高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定甜夢(mèng)膠囊中黃芪甲苷含量

葛德洲，鄧祖磊

（安徽省蚌埠市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 蚌埠 233000）

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定甜夢(mèng)膠囊中黃芪甲苷含量

葛德洲，鄧祖磊

（安徽省蚌埠市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 蚌埠 233000）

目的 建立測(cè)定甜夢(mèng)膠囊中黃芪甲苷含量的高效液相色譜方法。方法 色譜柱用Zorbax Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4．6 mm，5 m)，流動(dòng)相為乙腈-水(32∶68)，流速為1．0 mL／min。結(jié)果 黃芪甲苷進(jìn)樣量的線性范圍為0．230 4～4．608 g（r=0．999 7），平均回收率為98．15%，RSD為1．46%(n=6)。結(jié)論 該方法用于測(cè)定甜夢(mèng)膠囊中黃芪甲苷含量專(zhuān)屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便。

黃芪甲苷；甜夢(mèng)膠囊；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法

甜夢(mèng)膠囊具有益氣補(bǔ)腎、健脾和胃、養(yǎng)心安神功效，是由刺五加、黃精、蠶蛾、桑葚、黃芪、陳皮、砂仁等組方的復(fù)方中藥制劑。目前，其標(biāo)準(zhǔn)中只有簡(jiǎn)單的鑒別項(xiàng)[1]，且未見(jiàn)有含量測(cè)定的報(bào)道。為了有效控制藥品質(zhì)量，確保臨床療效，筆者參考文獻(xiàn)[2-9]，以黃芪甲苷為定量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法（HPLC-ELSD）測(cè)定黃芪甲苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters e2695型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；2424蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）；Empower化學(xué)工作站；Sartorius CP225D電子天平（德國(guó) Sartorius公司，感量 0．01 mg）；Sartorius BS210S電子天平（德國(guó)Sartorius公司，感量0．1 mg）。黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110781-200613）；乙腈（色譜純），水為重蒸水，其他試劑均為分析純；甜夢(mèng)膠囊（煙臺(tái)榮昌制藥股份有限公司，批號(hào)為120503，120508，120610）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4．6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(32∶68)；流速：1 mL／min；柱溫：30℃；檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度為75℃，霧化器溫度為48℃，氣體壓力為25 psi。

2．2 溶液制備

取本品裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，研細(xì)，取約5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量 ，超聲處理（功率300 W，頻率45 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用 0．45 μm濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。精密稱(chēng)取黃芪甲苷11．52 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．230 4 g／L）。按處方比例，取除黃芪以外的藥材，按制備工藝要求制備陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備成陰性對(duì)照品溶液。2．3 方法學(xué)考察

空白干擾試驗(yàn)：取2．2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液色譜則無(wú)此峰(見(jiàn)圖1)。

1．黃芪甲苷A．對(duì)照品溶液 B．供試品溶液 C．陰性對(duì)照品溶液圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對(duì)照品溶液1，2，5，10，20 μL，分別進(jìn)樣，按擬訂色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積，以峰面積對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)、黃芪甲苷進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=2．024 3 X+6．542 7，r=0．999 7(n=5)。結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在0．230 4～4．608 μg范圍內(nèi)與峰面積對(duì)數(shù)線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL。結(jié)果黃芪甲苷峰面積的 RSD為0．51%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為120508）6份，按供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定峰面積，代入線性方程計(jì)算。結(jié)果平均含量為每粒0．094 mg(n=6)，RSD=0．87%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h時(shí)按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果黃芪甲苷峰面積 RSD為1．0%(n=6)，供試品溶液在12 h內(nèi)測(cè)定供試品穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取已知含量的同一批樣品（批號(hào)為120508，含量為0．235 6 mg／g）6份，精密加入對(duì)照品溶液2．5 mL，按供試品測(cè)定方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2．4 樣品含量測(cè)定

取對(duì)照品溶液和供試品溶液，用0．45 μm微孔濾膜濾過(guò)，對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣10 μL和20 μL，供試品溶液進(jìn)樣20 μL，讀取峰面積，按外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量結(jié)果批號(hào)為 120503，120508，120610的樣品含量分別為每粒0．089，0．094，0．091 mg。

3 討論

用紫外檢測(cè)器檢測(cè)黃芪甲苷時(shí)，由于黃芪甲苷紫外吸收在近末端，干擾較大。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種通用性檢測(cè)器，可以消除紫外末端吸收引起的干擾，是檢測(cè)黃芪甲苷的較好方法。

在試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)超聲和回流提取方法進(jìn)行了提取率的比較，結(jié)果兩種方法提取效果無(wú)明顯差異，考慮操作簡(jiǎn)單易行，最后選用甲醇超聲提取法。并對(duì)超聲提取時(shí)間(20，30，40，50 min）進(jìn)行了比較，結(jié)果隨時(shí)間延長(zhǎng)，含量相應(yīng)增加，但30 min后含量變化不大，因此選用超聲處理30 min。

比較了甲醇 -水、乙腈-水等不同流動(dòng)相，結(jié)果用乙腈-水(32∶68)時(shí)，各成分能到達(dá)基線分離，黃芪甲苷峰形好，理論板數(shù)高，因此選用乙腈-水(32∶68)作為流動(dòng)相。

甜夢(mèng)膠囊含有藥味較多，成分復(fù)雜，采用HPLC-ELSD法測(cè)定膠囊中黃芪甲苷的含量，結(jié)果穩(wěn)定，專(zhuān)屬性強(qiáng)，可有效控制藥品質(zhì)量。

[1]WS3-B-2230-96，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S]．

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：283．

[3]李 濤，徐長(zhǎng)根，郝武常．HPLC-ELSD測(cè)定桃芪生血膠囊中黃芪甲苷的含量[J]．中成藥，2005，27(5)：541-542．

[4]孫 健，劉 泓，范 斌．HPLC-ELSD法測(cè)定祝艾康膠囊中黃芪甲苷的含量[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(4)：60-61．

[5]何江敏，丁 潔，葉 虹．高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定養(yǎng)胃顆粒中黃芪甲苷的含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2010，19(22)：43-44．

[6]李 丹．高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定芪麥益氣口服液中黃芪甲苷的含量[J]．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(7)：941-942．

[7]張夢(mèng)云，馮 儉，張煜華，等．HPLC-ELSD法測(cè)定芪桂消 顆粒中黃芪甲苷的含量[J]．華西藥學(xué)雜志，2009，24(6)：659-660．

[8]陳岳蓉．HPLC-ELSD測(cè)定芪鹿益腎片中黃芪甲苷的含量[J]．中成藥，2004，26(8)：629-631．

[9]唐德智，莫 迎．小兒健脾開(kāi)胃合劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定[J]．中國(guó)藥業(yè)，2010，19(6)：22-23．

Determination of Astragaloside in Tianmeng Capsules by HPLC-ELSD

Ge Dezhou,Deng Zulei
(Bengbu Municipal Institute for Food and Drug Control,Bengbu,Anhui,China 233000)

Objective To establish a HPLC-ELSD method for the determination of the astragaloside content in Tianmeng Capsules．M ethods The ZORBAX Eclipse XDB-C18column(150 mm×4．6 mm，5 m)was used with acetonitrile-water(32∶68)as the mobile phase．The flow rate was 1．0 mL／min．Results The linear range of astragaloside was 0．230 4-4．608 μg(r=0．999 7)．The average recovery rate was 98．15% with RSD of 1．46%(n=6)．Conclusion This method is strongly specific and simple to operate for detecting the astragaloside content in Tianmeng Capsules．

astragaloside;Tianmeng Capsules;HPLC-ELSD

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)05-0031-02

葛德洲（1963-），男，副主任藥師，主要從事藥物分析和藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作，（電話）0552-3012569（電子信箱）al08＠163．com。

2014-04-04；

2014-07-28)