations(MIC)of extracts on Ralstonia solanacearum ranged form 0.03 mg·mL-1to 7.63 mg·mL-1.Antibacterial activity was in this order:trichloromethane extract>ethanol extract>diethyl ether extract≥acetone extract.

    edible mushroom;solvents;pathogen;inhibitory

    S646.9

    A

    1003-8310(2015)01-0044-06

    10.13629/j.cnki.53-1054.2015.01.013

    云南中煙資助項目(2011JC-2)。

    鐘永麗(1988-),女,在讀碩士研究生,主要研究方向為生物農(nóng)藥開發(fā)。E-mail:zhongyl21@126.com

    **通信作者:蘭建強(1962-),男,博士,教授,主要從事煙草病害防治和生物農(nóng)藥開發(fā)研究。E-mail:jqlan92@163.com

    2014-10-17

    猜你喜歡
    青枯病濾紙提取液
    亞麻木脂素提取液滲透模型建立與驗證
    穿山龍?zhí)崛∫翰煌兓椒ǖ谋容^
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:20:06
    山香圓葉提取液純化工藝的優(yōu)化
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:28
    淺析濾紙的勻度對濾芯過濾性能的影響
    淺談茄子青枯病防治技術(shù)
    HBV-DNA提取液I的配制和應(yīng)用評價
    高抗水水性丙烯酸酯乳液的合成、表征及其在工業(yè)濾紙中的應(yīng)用
    淺析濾紙透氣度與初始壓差的關(guān)系
    汽車零部件(2014年2期)2014-03-11 17:46:34
    菊花形濾紙折疊探討
    三種堆肥對番茄生長及青枯病防治效果的影響
    在线 av 中文字幕| 国产精品蜜桃在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产成人精品婷婷| av不卡在线播放| 乱人伦中国视频| 深夜精品福利| 免费高清在线观看视频在线观看| 伦理电影免费视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| av.在线天堂| 五月伊人婷婷丁香| 国精品久久久久久国模美| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av在线观看视频网站免费| 一级a做视频免费观看| 日本欧美国产在线视频| 国产淫语在线视频| 精品人妻偷拍中文字幕| av一本久久久久| 国产精品一区www在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 在线看a的网站| 成人国语在线视频| 日本欧美国产在线视频| 久久这里有精品视频免费| 天堂中文最新版在线下载| 少妇人妻久久综合中文| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲少妇的诱惑av| 黑丝袜美女国产一区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 伦理电影免费视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 有码 亚洲区| 精品一区在线观看国产| 草草在线视频免费看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| freevideosex欧美| 国产极品天堂在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲四区av| 国产精品国产三级国产专区5o| 99久久人妻综合| 免费人成在线观看视频色| 不卡视频在线观看欧美| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 只有这里有精品99| 最黄视频免费看| 精品久久蜜臀av无| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲av福利一区| 两个人看的免费小视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 中文字幕免费在线视频6| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品偷伦视频观看了| 七月丁香在线播放| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久国产亚洲av麻豆专区| av不卡在线播放| 亚洲av在线观看美女高潮| 在线观看一区二区三区激情| 色5月婷婷丁香| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 91久久精品国产一区二区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久99热6这里只有精品| 伊人久久国产一区二区| 熟女av电影| 国产精品.久久久| a级毛片在线看网站| 99热国产这里只有精品6| 免费av中文字幕在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 99久久精品国产国产毛片| 国内精品宾馆在线| 亚洲av综合色区一区| 日韩视频在线欧美| 免费大片黄手机在线观看| 国产精品 国内视频| 国产 一区精品| 国产精品人妻久久久影院| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品一区www在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久精品国产综合久久久 | 亚洲美女黄色视频免费看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 中文字幕亚洲精品专区| 日韩视频在线欧美| 亚洲成人av在线免费| 男人操女人黄网站| 免费av中文字幕在线| 免费日韩欧美在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 午夜免费观看性视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 美女国产高潮福利片在线看| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品久久久久久久久免| av视频免费观看在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久99蜜桃精品久久| 久久久国产一区二区| 亚洲高清免费不卡视频| 少妇熟女欧美另类| 97在线人人人人妻| 精品人妻在线不人妻| 九九在线视频观看精品| 超色免费av| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品三级大全| 热re99久久国产66热| 欧美xxxx性猛交bbbb| av在线app专区| 成人免费观看视频高清| 街头女战士在线观看网站| 欧美另类一区| www日本在线高清视频| 晚上一个人看的免费电影| 午夜免费男女啪啪视频观看| 9191精品国产免费久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 如何舔出高潮| h视频一区二区三区| 女性生殖器流出的白浆| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产成人91sexporn| 久久热在线av| 又黄又粗又硬又大视频| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲性久久影院| 插逼视频在线观看| 午夜av观看不卡| 免费大片18禁| 水蜜桃什么品种好| 午夜影院在线不卡| 九草在线视频观看| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲综合色惰| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品久久久av美女十八| 久久久国产精品麻豆| 免费观看a级毛片全部| 久久ye,这里只有精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产免费又黄又爽又色| 在线天堂最新版资源| 久久久久久伊人网av| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| videos熟女内射| 成年人免费黄色播放视频| 天天操日日干夜夜撸| 五月伊人婷婷丁香| 午夜老司机福利剧场| 成人午夜精彩视频在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 少妇 在线观看| 在线天堂中文资源库| 五月玫瑰六月丁香| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 男的添女的下面高潮视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 熟妇人妻不卡中文字幕| h视频一区二区三区| 久久97久久精品| 午夜91福利影院| 久久久久久久大尺度免费视频| 一个人免费看片子| 亚洲欧美成人精品一区二区| 七月丁香在线播放| 香蕉精品网在线| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日本爱情动作片www.在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 热re99久久国产66热| 日韩一区二区视频免费看| 哪个播放器可以免费观看大片| 婷婷色综合www| 国产毛片在线视频| 有码 亚洲区| 成年av动漫网址| 永久免费av网站大全| 少妇的丰满在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久久久久久久久久免费av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| av福利片在线| 性色avwww在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 妹子高潮喷水视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久 成人 亚洲| 久久久精品免费免费高清| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久人妻熟女aⅴ| 成人影院久久| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产黄频视频在线观看| 最黄视频免费看| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲四区av| 亚洲伊人色综图| 捣出白浆h1v1| 中文字幕最新亚洲高清| 男女无遮挡免费网站观看| 五月伊人婷婷丁香| 天堂俺去俺来也www色官网| 99国产综合亚洲精品| 久久综合国产亚洲精品| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产av影院在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲久久久国产精品| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品久久久久久久电影| 中国三级夫妇交换| 一级毛片我不卡| 少妇精品久久久久久久| 国产成人精品无人区| 男女边吃奶边做爰视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| av女优亚洲男人天堂| 欧美性感艳星| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久99蜜桃精品久久| 天美传媒精品一区二区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产毛片在线视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲,欧美精品.| av播播在线观看一区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产免费一级a男人的天堂| 美女国产视频在线观看| 成人无遮挡网站| 国产免费又黄又爽又色| 精品视频人人做人人爽| 精品一品国产午夜福利视频| 全区人妻精品视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| a级毛片黄视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 精品少妇内射三级| 精品一区二区三卡| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一级毛片电影观看| av线在线观看网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 赤兔流量卡办理| 久久久久久伊人网av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久热这里只有精品99| 最后的刺客免费高清国语| 丝瓜视频免费看黄片| 十八禁网站网址无遮挡| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久热久热在线精品观看| 免费高清在线观看日韩| 国产精品一区二区在线不卡| 男女午夜视频在线观看 | 国产片内射在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲av中文av极速乱| 久久精品国产综合久久久 | √禁漫天堂资源中文www| 最近手机中文字幕大全| 91精品三级在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久婷婷青草| 草草在线视频免费看| av电影中文网址| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 少妇的逼好多水| 韩国高清视频一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 99热这里只有是精品在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久99一区二区三区| 精品国产国语对白av| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久久久久久久久久免费av| 91精品国产国语对白视频| 99re6热这里在线精品视频| 一级毛片电影观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 欧美精品av麻豆av| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产精品欧美亚洲77777| 国产免费又黄又爽又色| 大片电影免费在线观看免费| 夜夜爽夜夜爽视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 精品一区二区三卡| 国产男女内射视频| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 成年av动漫网址| 成人黄色视频免费在线看| 少妇熟女欧美另类| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费看av在线观看网站| av免费观看日本| 妹子高潮喷水视频| 久久99蜜桃精品久久| 日韩一区二区三区影片| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 9热在线视频观看99| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 欧美精品一区二区免费开放| 久久精品久久久久久久性| 一级,二级,三级黄色视频| 丝袜脚勾引网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产av国产精品国产| 赤兔流量卡办理| 亚洲国产欧美在线一区| tube8黄色片| 精品国产一区二区久久| 久久久久久久大尺度免费视频| 超色免费av| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲国产精品999| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 高清av免费在线| 欧美丝袜亚洲另类| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 桃花免费在线播放| 国产日韩欧美视频二区| 成人亚洲精品一区在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 成年人午夜在线观看视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品酒店卫生间| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲成人手机| 成年女人在线观看亚洲视频| 久久99精品国语久久久| 午夜福利视频精品| 亚洲第一av免费看| 国产精品国产三级专区第一集| 在线 av 中文字幕| 在线看a的网站| 99久久综合免费| 免费看光身美女| 制服人妻中文乱码| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲精品av麻豆狂野| 久久av网站| 久久ye,这里只有精品| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲av男天堂| 日本91视频免费播放| 日韩伦理黄色片| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国精品久久久久久国模美| 青春草国产在线视频| 两个人免费观看高清视频| 最新的欧美精品一区二区| 好男人视频免费观看在线| 考比视频在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| av免费在线看不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲美女视频黄频| 亚洲图色成人| 少妇人妻 视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久99精品国语久久久| 在线观看www视频免费| 1024视频免费在线观看| 一级黄片播放器| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 永久网站在线| 亚洲精品日本国产第一区| 日本黄大片高清| 午夜老司机福利剧场| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 91国产中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 日韩一区二区三区影片| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品乱久久久久久| 一区二区日韩欧美中文字幕 | tube8黄色片| 亚洲综合色网址| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品少妇久久久久久888优播| 国产免费现黄频在线看| 又黄又粗又硬又大视频| 男女边摸边吃奶| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲国产av新网站| 男人添女人高潮全过程视频| 久久影院123| 免费大片黄手机在线观看| 久久午夜福利片| 精品熟女少妇av免费看| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲久久久国产精品| 天美传媒精品一区二区| 女性生殖器流出的白浆| 国精品久久久久久国模美| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久青草综合色| 久久久国产精品麻豆| 欧美人与性动交α欧美软件 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 色婷婷av一区二区三区视频| 青春草视频在线免费观看| 国产高清国产精品国产三级| 成年人免费黄色播放视频| 国产精品久久久久久av不卡| 欧美日韩综合久久久久久| 老司机亚洲免费影院| 视频在线观看一区二区三区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久这里只有精品19| 一级爰片在线观看| 制服人妻中文乱码| 久久久久久久久久久免费av| 男人爽女人下面视频在线观看| 看免费av毛片| 久久女婷五月综合色啪小说| 美女国产高潮福利片在线看| 日本av免费视频播放| 婷婷成人精品国产| 亚洲av男天堂| 国产av一区二区精品久久| 久久综合国产亚洲精品| 成人亚洲欧美一区二区av| a 毛片基地| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 中文字幕人妻熟女乱码| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产片内射在线| 国产欧美亚洲国产| 春色校园在线视频观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 久热久热在线精品观看| 日韩三级伦理在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 91精品伊人久久大香线蕉| 免费观看在线日韩| 韩国av在线不卡| 人人妻人人澡人人看| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲精品久久午夜乱码| 天堂中文最新版在线下载| 国产日韩欧美视频二区| 国产一区二区在线观看av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 青青草视频在线视频观看| 黑丝袜美女国产一区| 国产成人aa在线观看| 亚洲天堂av无毛| 国产高清三级在线| 9色porny在线观看| 在线天堂最新版资源| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲欧洲国产日韩| 免费少妇av软件| 青青草视频在线视频观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲丝袜综合中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 成年美女黄网站色视频大全免费| 免费看av在线观看网站| 久久久久视频综合| 99国产精品免费福利视频| 最后的刺客免费高清国语| freevideosex欧美| 亚洲少妇的诱惑av| 久久午夜综合久久蜜桃| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久这里只有精品19| 欧美变态另类bdsm刘玥| 99久久综合免费| 日韩一本色道免费dvd| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 高清av免费在线| 亚洲国产日韩一区二区| 美女国产高潮福利片在线看| 日韩伦理黄色片| 在线观看免费视频网站a站| 国精品久久久久久国模美| 国产福利在线免费观看视频| 中文字幕制服av| xxx大片免费视频| 久久久久精品人妻al黑| 精品一区二区三区视频在线| 26uuu在线亚洲综合色| 国产色婷婷99| 久久青草综合色| 午夜福利网站1000一区二区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一边亲一边摸免费视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 日本wwww免费看| 国产午夜精品一二区理论片| 咕卡用的链子| 香蕉国产在线看| 国产xxxxx性猛交| 亚洲,一卡二卡三卡| av网站免费在线观看视频| 九九爱精品视频在线观看| 欧美国产精品一级二级三级| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩大片免费观看网站| 99国产精品免费福利视频| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久婷婷青草| 美女内射精品一级片tv| 只有这里有精品99| 天天影视国产精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 永久免费av网站大全| 99热全是精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 国产男女内射视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日韩中文字幕视频在线看片| 成人综合一区亚洲| 亚洲欧洲日产国产| 尾随美女入室| av卡一久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲av免费高清在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产精品一区www在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲精品成人av观看孕妇| 大香蕉久久成人网| 三上悠亚av全集在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品久久久av美女十八| 男女国产视频网站| 免费看光身美女| 人妻人人澡人人爽人人| 日韩人妻精品一区2区三区| 黄色 视频免费看| 2018国产大陆天天弄谢| 黄色配什么色好看| 99热6这里只有精品| 各种免费的搞黄视频| 黄色一级大片看看| 一级黄片播放器| 精品久久蜜臀av无| 五月开心婷婷网| 99热这里只有是精品在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久精品人人爽人人爽视色| 99热全是精品| xxx大片免费视频| 90打野战视频偷拍视频| 欧美丝袜亚洲另类| 午夜久久久在线观看| 亚洲成人av在线免费| 美女视频免费永久观看网站| 欧美少妇被猛烈插入视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久久久久久国产电影| 制服人妻中文乱码| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美成人午夜免费资源| 免费大片18禁| 22中文网久久字幕| 一个人免费看片子|