雞新城疫Ⅱ系弱毒疫苗的檢驗(yàn)與制備注意事項(xiàng)

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司 150069）

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1 疫苗的檢驗(yàn)

安全檢驗(yàn)：將疫苗按實(shí)含組織量10倍稀釋，尿囊內(nèi)接種10日齡雞胚10個(gè)，每胚0.1 mL，接種后24～72 h內(nèi)，雞胚死亡率不超過20%為合格。若2次檢驗(yàn)結(jié)果雞胚均在接種后48 h內(nèi)全部死亡，并確定是由于接種物引起，則該疫苗判為不安全。不能用雛雞再檢，疫苗應(yīng)予報(bào)廢。用確無母源抗體2～7日齡雛雞20只，分成2組，第一組10只，每只鼻孔內(nèi)滴入5倍稀釋疫苗兩滴（約0.05 mL），第二組10只，不接種疫苗，做為對照。2組在同樣條件下分開飼養(yǎng)管理，觀察10日，每組死亡的雛雞，均須做詳細(xì)的尸體剖檢及細(xì)菌檢驗(yàn)。最后結(jié)果，任何一組雛雞不得有5只以上死亡。如2組雛雞死亡數(shù)相等或第一組較第二組死亡數(shù)少時(shí)，疫苗判為合格。如第一組雛雞死亡數(shù)較第二組多，但未超過2只，疫苗亦可判為合格。否則可重檢1次。

效力檢驗(yàn)：用生后1～8個(gè)月的健康雞8只，采血分離血清。做抑制紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)。證明確對新城疫不具免疫力。用5只鼻孔內(nèi)滴入100倍稀釋的疫苗2滴，10～14日后，與另3只對照雞，同時(shí)肌肉注射強(qiáng)毒1 mL。強(qiáng)毒稀釋倍數(shù)，5個(gè)月以下用1～5萬倍；對5個(gè)月以上的雞用1000倍。觀察10～14日，如系用5個(gè)月以下的雞，對照雞應(yīng)全部發(fā)病死亡；系用5個(gè)月以上的雞，對照雞應(yīng)全部發(fā)病并￠

死亡2只；免疫雞須全部健活，疫苗判為合格。否則，可重檢1次。用確知未經(jīng)新城疫苗免疫雞群所產(chǎn)蛋孵育的10日齡胚進(jìn)行檢驗(yàn)，然后將疫苗稀釋成10～6、10～7、10～8三組，每組接種雞胚5個(gè)，每胚0.1 mL，48 h前死亡的雞胚不計(jì)，隨時(shí)取出48～120 h死亡的雞胚。收獲胚液，同組等量混合，至120 h取出活胚逐個(gè)收獲胚液，分別測定紅細(xì)胞凝集價(jià)，1：160以上判為感染，計(jì)算半數(shù)感染量（E I D50），E I D50≥10—7/0.1 mL，疫苗判為合格。否則可重檢1次，或用雞重檢1次。

物理性狀檢驗(yàn)：濕苗為淡白色或淡紅色的澄清液體，在安瓿的底部，可能有少量沉淀物，如發(fā)現(xiàn)液體混濁、變色或有其他異物及有異味者，均應(yīng)廢棄。所有檢驗(yàn)過程及檢驗(yàn)結(jié)果，均須詳細(xì)記錄于專用表冊中。成品留樣按《成品檢驗(yàn)的有關(guān)規(guī)定》進(jìn)行。

2 疫苗的使用

本疫苗對于各種日齡的雞均可使用，但一般用于7日齡以上的雛雞較好。

滴鼻免疫時(shí)用生理鹽水、蒸餾水或冷開水，將疫苗稀釋10倍，用滴管吸取疫苗，滴入雞鼻孔內(nèi)2滴（約0.05 mL）。飲水免疫時(shí)，用冷開水、井水（忌用含氯等消毒劑對疫苗有害物質(zhì)的水）將疫苗稀釋。

疫苗加水稀釋后，應(yīng)放冷暗處，必須當(dāng)天用完。

免疫后7～8天產(chǎn)生免疫力，免疫持續(xù)時(shí)間根據(jù)雞體本身的免疫狀態(tài)和日齡而不同。對雞免疫狀態(tài)監(jiān)測是必要的。

3 疫苗制備時(shí)的注意事項(xiàng)

胎兒病痕：接種后72 h后死亡的雞胚，多為全身充血。72～120 h死亡的，除有全身充血外，在頭、胸、背、翅及趾端出血點(diǎn)；120 h以后死亡的，除有上述病痕外，呈發(fā)育不全、卷曲成團(tuán)、失水干硬等病變。

試驗(yàn)用雞要求：用生后1～8個(gè)月的雞，同批試驗(yàn)雞的年齡、體重、營養(yǎng)狀況等不得有顯著差別。使用前采血，取血清作抑制紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，確證其未感染過雞新城疫，也未經(jīng)預(yù)防注射的，其抑制凝集價(jià)為0，方可使用。

紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)：將毒種用生理鹽水稀釋成不同倍數(shù)，分別加于8支小圓底試管內(nèi)，然后加入紅細(xì)胞。紅細(xì)胞取健康雞血液（每次由心臟采血5～10 mL），以生理鹽┤滌3～5次（用3000轉(zhuǎn)/min，離心洗滌），將血漿、白細(xì)胞等充分洗去，將沉積的紅細(xì)胞用生理鹽水稀釋成100倍懸浮液應(yīng)用。加1%稀釋的紅細(xì)胞后，置于20～30℃，15 min后檢查結(jié)果，以紅細(xì)胞凝集50%的稀釋度作為判定終點(diǎn)。

抑制紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)：采取試驗(yàn)雞的血液少許，分離血清，稀釋成不同倍數(shù)，按下表量加入到數(shù)支試管內(nèi)，然后加入經(jīng)上項(xiàng)方法測定的已知凝集價(jià)的病毒稀釋液。如該病毒經(jīng)上項(xiàng)方法測凝集價(jià)為160倍時(shí)，則按其試管號數(shù)倒退二管的稀釋倍數(shù)，即40倍稀釋，充分振蕩后，靜置5～6 min，再加入紅細(xì)胞。以后檢查及記錄結(jié)果與上項(xiàng)3同。

微量血凝試驗(yàn)：①在微量凝集試驗(yàn)板上，第1～12孔或所需之倍數(shù)孔，用定量針頭，每孔加入生理鹽水1滴（每滴0.025 mL），用稀釋棒蘸取被檢雞胚液1滴，從第一孔起依次作倍數(shù)稀釋，至最后1個(gè)倍數(shù)孔，棄去稀釋棒內(nèi)的1滴。②每孔加入1%雞紅細(xì)胞懸浮液1滴，并設(shè)不加病毒的紅細(xì)胞對照孔，立即在微量振蕩器上搖勻，置室溫30 min左右觀察結(jié)果。③紅細(xì)胞凝集50%的稀釋度，作為判定血凝價(jià)終點(diǎn)。注：1%雞紅細(xì)胞制備及要求同試管法。

雞新城疫Ⅱ系弱毒疫苗的檢驗(yàn)與制備注意事項(xiàng)

谷 琳，馬萌萌