神經(jīng)元特異性烯醇化酶在急性有機磷中毒患者血清中的動態(tài)變化及臨床意義

馬力　楊自建　周元陵　李秀菊

(復旦大學附屬金山醫(yī)院職業(yè)病科，*急診科，上?！?00540)

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·論著·

神經(jīng)元特異性烯醇化酶在急性有機磷中毒患者血清中的動態(tài)變化及臨床意義

馬力楊自建*周元陵李秀菊

(復旦大學附屬金山醫(yī)院職業(yè)病科，*急診科，上海200540)

摘要目的：探討急性有機磷中毒患者血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)的變化及臨床意義。方法： 選擇90例急性有機磷中毒患者作為病例組，另選90例健康成人作為對照組。180例研究對象均于入院即刻采集靜脈血3.0 mL；除第1天病死的8例患者外，其余172例研究對象均于第2、3、5、7 天分別采集靜脈血3.0 mL。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清NSE濃度；采用光電比色法測定血清膽堿酯酶(ChE)濃度。 結(jié)果：病例組中8例患者于入院當日病死，其NSE及ChE血清濃度分別為(131.72±10.84) ng/mL、 (199±228)U/L。病例組中其余82例患者入院后第1、2、3 天血清NSE的平均水平分別為(54.56±5.46) ng/mL、(36.18±5.27) ng/mL、(20.56±4.64) ng/mL，對照組相應(yīng)時間點的NSE濃度分別為(9.72±3.92) ng/mL、(9.48±3.66) ng/mL、(9.86±3.62) ng/mL，兩組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。病例組82例患者入院后第1、2、3 天血清ChE的平均水平分別為(1628.60±112) U/L、(2113.59±324) U/L、(2474.75±711) U/L，對照組相應(yīng)時間點的ChE濃度分別為(5982±215) U/L、(5651±136) U/L、(5783±764)U/L，兩組間的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。入院第1、2、3 天輕、中、重度中毒患者的NSE濃度與ChE濃度呈顯著負相關(guān)，與中毒程度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)(rs)>0.05，P<0.05。結(jié)論：血清NSE可作為診治急性有機磷中毒的參考指標。

關(guān)鍵詞有機磷中毒；神經(jīng)元特異性烯醇化酶；膽堿酯酶

世界范圍內(nèi)每年有3 000 000例有機磷中毒事件，約致300 000例患者死亡[1-2]。有機磷可抑制體內(nèi)膽堿酯酶(cholinesterase，ChE),導致膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)代謝紊亂，引起毒蕈堿、煙堿樣神經(jīng)系統(tǒng)損害和中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害。Wolf等[3]研究表明，神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)是反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷最靈敏且最有意義的指標。本研究通過監(jiān)測急性有機磷中毒患者血清中的NSE水平變化，探討NSE水平在急性有機磷中毒診治中的臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2000年7月—2013年6月底我院急診科收治的急性有機磷中毒患者90例(病例組)，其中男性42例，女性48例；年齡16 ～70歲，平均(40.2±3.6)歲；90例中甲胺磷中毒36例，對硫磷中毒20例，敵百蟲中毒10例，甲基對硫磷中毒9例，敵敵畏中毒8例，樂果中毒4例，甲拌磷中毒3例；患者的癥狀和體征包括：頭痛10例(11.11%)，頭暈35例(38.89%)，乏力27例(30.00%)，多汗27例(30.00%)，流涎45例(50.00%)，惡心55例(61.11%)，嘔吐19例(21.11%)，瞳孔縮小60例(66.67%)，肌束震顫44例(48.89%)，肺部羅音23例(25.56%)，大小便失禁13例(14.44%)，昏迷27例(30.00%)，抽搐5例(5.56%)；根據(jù)病情給予膽堿酯酶復能劑、抗膽堿藥物等進行綜合治療。另將90例健康受試者作為對照組，其性別、年齡與病例組的差異無統(tǒng)計學意義。

1.2方法

1.2.1參照我國急性有機磷中毒診斷和臨床中毒程度分級標準[ GBZ8-2002]，按臨床表現(xiàn)將病例組的90例患者分為輕度中毒23例(25.54%)，中度中毒32例(35.56%)，重度中毒35例(38.89%，其中8例病死)。

1.2.2180例研究對象均于入院即刻采集靜脈血3.0 mL；除入院第1天內(nèi)病死的8例患者外，其余172例研究對象均于入院第2、3、5、7天分別采集靜脈血3.0 mL。靜脈血以2000 r/min離心10 min，將上清液保存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3采用固相酶聯(lián)吸附法(ELISA)[4]測定血清NSE濃度。NSE-ELISA試劑盒由北京軍事醫(yī)學科學院提供。按照說明書進行操作。5個標準孔內(nèi)依次加入NSE濃度為 2.5、 5、 10、 20、 50 ng/mL的標準溶液100 μL，樣品孔內(nèi)加入待檢血清及樣品稀釋溶液各50 μL，混勻后于37℃孵育30 min，洗板5次，甩干。每孔加酶標試劑100 μL ，室溫顯色10 ～15 min，終止反應(yīng)后用酶聯(lián)檢測儀檢測各孔吸光度，根據(jù)標準曲線換算成實際濃度。用瑞氏羅氏公司提供的試劑和自動生化分析儀測定膽堿酯酶(ChE)活力。

2結(jié)果

2.1病例組與對照組血清NSE水平的比較病例組8例病死患者的NSE水平為(131.72±10.84)ng/mL；其余82例患者入院第1、2、3天的血清NSE平均水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；第5、7天，病例組的82例患者的血清NSE水平仍高于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

±s)與對照組的比較

2.2不同程度的急性有機磷中毒患者血清NSE水平的動態(tài)變化及比較輕度中毒患者入院第2天起血清NSE水平即較入院第1天顯著降低，第3天恢復至正常水平；中度中毒患者入院第2天時血清NSE水平開始下降，第5天恢復至正常水平；重度中毒患者入院第1天的血清NSE水平達100.83 ng/mL,第1、2、3、5天依次降低，各時間點的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，第7天恢復至正常水平。以上提示，急性有機磷中毒患者入院第1天的NSE濃度最高，其后逐漸降低，中毒程度輕的患者NSE水平恢復至正常的時間較短。比較不同程度的急性有機磷中毒患者的血清NSE水平，入院第1天及第2天輕、中、重度中毒患者的血清NSE水平依次升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01),在入院第3天時重度中毒患者的血清NSE水平仍顯著高于中度中毒患者(P<0.01)。病死的8例患者與存活的輕、中、重度中毒患者入院第1天的血清NSE水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(<0.01)。見表2。

±s，ng/mL)

2.3急性有機磷中毒患者血清ChE水平的動態(tài)變化及與中毒程度的關(guān)系病死的8例患者血清ChE 水平為(199±228) U/L。存活的82例患者中輕、中、重度中毒患者入院第1天的血清ChE水平依次降低，但均隨著治療逐漸升高，其中輕、中度中毒患者的血清ChE 水平在入院第5天時恢復至正常水平，重度中毒患者的血清ChE 水平在入院第7天時恢復至正常水平；入院第1、2、3天時，輕、中、重度中毒患者血清ChE水平的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表3。

±s)

注：ChE正常值為5400～13200 U/L

2.4急性有機磷中毒患者血清NSE濃度與ChE濃度的相關(guān)性分析入院第1、2、3天時血清NSE與ChE呈負相關(guān)(rs<0.05、P<0.05)，見表4。

表4　急性有機磷中毒患者入院后不同時間點血清NSE 與ChE的相關(guān)性分析

3討論

急性有機磷中毒的診斷和程度分級一般以臨床表現(xiàn)和ChE濃度作為依據(jù)。以往認為，全血、紅細胞ChE是診斷急性有機磷中毒的特異性指標，對判斷病情危重程度及評估療效、預后極為重要；而血漿、血清ChE在受抑制后恢復較快且易受體液的影響，變異系數(shù)較大，不能準確反映急性有機磷中毒的危重程度及變化[5]。然而，有學者認為，應(yīng)用自動生化分析儀和標準試劑檢測的血清ChE對急性有機磷中毒的診斷、程度分級、療效評估亦有指導意義[6]。本研究顯示，急性有機磷中毒患者的血清ChE明顯下降，且下降程度與中毒程度平行，中毒程度越重，血清ChE水平越低；隨著病情恢復，患者血清ChE逐漸升高，一般至第5天恢復至正常水平。由此證實，應(yīng)用自動生化分析儀和標準試劑測定的血清ChE是對急性有機磷中毒進行診斷、程度分級和療效評估的重要而特異的指標。

近年來，越來越多的研究[7]表明，NSE是各類神經(jīng)元損傷的敏感和特異的指標。NSE是參與糖酵解途徑的烯醇化酶的一種同功酶,存在于神經(jīng)組織和神經(jīng)內(nèi)分泌組織，主要位于神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細胞的胞漿中。神經(jīng)元損傷后，NSE從神經(jīng)元胞質(zhì)逸出或“漏”出，通過腦脊液-腦屏障及血-腦屏障進入腦脊液和血液。現(xiàn)已證明，在各種引起神經(jīng)元損傷或壞死的疾病(如感染、中毒、缺血缺氧性疾病、腦外傷、腦出血、腦梗死等)中，均會出現(xiàn)CSF和血清中的NSE升高[8]。血清NSE水平可反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、腦損傷，并有助于判斷病情嚴重程度、指導治療和評估預后[9]。

本研究對90例急性有機磷中毒患者血清NSE的檢測結(jié)果顯示，急性有機磷中毒患者在入院第1天血清NSE水平即升高，明顯高于對照組，升高持續(xù)至第3天，第5天恢復至正常水平；急性有機磷中毒程度越重，血清NSE水平越高，NSE水平與中毒程度呈正相關(guān)。故本研究從生化指標的角度證實了急性有機磷中毒可能導致神經(jīng)元損害，且這種損害與疾病嚴重程度相關(guān)。

另外，本研究還提示急性有機磷中毒患者血清NSE與血清ChE呈負相關(guān)，即急性有機磷中毒病情越重，血清NSE濃度越高，血清ChE濃度越低。這提示，血清NSE和清ChE均能反映急性有機磷中毒患者病情的嚴重程度。

本研究不足之處在于：未對研究對象進行神經(jīng)系統(tǒng)損傷的其他檢查，如腦電圖、磁共振，未進行神經(jīng)系統(tǒng)評分如格拉斯哥評分等。后續(xù)研究可開展相關(guān)動物實驗，從分子生物學、病理學等角度研究急性有機磷中毒患者的NSE水平與神經(jīng)系統(tǒng)損傷的關(guān)系。

綜上所述， NSE和ChE可作為急性有機磷中毒診斷、程度分級和療效評估的指標。

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Dynamic Variation of Serum Neuron-Specific Enolase and Its Clinical Significance in Patients with Acute Organophosphate Poisoning

MaLiYangZijian*ZhouYuanlingLiXiujuDepartmentofOccupationalDisease,*DepartmentofEmergenyMedicine,JinshanHospital，F(xiàn)udanUniversity.Shanghai200540,China

AbstractObjective：To explore the dynamic variation of serum neuron-specific enolase (NSE) and its clinical significance in patients with acute organophosphate poisoning. Methods:Ninety patients with acute organophosphate poisoning were enrolled into case group, and other 90 healthy subjects were enrolled as control group. Venous blood samples of 3.0 mL were collected from the all 180 subjects at admission. Apart from the 8 patients died on day 1, the other 172 subjects underwent collection of 3.0 mL venous blood samples on day 2, day 3, day 5, day 7. Serum NSE concentration was measured by enzyme-linked immunosorbent assay, while cholinesterase(ChE) was determined by photoelectric colorimetry. Results: Eight patients in case group died on admission day, of whom the average concentration of NSE and ChE were (131.72±10.84) ng/mL, (199±228) U/L,respectively. Concentration of NSE of the rest 82 patients on day 1, day 2, day 3 were (54.56±5.46) ng/mL, (36.18±5.27) ng/mL, (20.56±4.64) ng/mL, respectively, and concentration of the control group on the corresponding time points were (9.72±3.92) ng/mL, (9.48±3.66 )ng/mL,(9.86±3.62)ng/mL,respectively. Statistically significant differences were detected between two groups(P<0.01). Average concentration of ChE of the rest 82 patients on day 1, day 2, day 3 were (1628.60±112) U/L、(2113.59±324) U/L、(2474.75±711) U/L, respectively, and those in the control group on the corresponding time points were (5982±215) U/L, (5651±136) U/L, (5783±764)U/L, respectively. Statistically significant differences were detected between two groups(P<0.01). The concentrations of NSE were in significantly negative correlation with that of ChE in mild, middle and severe poisoning patients on day 1, day 2, day 3, and in positive correlation with the poisoning severity. The correlation coefficients rs>0.05,P<0.05. Conclusions: Serum NSE may be used as an reference indicator in the diagnosis and treatment of acute organophosphate poisoning.

Key WordsOrganophosphate poisoning；Neuron-specific enolase；Cholinesterase

通訊作者楊自建，E-mail: yangzijiansh@126.com

中圖分類號R 595

文獻標識碼A