HPLC法測(cè)定冠心寧軟膠囊中丹參素的含量

李蕓薈

(天津市河西醫(yī)院，天津 300202)

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HPLC法測(cè)定冠心寧軟膠囊中丹參素的含量

李蕓薈

(天津市河西醫(yī)院，天津 300202)

目的：建立高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定冠心寧軟膠囊中丹參素的含量。方法：色譜柱為Irregular C18柱(250 mm×4.6 mm，10 μm)；流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸(10∶70∶0.3)；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。結(jié)果：丹參素在0.003 6～0.032 4 mg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均回收率98.68%，RSD為1.92%(n=6)。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為冠心寧軟膠囊的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法，冠心寧軟膠囊，丹參素，含量測(cè)定

冠心寧軟膠囊系保心寧膠囊改為軟膠囊制劑而得，組方為丹參、當(dāng)歸、枳殼、三七和生姜，功效活血化瘀、行氣止痛，臨床上用于心絞痛、心律失常、改善冠心病癥狀等[1]。保心寧膠囊(《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》WS3-B-2198-96)僅有化學(xué)反應(yīng)和紫外光譜作為定性鑒別，專屬性差，難以控制其內(nèi)在質(zhì)量。有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)保心寧中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1進(jìn)行含量測(cè)定[2],亦有文獻(xiàn)對(duì)丹參酮ⅡA進(jìn)行了含量測(cè)定[3]。本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)方法采用HPLC法對(duì)冠心寧軟膠囊中丹參素進(jìn)行含量測(cè)定，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為冠心寧軟膠囊的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

UV2000高效液相色譜儀(tsp thermo separation prodicts);SP8800 ternary HPLC pump(Spectra-Physics)。丹參素鈉對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110855-200809，供含量測(cè)定用)，冠心寧軟膠囊(天津市河西醫(yī)院自制，批號(hào)140416、140417、140418)，甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為去離子水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 Irregular C18(250 mm×4.6 mm，10 μm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸(10∶70∶0.3)，流速0.8 ml/min，柱溫35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，進(jìn)樣量20 μl，理論塔板數(shù)以丹參素計(jì)不低于2 500。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取丹參素鈉對(duì)照品約10 mg到250 ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲10 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，配成0.04 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液(相當(dāng)于每1 ml含丹參素0.036 mg)。

2.2.2 供試品溶液 取5粒本品，傾出內(nèi)容物，充分混勻，精密稱定約0.4 g于稱量瓶中，加入精密稱定約1.5 g的硅藻土，拌樣均勻，轉(zhuǎn)移至燒瓶中，加入50%甲醇80 ml，熱回流1 h，放冷，濾過(guò)至100 ml量瓶中，用50%甲醇15 ml洗滌容器、殘?jiān)?、濾紙，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 精密稱取除丹參外的陰性對(duì)照樣品約0.4 g于稱量瓶中，加入精密稱定約1.5 g的硅藻土，加入50%甲醇80 ml，熱回流1 h，放冷，濾過(guò)至100 ml量瓶中，用50%甲醇15 ml洗滌容器、殘?jiān)?、濾紙，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各20 μl，注入液相色譜儀，陰性對(duì)照樣品在丹參素峰相應(yīng)的位置無(wú)峰出現(xiàn)，說(shuō)明陰性對(duì)照樣品無(wú)干擾，見圖1。

2.4 線性關(guān)系考查 精密稱取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、3、5、7和9 ml于10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，取不同濃度的對(duì)照品溶液20 μl進(jìn)樣，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定其峰面積。回歸方程為Y=19 599 625X-1 500.45(r=0.999 9)。結(jié)果表明，丹參素在0.003 6～0.032 4 mg/ml范圍內(nèi)和峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密稱取丹參素對(duì)照品儲(chǔ)備液，加50%甲醇稀釋成丹參素濃度為0.018 mg/ml的溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μl，重復(fù)6次，記錄其峰面積，得RSD為1.26%(n=6)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試品，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依次于0、1、2、4、6、8和24 h進(jìn)樣，測(cè)定RSD為0.47%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.丹參素

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6份，精密稱定，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，分別注入液相色譜儀，測(cè)得RSD為1.7%，重現(xiàn)性好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知丹參素含量的內(nèi)容物200 mg，精密稱定6份，分別加丹參素1 ml(0.866 mg/ml)，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液，測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為98.68%，RSD為1.92%，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 樣品測(cè)定 取3批樣品(每批平行3份)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 樣品處理方法 使用參考文獻(xiàn)方法[4]，本實(shí)驗(yàn)探討了冷浸24 h、超聲1 h、熱回流1 h、索氏提取1 h(已無(wú)色，近提取完全)各兩個(gè)平行樣品。測(cè)定結(jié)果表明，熱回流和索氏提取方法所提丹參素含量相差不多，均可作為樣品處理方法，本實(shí)驗(yàn)采用熱回流作為提取方法。

3.2 溶媒的選擇 采用文獻(xiàn)報(bào)道[5]以甲醇提取并作為溶媒的方法，結(jié)果分離效果并不理想，后經(jīng)查閱文獻(xiàn)[6]，分別采用25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇提取并作為溶媒的方法,并比較結(jié)果，在相同條件下提取，50%甲醇分離效果最佳,故采用50%甲醇為溶媒。

3.3 回流時(shí)間的考查 本實(shí)驗(yàn)比較了不同熱回流時(shí)間(0.5、1和1.5 h)對(duì)提取效率的影響，3種提取時(shí)間測(cè)得的量與時(shí)間成正比，但1 h和1.5 h相差不大，故采用熱回流1 h提取，以節(jié)省時(shí)間。

3.4 溶劑量的選擇 本實(shí)驗(yàn)比較了不同溶劑量對(duì)提取結(jié)果的影響，分別采用50%甲醇40、80和160 ml提取，并分別稀釋至50、100和200 ml并測(cè)定含量，結(jié)果40 ml提取結(jié)果含量較小，另兩種測(cè)定結(jié)果基本一致，故采用80 ml提取并稀釋至100 ml的方法。

1 陳曉麗,陳建宗,呂召學(xué).保心寧片治療冠心病心絞痛的臨床研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2002,18(3):33

2 李海泉.高效液相色譜梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定保心寧片中3種皂苷含量[J].中國(guó)藥業(yè),2011,20(1):34

3 李曉曲,汪霞.反相HPLC法測(cè)定保心寧膠囊中丹參酮ⅡA的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2008,17(2):44

4 羅興平,張彩霞,王峰,等.高效液相色譜法測(cè)定強(qiáng)力救心滴丸中丹參素鈉的含量[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2002,3(4):61

5 黃蘭芷,付超美,胡慧玲,等.HPLC法測(cè)定抗癌顆粒中丹參素納的含量[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2006,29(2):53

6 鄭奇,林琳,覃偉.丹參水溶性成分的提取與純化[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2008,28(5)：45

2015-01-28

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