核酸探針在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用

邵云龍，張萬山

(1.黑龍江省龍江縣廣厚鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)綜合服務(wù)站 161122；2.黑龍江省杜蒙縣大山種羊場 166269)

核酸探針在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用

邵云龍1，張萬山2

(1.黑龍江省龍江縣廣厚鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)綜合服務(wù)站 161122；2.黑龍江省杜蒙縣大山種羊場 166269)

隨著社會經(jīng)濟水平的上升，生物科學(xué)技術(shù)也不斷發(fā)展進步，在各個領(lǐng)域當(dāng)中的應(yīng)用越來越廣泛。在畜禽的疾病診斷過程中，使用生物技術(shù)制備的核酸探針也越來越多，核酸探針具有非常多的優(yōu)勢，幫助畜禽疾病的診斷工作更加精確、可靠。本文主要分析核酸探針的診斷特點及其實際應(yīng)用。

核酸探針；畜禽；疾病診斷；實際應(yīng)用

當(dāng)前，生物醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展進步，在畜禽疾病診斷領(lǐng)域當(dāng)中得到非常廣泛的應(yīng)用，使畜禽疾病的診斷方式發(fā)生巨大轉(zhuǎn)變。使用生物核酸探針技術(shù)對畜禽疾病進行診斷，具有特異性強、敏感度高以及簡單快捷的優(yōu)點，同時還能夠避免由于培養(yǎng)困難或者是混合污染的現(xiàn)象，能夠快速直接的對畜禽的體液、分泌物等進行檢測，不僅為相關(guān)工作人員的工作提供方便，同時對于畜禽疾病早期診斷與控制具有非常重要的意義，幫助獸醫(yī)選擇最佳的方式進行治療，杜絕大面積傳染病的發(fā)生。

1 核酸探針在畜禽疾病診斷中的特點

1.1 特異性強

使用核酸探針進行檢測是基于病原微生物的核酸堿基配對原理，通過核酸序列與標(biāo)本中的另外的核酸發(fā)生互補以及結(jié)合，所以不會發(fā)生雜交的現(xiàn)象，更不會出現(xiàn)假陽性或者是假陰性，所以其特異性非常強，不會發(fā)生交叉反應(yīng)和其他干擾現(xiàn)象。

1.2 靈敏性強

相較于傳統(tǒng)的放射免疫等方式，DNA或者是RNA探針具有更強的靈敏度，能夠檢測出10～12g的抗原含量，在很早以前，美國基因探針公司生產(chǎn)的軍團菌探針就已經(jīng)能夠在0.4mg的肝臟組織中檢測出4000個以上的細(xì)菌。有學(xué)者使用通過生物素標(biāo)記的流產(chǎn)布氏桿菌全基因組的DNA探針能夠在質(zhì)量為1g的大鼠肝混合物當(dāng)中檢測出105個細(xì)菌，同時還能夠檢測出通過試驗接種的小鼠質(zhì)量為1g的組織中存在的107個布氏桿菌。

1.3 檢測速度快

使用常規(guī)的方式需要經(jīng)過病原分離、培養(yǎng)等方式耗費大量的時間才能夠得出檢測結(jié)果，但是使用核酸探針可以在45分鐘之內(nèi)就能夠得到結(jié)果。有學(xué)者使用探針進行斑點免疫印跡雜交測試，在感染初期，家禽體內(nèi)開始血清學(xué)應(yīng)答前能夠檢出體內(nèi)的敗血霉形體，采樣之后最多4天就能夠得到試驗結(jié)果，如果使用培養(yǎng)的方式則需要更長的時間。

1.4 方法簡單

核酸探針檢測能夠?qū)π笄莼铙w、死體甚至是體液和分泌物等進行檢測，不需要進行體外擴增培養(yǎng)，更不需要使用其他設(shè)備輔助觀察，流程非常簡單。

2 核酸探針在畜禽疾病診斷中的實際應(yīng)用

2.1 雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)的檢測

早前有學(xué)者使用生物素對合成寡合苷酸探針進行標(biāo)記，將雞法氏囊組織在硝酸纖維膜上進行印記，然后與被生物素標(biāo)記的探針進行雜交，隨后對人工方式感染雞的機體進行檢測，取得非常滿意的效果。之后又有學(xué)者使用26CI探針進行斑點雜交，對血清1型和2型的不同IBDV實施檢測，結(jié)果顯示探針沒有與病毒發(fā)生交叉反應(yīng)。且該探針檢測病毒與核酸的最小量可以達到1mg，同時能夠檢測出注射疫苗2～3天之后雞體內(nèi)法氏囊病毒以及組織當(dāng)中存在的IBDV。

2.2 雞馬立克氏病毒的檢測

我國生物研究者使用光敏的生物素對特定基因文庫中的L片斷進行標(biāo)記，制備出雞馬立克氏病毒的光敏核酸探針，然后對培養(yǎng)物當(dāng)中的病毒實施檢測，發(fā)現(xiàn)探針對病毒中的血清1型馬立克氏病毒中的DNA分子發(fā)生雜交，而2型和3型都不發(fā)生雜交反應(yīng)。然后使用血清1型和血清2型對雛雞進行接種，在第14天及30天使用斑點雜交法實施病毒DNA的檢測，結(jié)果血清1型的結(jié)果呈現(xiàn)陽性，而血清2型的結(jié)果呈現(xiàn)陰性，證明制備的核酸探針能夠?qū)﹄u馬立克氏病毒的強毒株進行診斷。

2.3 雞減蛋綜合癥病毒的檢測

研究在使用制備的光敏性生物素探針對雞減蛋綜合癥病毒感染的鴨胚尿囊液提取物實時監(jiān)測，結(jié)果能夠證實該探針對于雞減蛋綜合癥病毒具有很強的特異性，同時能夠檢測到至少1pg的雞減蛋綜合癥病毒DNA；但是在正常的鴨胚尿囊液的提取物不會與無質(zhì)粒的受體菌DNA發(fā)生雜交反應(yīng)。

2.4 雞新城疫病毒的檢測

國外的相關(guān)研究人員使用人工合成的寡合核苷酸DVA制備的探針進行實驗，對環(huán)境及其他條件非常嚴(yán)格，然后試試狹縫印跡雜交實驗，結(jié)果顯示該探針能夠識別出被檢出的15個NDV。該探針的序列來源于雞新城疫病毒基因組高度保守區(qū)域，具有非常強的特異性。