叉頭盒蛋白A1(FOXA1)在乳腺癌中的表達及其臨床意義

田　多，湯　銅，錢　波，鄭　璐，陳皖京，童婷婷

(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院普外科，安徽 合肥　230601)

叉頭盒蛋白A1(FOXA1)在乳腺癌中的表達及其臨床意義

田多，湯銅，錢波，鄭璐，陳皖京，童婷婷

(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院普外科，安徽 合肥230601)

摘要：目的研究叉頭盒蛋白A1(FOXA1)在良性乳腺腫瘤、乳腺癌及癌旁組織中的表達，以及與臨床資料的相關(guān)性。方法采用免疫組織化學(xué)方法，檢測54例乳腺癌、54例癌旁組織及20例良性乳腺腫瘤(10例纖維腺瘤和10例導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤)中FOXA1的表達。分析FOXA1的表達與患者年齡、癌組織雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、細胞增殖核抗原KI67、人類表皮生長因子受體2(HER2)、腫瘤分期、瘤體大小以及陽性淋巴結(jié)數(shù)等臨床資料的關(guān)系。結(jié)果FOXA1在乳腺癌組織中的陽性率為68.5%(37/54)，癌旁組織中的陽性率為88.9%(48/54)，良性乳腺腫瘤中的陽性率為100%(20/20)，F(xiàn)OXA1在乳腺癌與癌旁組織間、乳腺癌與良性乳腺腫瘤間的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而在癌旁組織與良性乳腺腫瘤間的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；FOXA1的表達與組織學(xué)分級、Ki67呈負相關(guān)，與ER、PR呈正相關(guān)；FOXA1表達在各近似分子亞型間、Luminal A亞型與非Luminal A亞型間、Luminal亞型與非Luminal亞型之間有差異性。結(jié)論乳腺癌組織中普遍表達FOXA1，Luminal A型中最高，提示FOXA1可能成為乳腺癌患者預(yù)后良好的標(biāo)志物之一。

關(guān)鍵詞:乳腺癌；癌旁組織；良性乳腺腫瘤；叉頭盒蛋白A1(FOXA1)；Luminal A亞型

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病具有明顯的家族遺傳傾向，與基因表達異常密切相關(guān)。臨床上發(fā)現(xiàn)良性乳腺腫瘤如纖維腺瘤、乳管內(nèi)乳頭狀瘤有可能發(fā)生惡變，具體的機制不明顯，王紅群等[1]通過回顧分析了536例乳腺癌的臨床資料，并進行隨訪，認為良性乳腺疾病史可能是乳腺癌的病因之一。叉頭盒蛋白A1(FOXA1)是轉(zhuǎn)錄因子叉頭盒蛋白家族成員之一，既有ERa輔助激活因子的功能，又有輔助阻遏因子的功能[2-4]，在乳腺、肝臟、胰腺、膀胱、前列腺和肺等正常組織中均有表達，乳腺癌組織中FOXA1表達和分子分型相關(guān)[5-6]。FOXA1在良性乳腺腫瘤以及癌旁組織中的表達情況還未見報道。本研究檢測FOXA1在良性乳腺腫瘤、癌組織以及癌旁組織中的表達，分析與臨床資料的關(guān)系，探索其在乳腺癌發(fā)病過程可能的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料收集安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科2013年1月至2014年4月經(jīng)病理診斷確診的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織標(biāo)本54例?；颊呷繛榕裕钚∧挲g36歲，最大年齡77歲，中位年齡48歲。54例患者全部行乳腺癌改良根治術(shù)，術(shù)前未進行過任何治療。取同一乳腺癌患者的癌旁非惡性腺體組織作為癌旁組織，得癌旁組織標(biāo)本54例，癌旁組織中乳腺結(jié)構(gòu)正常，未見癌組織或炎癥反應(yīng)。另外收集20例良性乳腺腫瘤組織標(biāo)本(導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀腫瘤標(biāo)本10例、乳腺纖維腺瘤10例)。

1.2試劑FOXA1鼠抗人單克隆抗體購自美國abcam公司(ab55178)，Elivision試劑盒及DAB顯色液均購自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3免疫組化采用Elivision二步法，F(xiàn)OXA1主要在細胞核著色，可以有輕微的細胞質(zhì)著色。實驗中應(yīng)用已知陽性切片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。著色判斷標(biāo)準(zhǔn)采用半定量法[5]，評分依據(jù)著色細胞的陽性比例及著色強度，在乳腺癌組織中依據(jù)癌細胞的著色百分比及強度，而在癌旁組織中則依據(jù)乳腺上皮細胞的著色百分比及強度，首先觀察著色細胞的百分比(Percentage，P)：如無著色為0(P=1)，百分比在10%以下為1(P=1)，百分比在10%～20%之間為2(P=2)，百分比在20%～30%之間為3(P=3)，依此類推；其次觀察著色細胞的強度(Intensity，I)：著色淺的定為1(I=1)，著色強的為3(I=3)，著色強度居中的為2(I=2)。應(yīng)用P×I計算最后得分(Score，S)，S在0～3之間為FOXA1陰性，4～30之間為FOXA1陽性。從檔案資料中提取ER、PR、Ki67及人類表皮生長因子受體(HER)2的表達情況。

根據(jù)腫瘤組織免疫組化ER、PR、HER2、Ki67的表達情況將乳腺癌分為4個近似分子亞型[7]：Luminal A亞型、Luminal B亞型、HER2過表達型、三陰型。

所用切片均由兩名病理科醫(yī)師鏡下共同閱片，對FOXA1的表達情況進行著色判斷。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件包進行分析比較。采用卡方檢驗、Fisher確切概率法等進行率差別的顯著性檢驗。P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1FOXA1在乳腺癌組織、癌旁組織及良性乳腺腫瘤組織中的表達免疫組化結(jié)果顯示， FOXA1的表達主要定位于細胞核，呈彌漫分布的棕黃色顆粒，強弱不等。FOXA1在乳腺癌組織、癌旁組織和良性乳腺腫瘤組織中均有表達，但表達程度各不相同(見圖1和圖2)。癌組織中FOXA1的陽性率為68.5%(37/54)，癌旁組織中FOXA1的陽性率為88.9%(48/54)，而良性乳腺腫瘤中FOXA1的陽性率為100%(見表1)。統(tǒng)計學(xué)分析顯示：FOXA1在乳腺癌組織中的的陽性表達率明顯低于在癌旁組織中的陽性表達率，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；FOXA1在乳腺癌組織中的陽性表達率明顯低于在良性乳腺腫瘤中的表達率，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；FOXA1在癌旁組織中的陽性表達率與在良性乳腺腫瘤中的陽性表達率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1　在乳腺癌組織、癌旁組織及良性乳腺腫瘤中的表達

圖1FOXA1在乳腺癌及癌旁組織中表達

圖2FOXA1在良性乳腺腫瘤中的表達

2.2乳腺癌組織中FOXA1的表達與臨床參數(shù)的關(guān)系結(jié)果如表2，F(xiàn)OXA1的表達與ER、PR、組織學(xué)分級、NPI及Ki67密切關(guān)聯(lián)(P<0.05)，而與年齡、臨床TNM分期、瘤體大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER2、脈管及組織侵犯關(guān)聯(lián)性不大，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表2　54例乳腺癌組織中FOXA1與臨床資料的關(guān)系/例

2.3乳腺癌各近似分子亞型中FOXA1的表達情況FOXA1在Luminal A亞型中的陽性率為86.4%(19/22)，在Luminal B亞型中的陽性率為80.0%(4/5)，在HER2過表達型中的陽性率為70%(7/10)，在三陰型中的陽性率為41.2%(7/17)。Luminal A亞型中FOXA1表達最高，三陰型表達最低，各型表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。且FOXA1在Luminal A亞型與非Luminal A亞型(B亞型、HER2過表達型和三陰型)、Luminal亞型(A亞型和B亞型)與非Luminal亞型(HER2過表達型和三陰型)間的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3　FOXA1在各近似分子亞型中的表達情況

3討論

人類FOX家族包含100多個成員，以擁有進化保守性的110個氨基酸的DNA結(jié)合區(qū)域為特征，F(xiàn)OXA1就是轉(zhuǎn)錄因子FOX家族中的一員。目前認為，在乳腺腫瘤的發(fā)生過程中有轉(zhuǎn)錄因子FOXA1的參與。本研究對良性乳腺腫瘤組織、乳腺癌組織及癌旁組織中FOXA1進行檢測，比較其表達水平的差異，發(fā)現(xiàn)在惡性腫瘤組織中FOXA1的表達量明顯低于癌旁組織中的表達量，而在良性乳腺腫瘤中FOXA1的表達量為100%?？梢钥闯鲈诎┳冞^程中FOXA1的表達呈下降趨勢，進一步顯示FOXA1與乳腺癌的發(fā)病有關(guān)，提示FOXA1表達缺失可能參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。FOXA1在乳腺癌發(fā)展中的確切作用尚有爭議。有研究認為FOXA1乳腺癌初期階段起促進作用[3,8-9]，在乳腺癌發(fā)展階段起抑制作用[10-12]。近來有學(xué)者研究認為FOXA1在乳腺癌(尤其是ER陽性乳腺癌)中的表達與良好預(yù)后相關(guān)[5-6,13-16]，本實驗觀察了乳腺浸潤性癌中FOXA1的表達與各項臨床資料的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FOXA1的表達與ER、PR等各項臨床公認的的預(yù)后良好指標(biāo)呈正相關(guān)，間接顯示了FOXA1與臨床預(yù)后良好相關(guān)，支持FOXA1是一個預(yù)后良好的標(biāo)志物。

乳腺癌是一類具有高度異質(zhì)性的腫瘤，在病理組織形態(tài)、對治療的反應(yīng)及預(yù)后等方面均存在顯著的個體差異。其研究發(fā)展到今天，以臨床特征和病理特點為基礎(chǔ)的傳統(tǒng)乳腺癌分型已不能適應(yīng)現(xiàn)代腫瘤診治的需要.近幾年，以基因表達譜和分子生物學(xué)特征為基礎(chǔ)提出的乳腺癌分子分型,開始逐漸走上歷史舞臺。2000年P(guān)erou等[17]對65例乳腺癌的8 102個基因進行分析，最先報道了乳腺癌的分子分型，包括：管腔型、基底細胞樣型、HER2過表達型和正常乳腺樣型。但基因芯片技術(shù)不適用于臨床工作，為了解決這一問題，2011年，St Gallen公識提出，認可臨床中以免疫組化技術(shù)替代分子技術(shù)進行近似的分子分型，以指導(dǎo)治療選擇。根據(jù)ER、PR、HER2及Ki67的免疫組化結(jié)果將乳腺癌分為4各近似分子亞型：Luminal A型(ER/或PR+，HER2-，Ki-67<14%)、Luminal B型(1：ER+或PR+HER2-，Ki-67<14%；2：ER+或PR+，HER2+)、HER2過表達型(ER-、PR-、HER2+)、三陰型(ER-、PR-、HER-)。不同的分子亞型，其臨床預(yù)后明顯不同，其中Luminal A型預(yù)后較好，Luminal B型次之，Her2過表達型和三陰型預(yù)后較差，因此臨床上有必要識別出乳腺癌中預(yù)后較好的約占一半以上的Luminal亞型，已便后續(xù)個體化治療。本研究中，顯示FOXA1的表達與Luminal A亞型相關(guān)，F(xiàn)OXA1在Luminal A亞型與非Luminal A亞型之間、Luminal亞型與非Luminal亞型之間、各分子亞型之間差異明顯，有統(tǒng)計學(xué)意義，和Badve等[5-6,10]乳腺癌的研究結(jié)果一致，認為FOXA1可以作為Luminal A亞型的一個標(biāo)記物。提示FOXA1是一個臨床上鑒別Luminal A亞型的候選標(biāo)志物。

FOXA1在良性乳腺腫瘤中的陽性率為100%，在乳腺癌組織中明顯下降，而預(yù)后最差的三陰乳腺癌中表達最低。故提示FOXA1表達缺失可能參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，而其在乳腺癌中的表達提示預(yù)后良好。有學(xué)者認為FOXA1表達的缺失也許意味著ER的功能從傳統(tǒng)的ER-FOXA1-estrogen通路變?yōu)镋R-生長因子激動的信號通路，從而出現(xiàn)對內(nèi)分泌治療的抵抗[18]。研究發(fā)現(xiàn)增強FOXA1表達和活性的藥物可能有助于維持ER陽性腫瘤對雌激素敏感，從而有利于患者生存并阻止轉(zhuǎn)移進展，將這些藥物與抗雌激素藥物聯(lián)合應(yīng)用可能有助于阻止這些腫瘤進展到不依賴雌激素的狀態(tài)[2]。Horimoto等[19]研究顯示FOXA1低表達與Luminal亞型中HER2陰性的乳腺癌患者對新輔助化療敏感相關(guān)，故認為FOXA1可以作為該類患者是否行新輔助化療的標(biāo)志物。進一步研究乳腺癌中FOXA1表達缺失的原因，可能有助于了解乳腺癌的發(fā)病機制，為乳腺癌的預(yù)后判斷和治療可能提供新的思路。

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Analysis of Forkhead-box A1(FOXA1) Expression in Breast Cancer

and Its Clinical Significance

TIAN Duo，TANG Tong，QIAN Bo，et al

(TheSecondHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230601,China)

Abtract:ObjectiveTo study the expression of Forkhead-box A1(FOXA1 ) in benign breast tumor,breast cancer and tumor adjacent tissue and the correlations between the results and clinical parameters.MethodsThe expressions of FOXA1 in 54 specimens of breast cancer,54 specimens of tumor adjacent tissues and 20 specimens of benign breast tumor(10 specimens of breast fibroadenoma and 10 specimens of intraductal papilloma) were detected by immunohistochemistry.And the relationships between the clinical parameters including patient's age,estrogen receptor(ER),progesterone receptor(PR),nuclear-associated antigen Ki67,Human epidermal growth factor receptor-2(HER2),the stage of breast cancer,tumor size and the percentage of involved lymph nodes were analyzed.ResultsThe expression of FOXA1 was observed in 68.5%(37/54) of the 54 breast carcinoma specimens,while in 88.9%(48/54)of 54 tumor adjacent tissues specimens and in 100%(20/20) of 20 benign breast tumor specimens.There was signifcant difference between the group of breast cancer and the group of tumor adjacent tissue,and between the group of breast cancer and the group of benign breast tumor(P<0.05),but there was no difference between the group of tumor adjacent tissue and the group of benign breast tumor(P>0.05).The expression of FOXA1 in breast cancer was correlated negatively with histological grade and Ki67，but there was a positive correlation with ER and PR.The expression of FOXA1 had difference between luminal and non-luminal subtype,and between luminal subtype A and non-luminal subtype A.ConclusionThe expression of FOXA1 in breast cancer is widespread,and highest in Luminal subtype A,which suggests that FOXA1 may be a useful marker for breast cancer patients with good prognosis.

Key words:breast cancer;tumor adjacent tissues;benign breast tumor;FOXA1;Luminal subtype A

(收稿日期：2015-03-02，修回日期：2015-04-02)

通信作者：湯銅，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：甲狀腺和乳腺腫瘤，E-mail:tt20164@126.com

基金項目：安徽省自然科學(xué)基金項目(No 1308085QH152)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.09.016