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    雞新城疫的癥狀與實(shí)驗(yàn)室診斷

    2015-03-02 01:19:50吳佳寧
    現(xiàn)代畜牧科技 2015年4期
    關(guān)鍵詞:碘酊尿囊氣室

    雞新城疫的癥狀與實(shí)驗(yàn)室診斷

    吳佳寧

    (沈陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心110000 )

    新城疫(ND)是由新城疫病毒引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病。以高熱、呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血為特征。

    1臨床癥狀

    患雞體溫升高到43~44℃,精神沉郁或閉眼嗜睡,病雞腹瀉呈黃白色或綠色,有時(shí)帶血,常搖頭、噯氣,發(fā)出“咯咯”聲,口和鼻中有多量黏液,嗉囊內(nèi)積液,病程稍長(zhǎng)或呈慢性經(jīng)過(guò)時(shí),常有腿、翅麻痹或頭、頸歪斜等神經(jīng)癥狀。剖檢特征病變是腺胃的乳頭突起部或黏膜上有點(diǎn)狀或斑狀出血,有時(shí)形成潰瘍,尤其在腺胃與食道交界部更為明顯。肌胃黏膜上有點(diǎn)狀或不正形的出血斑點(diǎn)。腸道、尤其是盲腸扁桃體和小腸黏膜(迥言瓣部)以及直腸黏膜上出血和不同大小界限清楚、出血性纖維素壞死偽膜,其他各部位如心、腹部脂肪及喉頭、氣管等處都有出血斑點(diǎn)。

    2病毒分離

    材料應(yīng)采自早期病例,慢性病例不適宜于分離禽病毒,病雞撲殺后應(yīng)用無(wú)菌手術(shù)采取脾、腎、肝、肺(通常有較高的病毒滴度),腦(病毒的存在時(shí)間較其他組織長(zhǎng))或骨髓(最不易被細(xì)菌污染)等組織。生前可用滅菌棉拭子獲取呼吸道或泄殖腔分泌物。將棉拭子浸出液或經(jīng)研磨的組織懸液制成1:5~10乳劑,每毫升加青、鏈霉素各1000~2000單位,以抑制可能污染的細(xì)菌,置冰箱中作用2~4小時(shí),然后離心沉淀,取其上清液作為接種材料。

    2.1 雞胚接種

    常用9~10日齡的雞胚,每份病料至少注入5個(gè)雞胚,接種于絨毛尿囊膜或尿囊內(nèi)。照蛋,劃出氣室位置,在雞胚胎面觀看胚胎活動(dòng),選擇無(wú)大血管處標(biāo)一記號(hào)。在氣室頂部和標(biāo)記處用碘酊和酒精消毒,并各鉆一小孔。用較干的碘酊棉球涂布小孔。用1 mL注射器吸取上述處理過(guò)的材料,插入小孔內(nèi)約3mm,緩緩注入0.1~0.2mL,拔出針頭。用融化石臘封口,在蛋殼上標(biāo)明日期。置37℃溫箱培養(yǎng),每天照蛋二次,至全部或大部分雞胚發(fā)生死亡為止(24h內(nèi)死亡的胚棄之)。將死胚收藏于4℃冰箱內(nèi),氣室向上,6~24h獲尿囊液。

    收獲尿囊液時(shí),以碘酊涂擦氣室和氣室附近的蛋殼,用滅菌攝子將氣室處蛋殼敲破,剝?nèi)サ皻ぃ昧硪粶缇¤囎觿內(nèi)サ皻つ?,并撕破絨尿膜,暴露出清晰的尿囊液(混濁者已污染,應(yīng)棄去不收),以鑷子將胚胎和胚膜壓向一邊,吸取尿囊液于滅菌瓶中,并加標(biāo)簽。

    用透明而無(wú)菌者作血凝反應(yīng),可在96孔微孔板上進(jìn)行,也可將尿囊液一滴與1%~2%雞紅細(xì)胞懸液一滴在一塊白瓷板上相混和,如發(fā)生紅細(xì)胞凝集,即用已知抗雞新城疫血清作血球凝集抑制試驗(yàn)(HI),出現(xiàn)抑制反應(yīng),便可得到確診。

    2.2 組織培養(yǎng)(細(xì)胞培養(yǎng))

    雞新城疫病毒能在禽源原代細(xì)胞,一些哺乳動(dòng)物的原代細(xì)胞和細(xì)胞系中生長(zhǎng)繁殖,因此也可用細(xì)胞培養(yǎng)的方法來(lái)分離病毒。最常用的是在玻璃和塑料容器內(nèi)長(zhǎng)成單層的雞胚成纖維細(xì)胞。操作時(shí)可將待檢液作一系列十倍比的稀釋,分別注入到雞胚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)管中,24~48h出現(xiàn)細(xì)胞病變(細(xì)胞圓縮顆?;?,拉長(zhǎng)呈蜘蛛網(wǎng)或干枝梅樣),取培養(yǎng)液作HA和HI試驗(yàn),鑒定病毒。也可在細(xì)胞培養(yǎng)中用已知血清進(jìn)行中和試驗(yàn),作出鑒定結(jié)果,如將待檢材料注入雞胚成纖維細(xì)胞的平皿培養(yǎng)中。新城疫強(qiáng)毒通常出現(xiàn)大而透明或大而紅色蝕斑(2~4mm)。根據(jù)蝕斑形成單位可測(cè)定病毒濃度。

    3血清學(xué)檢查

    由于循環(huán)抗體產(chǎn)生后,病毒可從寄主的組織中迅帶消失,所以慢性病例難于分離病毒,應(yīng)通過(guò)特異抗體的檢查來(lái)間接診斷此病。通常中和抗體較血凝抑制(HI)抗體維持時(shí)間要長(zhǎng)些,但中和試驗(yàn)較費(fèi)時(shí)花錢,而HI試驗(yàn)?zāi)茉诙虝r(shí)間內(nèi)作大量測(cè)定,檢出的抗體滴度一般相當(dāng)于中和滴度。因此常用HI試驗(yàn)來(lái)檢查抗體。抗體滴度于感染后5~7d開(kāi)始上升,15~20d可達(dá)高峰且能維持較長(zhǎng)時(shí)間,受強(qiáng)毒感染而耐過(guò)的雞在體內(nèi)產(chǎn)生極高的抗體水平,滴度高達(dá)11(Log2)以上。在感染群內(nèi)出現(xiàn)高抗體的數(shù)量隨雞群原有的抗體水平而異,與雞的年齡也有關(guān)系,平均可達(dá)30%,在只有少數(shù)出現(xiàn)癥狀,不斷發(fā)生死亡的雞群中,可對(duì)活雞進(jìn)行抗體檢測(cè)。如有較多高抗體雞的出現(xiàn),說(shuō)明雞群已受過(guò)新城疫野毒感染。免疫過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的雞群持續(xù)保持高水平的抗體,可能是隱性感染或慢性感染的結(jié)果。

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