血液中microRNA-21對(duì)肺癌診斷價(jià)值的Meta分析

陳 劼

（湖北漢川仙女山醫(yī)院檢驗(yàn)科 431600）

肺癌是全球常見的惡性腫瘤之一［1］，目前肺癌病死率約是40年前的10倍，已成為病死率最高的腫瘤性疾病，其中非小細(xì)胞肺癌的5年存活率只有10%～15%［2］。然而，對(duì)肺癌的診斷，目前尚缺乏理想的方法。隨著人們對(duì)微小RNA（microRNA，miR）研究的深入，已有大量文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-21可作為肺癌診斷的標(biāo)志物，但其診斷價(jià)值評(píng)估高低不一。本文擬對(duì)miR-21診斷肺癌的文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析，以明確其對(duì)肺癌是否具有潛在的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 檢索策略 通過中文檢索詞“miR-21”或“microRNA-21”或“Hsa-mir-21”、肺癌、血液或血漿或血清，英文檢索詞miR-21 or microRNA-21or Hsa-mir-21、lung、cancer or carcinoma or tumor or neoplasm or cancers、serum or sera or serums or blood or plasma，于2014年1月10日檢索中國知網(wǎng)、維普、萬方、PubMed和Embsase等數(shù)據(jù)庫，并對(duì)納入文獻(xiàn)及相關(guān)綜述的參考文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，以防止漏檢［3］。限制檢索文獻(xiàn)語種為中文和英文，不限制文獻(xiàn)發(fā)表時(shí)間。

1.2 文獻(xiàn)的納入排出標(biāo)準(zhǔn) 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）文獻(xiàn)報(bào)道為血液中（包括血漿和血清）的miR-21 對(duì)肺癌的診斷，而非其他體液或組織；（2）肺癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)能夠明確的區(qū)分出肺癌患者和非肺癌的參照者；（3）有明確的閾值或cut-off值；（4）能夠從文獻(xiàn)報(bào)道中直接獲得或者計(jì)算出診斷性試驗(yàn)的四格表。排出標(biāo)準(zhǔn)：（1）重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)，對(duì)于同一作者相近年份發(fā)表的文章，選取最新發(fā)表或病例數(shù)最多的一篇；（2）不能得到閾值（cut-off值）和診斷性試驗(yàn)四格表的文獻(xiàn)，包括向通訊作者寫信索取未果或不能通過文中數(shù)據(jù)推算的文獻(xiàn)；（3）小樣本（小于30例）研究報(bào)告；（4）排出動(dòng)物試驗(yàn)、綜述、系統(tǒng)評(píng)價(jià)和會(huì)議報(bào)道。

1.3 數(shù)據(jù)提取和文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)估 對(duì)可能符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)進(jìn)行資料提取和質(zhì)量評(píng)估。提取基本信息包括：標(biāo)題、作者、發(fā)表年份、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組病例數(shù)、靈敏度、特異度、RNA 檢測的內(nèi)參、RNA 提取試劑盒和檢測探針。通過Quadas對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行評(píng)估。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 Stata12.0和Meta-DiSc用于納入文獻(xiàn)診斷值的合并，并通過Spearman模型、敏感度分析和Meta回歸判斷是否存在異質(zhì)性及異質(zhì)性的來源，Deek、Egger′s，Bagg′s檢驗(yàn)用于發(fā)表偏倚判斷和評(píng)估，以P＜0.05 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 檢索結(jié)果和納入文獻(xiàn)的一般情況 從數(shù)據(jù)庫和相關(guān)參考文獻(xiàn)中共檢出994篇文獻(xiàn)，通過篩選，有7篇文獻(xiàn)（含1 088例樣本）符合本次Meta分析的納入標(biāo)準(zhǔn)，納入流程見圖1［4-10］。納入文獻(xiàn)的基本信息和Quadas質(zhì)量評(píng)估得分情況如表1所示。納入文獻(xiàn)的588例肺癌患者的確診實(shí)驗(yàn)為組織切片病理學(xué)檢測。miR-21的檢測方法均為qRT-RCR，但不同文獻(xiàn)所選的內(nèi)參、RNA 提取試劑和探針不同，其中內(nèi)參主要分為保守的內(nèi)源性miRNA（miRNA-16、small nuclear U6BRNA 和miRNA SNORD68）和合成的非內(nèi)源性miRNA（Cel-miR-39）［11］。Quadas評(píng)估最高得分為13分，因未有文獻(xiàn)描述金標(biāo)準(zhǔn)組織切片病理學(xué)檢測和待評(píng)價(jià)試驗(yàn)（miR-21的qRT-RCR 試驗(yàn)檢測）的間隔時(shí)間，該時(shí)間間隔需足夠短，以避免疾病病情變化引起檢測結(jié)果的偏移。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

表1 納入文獻(xiàn)的基本信息和QUADAS質(zhì)量評(píng)估得分情況

圖2 miR-21診斷肺癌的靈敏度森林圖

2.2 異質(zhì)性分析和診斷價(jià)值的評(píng)估 合并7篇納入文獻(xiàn)的診斷值，靈敏度和特異度森林圖及I2（81.2%）均表明存在異質(zhì)性。Spearman相關(guān)系數(shù)為0.107（P＝0.819），表明該異質(zhì)性并非由納入文獻(xiàn)的閾值效應(yīng)引起；敏感度分析表明納入文獻(xiàn)沒有明顯的離群值存在；Meta回歸分析納入文獻(xiàn)中的miR-21檢測方法的不同是否引起異質(zhì)性，結(jié)果如表1所示，RT-qPCR 檢測的關(guān)鍵因素內(nèi)參（RDOR＝0.35，P＝0.4366）、提取RNA 試劑（RDOR＝0.81，P＝0.6777）和檢測探針（RDOR＝9.08，P＝0.2437）的不同均不是該Meta分析異質(zhì)性產(chǎn)生的原因，因此，應(yīng)用隨機(jī)效應(yīng)模型合并納入文獻(xiàn)，以最大限度降低異質(zhì)性對(duì)結(jié)果的影響。通過合并得出，miR-21對(duì)肺癌的診斷靈敏度為0.68（95%CI：0.55～0.79），見圖2；特異度為0.82（95%CI：0.76～0.86），見圖3，陽性似然比3.70（95%CI：2.60～5.25）和陰性似然比0.39（95%CI：0.27～0.58），表明血液中的miR-21對(duì)肺癌有中度的診斷能力和較高的排出其他疾病的能力；綜合曲線下面積（SROC）為0.84（95%CI：0.80～0.87）和診斷比值比（DOR）為9.90（95%CI：4.75～20.63），見圖4；表明miR-21對(duì)肺癌有較好的診斷價(jià)值。

圖3 miR-21診斷肺癌的特異度森林圖

2.3 發(fā)表偏移 Deek、Begg′s和Egger′s檢驗(yàn)評(píng)估納入文獻(xiàn)是否具有發(fā)表偏倚。Deek 檢驗(yàn)P＝0.227，納入文獻(xiàn)基本對(duì)稱；同時(shí)，Begg′s和Egger′s檢驗(yàn)結(jié)果分別為P＝0.764和P＝0.446，均表明本次miR-21對(duì)肺癌診斷價(jià)值的Meta分析納入文獻(xiàn)不存在發(fā)表偏倚。

圖4 miR-21診斷肺癌的DOR

3 討 論

miR 是長度約為19～25bp的非編碼基因的大家族，在基因表達(dá)中起著調(diào)控作用，其表達(dá)量隨腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展而變化，已有研究報(bào)道與多種腫瘤疾病相關(guān)，如肺癌［12］、胃癌［13］等。腫瘤相關(guān)miR 在腫瘤疾病發(fā)生發(fā)展過程中穩(wěn)定存在于血液中，因而可用于腫瘤疾病的診斷，其中是miR-21對(duì)肺癌疾病的診斷價(jià)值，已引起人們的廣泛關(guān)注。目前已報(bào)道的miR-21對(duì)肺癌的診斷價(jià)值不一，需Meta分析整合已報(bào)道的結(jié)果，為進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

通過篩選，7篇高質(zhì)量的文獻(xiàn)納入本次Meta分析，Quadas評(píng)分12～13，因沒有文獻(xiàn)具體描述病理學(xué)檢測與qRT-PCR 檢測血液中miR-21之間的時(shí)間間隔，從而忽略了可能會(huì)因病程進(jìn)展引起檢測結(jié)果偏移的情況。異質(zhì)性是Meta分析能否進(jìn)行資料合并的重要參考因素，閾值效應(yīng)是診斷性Meta分析異質(zhì)性的首要考慮因素，本文通過Spearman模型得其相關(guān)系數(shù)明確7篇文獻(xiàn)的不同閾值不是引起異質(zhì)性的原因；但可視化的森林圖及I2均表明異質(zhì)性的存在，因此采用了敏感度分析和Meta回歸分析判斷引起異質(zhì)性的可能原因。敏感度分析結(jié)果未發(fā)現(xiàn)離群結(jié)果；Meta回歸分析了方法設(shè)計(jì)因素的不同可能引起的異質(zhì)性，結(jié)果如表2所示，方法設(shè)計(jì)的重要因素內(nèi)參（P＝0.436 6）、提取RNA 的不同試劑（P＝0.677 7）、探針的種類不同（P＝0.243 7）均未引起異質(zhì)性。因此，已存在的異質(zhì)性來源不確定，最終采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并7篇納入文獻(xiàn)診斷值，以最大限度消除異質(zhì)性的影響。

總之，通過合并得出miR-21對(duì)肺癌的診斷價(jià)值指標(biāo)：診斷靈敏度、特異度、陽性似然比、陰性似然比以及綜合診斷價(jià)值的指標(biāo)綜合曲線下面積和診斷比值比均表明miR-21對(duì)肺癌有較好的診斷價(jià)值。在肺癌確診尚無理想方案的情況下，可以考慮將miR-21作為一個(gè)參考指標(biāo)。當(dāng)然，在此之前，需要更多的研究以確定miR-21在肺癌發(fā)生發(fā)展中變化的機(jī)制，并盡可能標(biāo)化檢測方案和參考范圍。

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