白醬感冒顆粒提取工藝及質(zhì)量研究

★　胡銳敏　何平清　何純斌　楊明　文萬(wàn)江 　(江西濟(jì)民可信藥業(yè)有限公司　江西 宜春 336000)

白醬感冒顆粒提取工藝及質(zhì)量研究

★胡銳敏*第一作者：胡銳敏(1987—)，男，工程師。研究方向：新藥開(kāi)發(fā)。Tel:0795-3653861,E-mail: huruimin.ok@163.com。何平清何純斌楊明文萬(wàn)江 (江西濟(jì)民可信藥業(yè)有限公司江西 宜春 336000)

摘要：目的：研究白醬感冒顆粒的提取工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：選用L9(34) 進(jìn)行正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，對(duì)白醬感冒顆粒的提取工藝進(jìn)行篩選，以東莨菪內(nèi)酯含量為指標(biāo)，考察提取溶劑、提取時(shí)間、熱回流速度、溶劑倍數(shù)4個(gè)因素；采用HPLC法測(cè)定東莨菪內(nèi)酯的含量，色譜柱為依利特C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水-冰醋酸(15∶85∶0.4)；檢測(cè)波長(zhǎng)為343nm。結(jié)果：采用熱回流提取技術(shù)加水煎煮2次，第一次提取2h，第二次提取1h，每次加水15倍，熱回流速度為1.5L/h(以每kg藥材計(jì))提取效果最好；東莨菪內(nèi)酯在2～12μg/mL線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9998)，平均回收率100.5%，RSD為1.69%。結(jié)論：該方法穩(wěn)定可靠，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：白醬感冒顆粒；正交設(shè)計(jì)；東莨菪內(nèi)酯；高效液相色譜

白醬感冒顆粒由敗醬科，敗醬屬植物白花敗醬草這一味中藥材經(jīng)適當(dāng)方法加工而成，該產(chǎn)品源于我省民間，用本植物治療流行性腮腺炎，流行性感冒等經(jīng)驗(yàn)用藥[1]。該產(chǎn)品具有清熱解毒，疏風(fēng)散熱功效。主要用于風(fēng)熱感冒，發(fā)熱咽痛，臨床療效顯著，應(yīng)用廣泛[2]。白醬感冒顆粒的制備工藝以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)。應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和方法進(jìn)行劑型選擇和工藝設(shè)計(jì)。

1儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀(安捷倫1260，VWD紫外檢測(cè)器)；梅特勒電子天平(型號(hào)：XS205)；KUDOS超聲儀(型號(hào)：SK5200)。

1.2試藥

白醬感冒顆粒(江西濟(jì)民可信藥業(yè)有限公司)；白花敗醬草；東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110768-200504)；乙腈為色譜純；其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1白花敗醬草熱回流提取工藝參數(shù)的優(yōu)化

2.1.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)預(yù)試驗(yàn)研究表明：提取溶劑、提取時(shí)間、熱回流速度、溶劑倍數(shù)對(duì)提取結(jié)果影響較大。本試驗(yàn)主要考察了影響白花敗醬草提取效果的關(guān)鍵參數(shù)提取溶劑、提取時(shí)間、熱回流速度、溶劑倍數(shù)這4個(gè)因素，設(shè)置3個(gè)水平，采用L9(34) 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表，以東莨菪內(nèi)酯為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)化白花敗醬草提取工藝。正交設(shè)計(jì)因素水平表見(jiàn)表1。

表1　正交設(shè)計(jì)因素水平表

2.1.2樣品制備取切成3～5cm的白花敗醬草 500g，按L9(34)正交設(shè)計(jì)表要求試驗(yàn)，提取液合并煎液，濾過(guò)，靜置過(guò)夜，吸取上清液，濃縮成比重為1.32(50℃)的稠膏，測(cè)定稠膏中東莨菪內(nèi)酯的含量,測(cè)定東莨菪內(nèi)酯的轉(zhuǎn)移率。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表2-3。

表2　正交設(shè)計(jì)及結(jié)果

表3　提取方差分析

注：F0.05(2,2)=19.000。

由結(jié)果可知，以濃縮液中東莨菪內(nèi)酯的含量為考察指標(biāo)，從上圖直觀(guān)分析顯示影響因素大小為A>B>D>C,方差分析表明，提取溶劑A對(duì)提取結(jié)果具有顯著影響，根據(jù)K值，A因素應(yīng)選水平3，B因素應(yīng)選水平2，D因素應(yīng)選水平1，C因素應(yīng)選水平3，即使用水為提取溶劑，提取時(shí)間3h，熱回流速度為1.5L/h(以每kg藥材計(jì))，提取溶劑量為15倍量。

2.1.3提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)取同批藥材的白花敗醬草三份，每份500g，根據(jù)上述優(yōu)選的提取條件進(jìn)行提取，結(jié)果表明，該提取工藝穩(wěn)定可靠，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.2輔料用量的選擇

為了保證顆粒劑的相關(guān)指標(biāo)符合要求，實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)蔗糖、糊精的用量進(jìn)行篩選，確定了蔗糖與糊精的比例及最佳制成量，即蔗糖：糊精以4∶1為最佳；同時(shí)研制的低糖性白醬感冒顆粒，其蔗糖：糊精以1∶3為最佳。

2.3白醬感冒顆粒的制備

取白花敗醬草1.47kg，加水煎煮，第一次提取2h，第2次提取1h，每次加水15倍，合并煎液,濾過(guò)，在30min后開(kāi)始回流，熱回流速度為1.5L/h(以每公斤藥材計(jì))，濾液，備用，靜置，取上清液濃縮至相對(duì)密度為1.32 (50℃)的稠膏。取清膏，加入蔗糖706 g，糊精176.5 g，混勻，制成顆粒，干燥，制成1000 g；或加入蔗糖88.2 g，糊精264.6 g，混勻，制成顆粒，干燥，制成470 g(低糖型)，整粒，機(jī)分，即得。

3質(zhì)量研究

3.1東莨菪內(nèi)酯含量測(cè)定[3]

3.1.1色譜條件依利特C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水-冰醋酸(15∶85∶0.4)；檢測(cè)波長(zhǎng)為343nm；柱溫為室溫；理論板數(shù)按東莨菪內(nèi)酯峰計(jì)應(yīng)不低于2000。

3.1.2供試品溶液制備取本品，研細(xì)，取約10g或4.7g(低糖型)，精密稱(chēng)定，精密加入水50mL，超聲處理使溶解，離心，精密吸取上清液25mL，用乙酸乙酯振搖，提取3次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，置85℃水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。結(jié)果見(jiàn)圖1。

A.東莨菪內(nèi)酯峰對(duì)照品；B.供試品溶液

樣品量/g樣品中原有量/μg添加對(duì)照品量/μg測(cè)得量/μg回收率/%平均回收率/%RSD/%1010.0510.02520.063199.91010.0510.02520.000499.31010.0510.02520.1903101.11010.0510.02520.3515102.81010.0510.02520.2605101.81010.0510.02519.895498.2100.51.69

3.1.3對(duì)照品溶液的制備取東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1mL中含4μg的溶液，即得。

3.1.4線(xiàn)性關(guān)系考察分別精密稱(chēng)取東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品儲(chǔ)備液適量(12.5mg加流動(dòng)相稀釋到100mL)加流動(dòng)相稀釋?zhuān)謩e制成2，4，6，8，10，12μg/mL的東莨菪內(nèi)酯溶液進(jìn)樣10μL，測(cè)定東莨菪內(nèi)酯的峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)，建立回歸方程Y=198.66X-0.8387(R2=0.9997)。表明濃度在2～12μg/mL間與峰面積有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

3.1.5精密度試驗(yàn)精密吸取上述系列對(duì)照品溶

液10μL,連續(xù)進(jìn)樣6次,分別測(cè)定峰面積，東莨菪內(nèi)酯RSD為0. 42%。

3.1.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一份樣品，按3.1.2項(xiàng)下供試品溶液的制備6份，測(cè)定東莨菪內(nèi)酯的含量，RSD為1. 01%。

3.1.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液,每隔2h進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果6次測(cè)定東莨菪內(nèi)酯的峰面積基本不變,RSD為0.87%,表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.1.8加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的白醬感冒顆粒樣品(批號(hào)141001，含量10.05μg/袋)10g，6份，每份加入東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品2.5mL(4.01μg/mL)，樣品及對(duì)照品的加入量見(jiàn)表5，按3.1.2項(xiàng)下供試品的溶液的制備方法制備并測(cè)定。

4討論

4.1白花敗醬草采用熱回流技術(shù)，可以進(jìn)行完全的提取，以東莨菪內(nèi)酯作為指標(biāo)，優(yōu)化了提取工藝。制備的白醬感冒顆粒符合顆粒劑要求，為顆粒劑中低糖型的制備提供了思路。

4.2建立了白醬感冒顆粒的東莨菪內(nèi)酯的含量測(cè)定方法，適合對(duì)白醬感冒顆粒的質(zhì)量控制，以東莨菪內(nèi)酯為對(duì)照品，采用HPLC法測(cè)定，靈敏度高、精密度好、結(jié)果可靠、專(zhuān)屬性大為增加，而且它是一個(gè)活性成份，這樣就可以更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]樸成玉，吳修紅，安柏松，等.白花敗醬草的研究進(jìn)展[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2010，21.

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[3]朱才慶，曾憲儀，徐曉艷，等.HPLC法測(cè)定白醬感冒顆粒中東莨菪素[J].中草藥，2006，37(4)：553-554.

征稿啟事

《江西中醫(yī)藥》所設(shè)的重點(diǎn)欄目有《明醫(yī)心鑒》、《滕王閣醫(yī)話(huà)》等。《明醫(yī)心鑒》以介紹名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)和中醫(yī)臨證心得為主，重點(diǎn)刊載中醫(yī)關(guān)于疑難病的診療經(jīng)驗(yàn)，要求觀(guān)點(diǎn)、方法新，經(jīng)驗(yàn)獨(dú)到。《滕王閣醫(yī)話(huà)》主要反映中醫(yī)教學(xué)、科研、臨床的一得之見(jiàn)，要求以小見(jiàn)大，有感而文，語(yǔ)言生動(dòng)流暢，可讀性強(qiáng)，富于知識(shí)性、趣味性。

Extraction process and quality research of Baijiang Ganmao Granule

HU Rui-min，HE Ping -qing，HE Chun-bin， YANG ming， WEN Wan-jiang

JiminKexinPharmaceuticalCo.Ltd,Yichun336000,China.

Abstract:Objective: To study the extraction process and quality standard of the Baijiang Ganmao Granule.Methods: Making an L9(34) orthogonal experimental design, with the content of Scopoletin as the evaluation index and with the extraction solvent ,extraction time, heat reflux rate, solvent multiples as the four factors. Finding out a optimization of the Baijiang Ganmao Granule extraction process; Using HPLC determination of Scopoletin, the column was Elite C18column (4.6mm × 250mm, 5μm); mobile phase of acetonitrile - water - acetic acid (15∶85∶0.4); detection wavelength of 343nm. Results: Using the heat reflux extraction technology boil water 2 times, the first extract 2 hours and the second 1 hour, added 15 times of water every time, Heat reflux rate 1.5L/h (per kg herbs) extracts the best; good linear indications showed as a results of the scopoletin being controlled within 2～12μg/mL (r=0.9998), the average recovery was 100.5%, RSD is 1.69%. Conclusion: The method was stable and reliable, suitable for industrial production.

Key words:Baijiang Ganmao Granule; Orthogonal Design; Scopoletin; HPLC

收稿日期：(2015-01-21)編輯：曾文雪

中圖分類(lèi)號(hào)：TQ461

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A