閃式提取法提取五味子醇溶性有效成分的工藝研究

劉顯鳳，崔佰吉，張宏梅 (吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林吉林 132013)

閃式提取法提取五味子醇溶性有效成分的工藝研究

劉顯鳳，崔佰吉，張宏梅*(吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林吉林 132013)

目的 優(yōu)化閃式提取法提取五味子醇溶性有效成分的最佳工藝。方法 以五味子乙素含量為考察指標(biāo)，通過單因素考察試驗，首先確定影響因素的顯著性及影響范圍，采用正交實驗設(shè)計方法，優(yōu)化閃式提取五味子醇溶性有效成分的最佳工藝。結(jié)果 最佳工藝條件:10倍量濃度為80%乙醇浸泡4 h，閃式提取100 s。結(jié)論 閃式提取法是一種高效、快速、簡單的提取方法，適合醇溶性有效成分的提取。

五味子;五味子乙素;閃式提取

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chiesis(Turcz．)Baill．的干燥成熟果實。五味子中含有木脂素、多糖、揮發(fā)油等成分，目前五味子入藥多以木脂素類成分為主，現(xiàn)已明確的藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其具有廣泛的抗腫瘤、保肝及抗衰老等作用［1-2］。閃式提取法是近年來發(fā)展起來的一種高速、高效的提取方法，對于中藥有效成分的快速提取有著一定的積極作用。本研究采用正交實驗設(shè)計，以提取物總木脂素含量、浸出物得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選五味子醇溶性有效成分閃式提取的最佳制備工藝，為其進(jìn)一步的深入研究提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

紫外可見分光光度儀(島津-UV1800);電子天平(CAP225D，Sartorius);微波真空干燥器(HWZ-2B，廣州興興微波能設(shè)備有限公司)，閃式提取器(河南金鼐科技發(fā)展有限公司)。

五味子乙素對照品(110765-200609)購自中國藥品生物制品檢定所;變色酸(F20080331，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);五味子購于吉林大藥房;其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 UV法測定五味子乙素

2．1．1 含量測定方法學(xué)研究

通過含量測定方法學(xué)研究表明，五味子乙素在3．98～24．41μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:Y=0．046X+0．028 1(r=0．997 9)，且精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率實驗結(jié)果均符合含量測定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)定。

2．1．2 樣品的測定

取提取物粉末200 mg，置于錐形瓶中，加乙醇15 mL，超聲(250 W，40 kHz)提取 20 min，然后過濾，取濾液置25 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋、定容至刻度，混勻。精量取1 mL溶液，加入1 g硅膠(100目)中拌勻，待乙醇揮發(fā)后，裝入預(yù)先準(zhǔn)備的層析柱中，三氯甲烷洗脫，洗脫液收集10 mL。精取4．0 mL，置10 mL具塞試管中，揮干溶劑。精密加入1 mL變色酸溶液(10%)、9 mL硫酸溶液(H2O∶H2SO4=1∶2)，混勻，置熱水浴中，加熱30 min，放冷至室溫，即得;另取五味子乙素對照品適量，加三氯甲烷制備五味子乙素對照品溶液(0．2 mg/mL)，按照2010版《中國藥典》附錄，紫外可見分光光度法進(jìn)行含量測定［2］。

2．2 單因素考察實驗

2．2．1 乙醇濃度

稱取15 g五味子藥材3份，分別加入150 mL體積分?jǐn)?shù)為70%、80%、90%的乙醇溶液，固定提取時間為60 s，提取1次。提取液濃縮、干燥、粉碎，按“2．1”項下含量測定的方法進(jìn)行含量測定。結(jié)果，五味子乙素含量分別為:13．19%、15．62%、15．84%;出膏率分別為:30．82%、29．51%、29．41%。結(jié)果顯示:出膏率變化不明顯，乙醇濃度為90%時，五味子乙素含量最高。

2．2．2 乙醇與藥材的倍量

稱取15 g五味子藥材3份，溶劑加入量為藥材的6、8、10倍，采用濃度為90%乙醇為提取溶劑，提取60 s。提取液濃縮、干燥，粉碎成細(xì)粉，按“2．1”項下含量測定的方法進(jìn)行含量測定。結(jié)果，五味子乙素含量分別為:14．62%、16．71%、15．79%;出膏率分別為:30．08%、32．22%、36．13%。從結(jié)果中可以看出，采用料液比為1∶8時，有效成分五味子乙素的提取量最高。

2．2．3 提取時間

稱取15 g五味子藥材3份，采用濃度為90%乙醇為提取溶劑，料液比為1∶8，分別考察80、100、120 s的提取效率。提取物粉末按“2．1”項下含量測定的方法進(jìn)行含量測定。結(jié)果，五味子乙素含量分別為:15．21%、16．39%、16．41%;出膏率分別為:37．20%、36．54%、36．18%。結(jié)果顯示，提取物中有效成分在提取100 s時效果最佳。

2．2．4 浸泡時間

稱取15 g五味子藥材3份，分別加入150 mL體積濃度為90%乙醇溶液，密封、放置在室溫下，分別浸泡1、2、4 h，按每次100 s的提取時間進(jìn)行提取。提取物粉末按“2．1”項下含量測定的方法進(jìn)行含量測定。結(jié)果，五味子乙素含量分別為:17．81%、19．83%、18．77%;出膏率分別為:38．42%、39．72%、40．82%。結(jié)果顯示，2 h為最佳的浸泡時間。

2．3 正交設(shè)計

根據(jù)單因素考察的最佳提取條件，采用L9(34)正交設(shè)計表，選擇乙醇濃度(A)、提取時間(B)、浸泡時間(C)和乙醇倍量(D)4個因素，進(jìn)行試驗，正交實驗因素水平表見表1。

分別以五味子乙素含量和出膏率為考察指標(biāo)，采用權(quán)重系數(shù)法進(jìn)行綜合數(shù)據(jù)處理，權(quán)重系數(shù)分別為:0．7和0．3。評分=五味子乙素含量/五味子乙素最大含量 ×0．7×100+出膏率/最大出膏率 ×0．3×100。正交試驗與結(jié)果見表2，方差分析見表3。

從表2、3可知，各考察因素影響結(jié)果分別為C＞D＞B＞A，且浸泡時間、溶劑用量有顯著影響(P＜0．05)。由結(jié)果可知，五味子醇溶性有效成分閃式提取的最佳工藝為:A1B2C3D3，即體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇為提取溶劑，料液比為1∶10，浸泡時間4 h，提取時間為100 s。

表1 正交實驗因素表

表2 正交試驗表與結(jié)果

表3 方差分析表

2．4 驗證實驗

稱取處方量五味子藥材，按“2．3”項下最佳提取工藝條件提取，并進(jìn)行五味子乙素和出膏率的測定，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，該提取工藝簡便、重現(xiàn)性良好，可以作為五味子醇溶性有效成分的提取方法。

表4 驗證試驗結(jié)果

3 討論

閃式提取法是近年來發(fā)展起來的一種新型提取方法，其提取時間一般為60～120 s，實驗外界條件要求相對簡單，不需要對藥材進(jìn)行特殊的前處理，特別適用于對溫度不穩(wěn)定藥材的提取。由于閃式提取的時間非?？欤軌虺浞痔岣咧兴幉奶崛〉男?，通過閃式提取、乙醇回流法和超聲提取法的對比研究發(fā)現(xiàn)［3］，閃式提取法在一定程度上存在很大的優(yōu)勢。

通過單因素實驗選擇乙醇的濃度為90%，選入正交實驗的乙醇濃度為80%、85%、90%，由于乙醇濃度較高，且相互之間的差異比較小，所以在提取過程中不存在顯著性差異，通過方差分析也可以充分體現(xiàn)。同時提取時間選擇90、100、110 s，相差也非常小，對最后的整個實驗評分也沒有起到顯著的作用，其有效成分的含量和出膏率都沒有受到顯著影響。

［1］劉延澤．植物組織破碎提取法及閃式提取器的創(chuàng)制與實踐［J］．中國天然藥物，2007，5(6):401-407．

［2］李生，李賀，高曉旭，等．北五味子粗多糖對酒精誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究［J］．北華大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2014，15(4):472-475．

［3］俞金，崔佰吉，張秀榮，等．正交試驗法優(yōu)化五味子醇溶性有效成分的提取分離工藝［J］．醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，29(9):1192-1194．

［4］崔佰吉，張秀榮，張俊燕，等．延燈滴丸3種提取方法的對比研究［J］．中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18(7):24-26．

Study on the extraction process of the alcohol-soluble effective components from Schisandra chiesis(Turcz．)Baill．by Flash Extraction

LIU Xianfeng，CUIBaiji，ZHANG Hongmei*(College of Pharmacy，Jilin Medical College，Jilin City，Jilin Province，132013，China)

Objective To optimize the extraction process of Schisandra chiesis(Turcz．)Baill．Methods The significant factorswere observed by single element．The optimum extraction conditionswere investigated by orthogonal design experiments and γ-schizandrin content as the index by UV results．Results The optimum extraction condition obtained was:times of soak was 4 h，80 percent ethanol，material ratio 10∶1，times of extraction was 100 s．Conclusion Themethod is simple，convenient and can be controlled easily，and suitable for the extraction of alcohol-soluble components from Schisandra chiesis(Turcz．)Baill．

Schisandra chiesis(Turcz．)Baill;γ-schizandrin;flash extraction

R284

A

1673-2995(2015)04-0243-03

劉顯鳳(1988-)，女(滿族)，助教，本科．

張宏梅(1982-)，女(漢族)，講師，碩士．

10.13845/j.cnki.issn1673-2995.2015.04.002

2014-12-14)