動(dòng)物炭疽病的血清學(xué)診斷

（黑龍江省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 150069）

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1 沉淀反應(yīng)

當(dāng)尸體腐敗、致使細(xì)菌學(xué)診斷得不到正確的結(jié)果，以及檢查大量的畜產(chǎn)品時(shí)，可進(jìn)行血清學(xué)沉淀反應(yīng)診斷。炭疽沉淀原（炭疽菌溶解產(chǎn)物）存在于炭疽尸體的組織中，具有極高的耐酸和耐腐敗的特性，炭疽沉淀原對(duì)炭疽免疫血清（沉淀素抗體）可發(fā)生特異性的沉淀現(xiàn)象，甚至死后一年半以上的腐敗炭疽尸體，仍有沉淀原存在。試驗(yàn)證明，病畜在死前20～22 h血液中即有沉淀原出現(xiàn)，因此本法也可應(yīng)用與生前診斷，并且由于本法操作簡單，短時(shí)間內(nèi)即可得出結(jié)果，所以在生前診斷方面，可能比鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)更具有應(yīng)用的價(jià)值。

為了使炭疽沉淀反應(yīng)的結(jié)果正確可靠，必須特別注意材料的采取、沉淀原的浸出、炭疽沉淀素血清的質(zhì)量以及其他可能影響結(jié)果的因素等。由于炭疽尸體各部組織中沉淀原的含量不同，因此其反應(yīng)的表現(xiàn)也不一樣。新鮮的組織材料，以脾臟的含量最高，制成2560倍稀釋的浸出液仍可出現(xiàn)陽性反應(yīng)。而鮮皮及肌肉則含量很低，患最急性炭疽死亡的動(dòng)物有時(shí)呈陰性反應(yīng)。各組織器官沉淀原的含量，與其所含炭疽桿菌的數(shù)量成正比例，故采取材料以脾、腎、肝及血液等為宜。用這些材料做沉淀反應(yīng)，1～2 min即可觀察到結(jié)果，如檢驗(yàn)材料為鮮皮或肌肉時(shí)，則先置于37℃中2～3天或更長的時(shí)間，使其中的細(xì)菌增殖，以增加沉淀原的含量，待迅速干燥（必須注意保證安全），然后再進(jìn)行檢驗(yàn)。為了操作安全常將已干燥的被檢材料先高壓消毒（避免進(jìn)入水分，否則沉淀原會(huì)溶于水中而受損失）。皮樣須在消毒后進(jìn)行浸出。如果鮮皮或濕皮沒有事先干燥就高壓消毒，則皮樣會(huì)形成膠體而不易得到透明的浸出液，皮張浸出液須完全透明，方能進(jìn)行沉淀反應(yīng)。為了容易使浸出液透明，皮張常用冷浸法，使用的生理鹽┫加入0.3%～0.5%的石碳酸防腐。以皮張和肌肉進(jìn)行沉淀反應(yīng)，須觀察1～10 min方能保證診斷的正確性。

由于一定pH值的溶液可使診斷血清中的蛋白物質(zhì)發(fā)生凝固或絮狀沉淀，所以用于沉淀反應(yīng)的浸出液以接近中性的為宜。據(jù)經(jīng)驗(yàn)，浸出液的pH值在5～8不會(huì)影響沉淀反應(yīng)的結(jié)果，超出這個(gè)限度就會(huì)出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，影響判斷的正確性。

被檢材料為鹽干皮或鹽浸皮時(shí)，則浸出液中含鹽過多，比重加大，不能與血清重積。一般都用透析方法除去浸出液中多余的鹽分，但此法手續(xù)較繁且延長了檢驗(yàn)時(shí)間。我國獸醫(yī)工作者試驗(yàn)證明，在炭疽沉淀素中加入4%的食鹽，即可改變血清的比重，使鹽皮抗原液能重積于其上，仍能得到正確的結(jié)果。一般未經(jīng)過鹽處理的皮張的反應(yīng)，雖在10～15 min即可觀察到結(jié)果，但這種反應(yīng)仍須延長至20 min。

溫度對(duì)沉淀反應(yīng)出現(xiàn)的速度也有影響，于16～30℃10 min所達(dá)到的反應(yīng)程度，若低于16℃，則須延長至15 min才能達(dá)到，故一般以20℃室溫為宜。

炭疽沉淀素血清的特異性對(duì)沉淀反應(yīng)的準(zhǔn)確性有很大的關(guān)系，特異性不高的血清，常對(duì)非炭疽材料出現(xiàn)類屬反應(yīng)，招致診斷的錯(cuò)誤。用標(biāo)準(zhǔn)炭疽抗原（5萬倍稀釋）檢驗(yàn)時(shí)，于30～60 s內(nèi)出現(xiàn)的陽性反應(yīng)，對(duì)干燥炭疽皮抗原（10倍稀釋）于1～2 min發(fā)生陽性反應(yīng)，而對(duì)健康皮抗原（10倍稀釋）于15 min不發(fā)生反應(yīng)，對(duì)類炭疽桿菌及枯草菌均呈陰性反應(yīng)。

2 熒光抗體快速診斷法

本法是一種特異性強(qiáng)、檢出率高、方法簡便而快速的診斷方法，可對(duì)可疑炭疽病死畜的血液或頜下淋巴結(jié)、扁桃體的病料，利用熒光抗體法檢查，只需1～2 h就可得出結(jié)果。將病料涂片、干燥、固定后用異硫氰酸熒光標(biāo)記提純的抗炭疽莢膜血清抗體（γ—球蛋白），在炭疽莢膜熒光抗體染色后，用熒光顯微鏡觀察。具有莢膜的炭疽菌，菌體高度膨大，菌體莢膜呈明亮黃綠色熒光或菌體周圍呈明亮的黃綠色熒光環(huán)，熒光亮度強(qiáng)，很易辨認(rèn)。

3 炭凝集反應(yīng)

據(jù)報(bào)道，有人曾研究過應(yīng)用平板炭疽凝集反應(yīng)檢出炭疽芽孢的方法，結(jié)果初步認(rèn)為對(duì)檢查炭疽芽孢污染的標(biāo)本是直接、快速、準(zhǔn)確的診斷方法。制備炭疽炭血清的方法是：將用pH值為7.2磷酸緩沖液40倍稀釋的未提純的抗炭疽血清（12 mL）以60℃水浴加濕處理30 min后，加入1 g濕木炭末在56℃的水浴中致敏10 min，即成炭疽炭血清。反應(yīng)操作時(shí)，先將可疑含炭疽桿菌芽孢的被檢標(biāo)本倍比稀釋液各0.1 mL分別滴于玻板上，并以生理鹽水、磷酸緩沖液各0.1 mL為對(duì)照，然后分別加入炭疽炭血清各0.05 mL，混勻后，在室溫下靜置1～20 min，在對(duì)照為陰性反應(yīng)的條件下判定結(jié)果。結(jié)果此法可檢出每毫升含有39000個(gè)純炭疽桿菌芽孢的培養(yǎng)物和每毫升含40萬個(gè)以上炭疽芽孢而混有雜菌的污染標(biāo)本。

動(dòng)物炭疽病的血清學(xué)診斷

趙曉春，王寧寧，李 鵬