DC和CIK免疫細(xì)胞及其在原發(fā)性肝癌治療中的應(yīng)用進(jìn)展

喻曉　(長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434020)

孫振綱　(長江大學(xué)荊州臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市中心醫(yī)院肝膽外科，湖北 荊州 434020)

?

DC和CIK免疫細(xì)胞及其在原發(fā)性肝癌治療中的應(yīng)用進(jìn)展

喻曉(長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434020)

孫振綱(長江大學(xué)荊州臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市中心醫(yī)院肝膽外科，湖北 荊州 434020)

[摘要]樹突狀細(xì)胞(DC)是目前功能最強(qiáng)的免疫提呈細(xì)胞，能將抗原信息提呈給淋巴細(xì)胞，刺激初始T淋巴細(xì)胞，完成T細(xì)胞免疫應(yīng)答的初始階段。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)是一種新型的免疫活性細(xì)胞，CIK 增殖能力強(qiáng)，細(xì)胞毒作用強(qiáng)，具有一定的免疫特性。DC聯(lián)合CIK細(xì)胞體外共同培養(yǎng)后回輸體內(nèi)療法已成為當(dāng)前治療腫瘤的熱點(diǎn)?，F(xiàn)綜述這一療法在原發(fā)性肝癌中的應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞]肝癌；樹突狀細(xì)胞；細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞

原發(fā)性肝癌(HCC)已成為世界第二大肝癌，是我國最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在我國相關(guān)死亡率僅次于肺癌[1]。手術(shù)切除和肝移植是目前對于早期肝癌最有效的手段，但因原發(fā)性肝癌發(fā)病隱匿，且肝癌具有多中心發(fā)生的特點(diǎn)，癌細(xì)胞容易肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，傳統(tǒng)的手術(shù)、化療、放療單一治療效果不佳。如何鞏固肝癌介入治療的效果，減少復(fù)發(fā)，延長生存期是目前治療的重點(diǎn)和難點(diǎn)。1985年Rosenberg首次報(bào)道成功應(yīng)用人外周血淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)IL-2因子激活后回輸體內(nèi)的治療方法[2]。經(jīng)數(shù)十年曲折發(fā)展，體內(nèi)回輸免疫細(xì)胞的生物免疫療法，是目前國內(nèi)外繼手術(shù)、放療、化療之外的第四種重要的腫瘤治療方法，為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)、消除患者體內(nèi)殘留的腫瘤細(xì)胞、改善晚期腫瘤患者的生存質(zhì)量提供了新的治療途徑。目前細(xì)胞免疫治療已研究應(yīng)用有NK、LAK、CTL、TIL、DC等細(xì)胞療法[3]，現(xiàn)就DC聯(lián)合CIK細(xì)胞體外共同培養(yǎng)后回輸體內(nèi)這一療法在原發(fā)性肝癌的治療進(jìn)行一綜述。

1DC細(xì)胞

樹突狀細(xì)胞(DC)是由steimman1973年首次在小鼠的外周淋巴組織中發(fā)現(xiàn)的一群異形細(xì)胞[4]，因其形如樹突狀而得名，已證實(shí)是目前功能最強(qiáng)的免疫提呈細(xì)胞，來源于多能造血干細(xì)胞，能將抗原信息提呈給淋巴細(xì)胞，刺激初始T淋巴細(xì)胞，完成T細(xì)胞免疫應(yīng)答的初始階段。但其受到MHC分子限制。正常體內(nèi)DC細(xì)胞處于非成熟狀態(tài)，受到細(xì)胞因子刺激后，能分化成熟。成熟DC細(xì)胞的MHC分子、粘附分子表達(dá)明顯升高，抗原提呈和免疫誘發(fā)應(yīng)答能力較強(qiáng)[5]。有研究表明，成熟DC細(xì)胞表型在CD80+、CD86+、CD83+明顯高于未成熟型DC細(xì)胞[6]。劉敏豐等[7]研究發(fā)現(xiàn)在加用DC疫苗治療胰腺癌患者的外周血中，CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+及NK細(xì)胞表達(dá)水平明顯上升(P<0.05)，檢測血清中IL-2、IL-12、IFN-r水平也顯著變化。

2CIK細(xì)胞

細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞(CIK)是由sclimidit-wolf提出[8]，其起源于外周血單核淋巴細(xì)胞，主要為CD3+CD56+T細(xì)胞，受多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)，通過產(chǎn)生IFN-r、TNF-2、IL-2等細(xì)胞因子發(fā)揮抗癌作用。也有研究發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞能夠分泌穿孔蛋白與靶細(xì)胞結(jié)合，誘導(dǎo)靶細(xì)胞溶解是CIK細(xì)胞殺傷作用途徑[9]。CIK細(xì)胞殺瘤活性高、增殖快、不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)在臨床上應(yīng)用較為成熟。杜清友等[10]應(yīng)用肝癌系BEL-7402荷瘤小鼠試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CIK殺瘤活性高于LAK或PBMC(外周血單個(gè)核細(xì)胞)，同時(shí)在體外殺傷原代肝癌細(xì)胞研究中證實(shí)，在不同效靶比中，CIK殺傷活性優(yōu)于PBMC。余文昌等[11]在肝癌術(shù)后補(bǔ)充動(dòng)脈插管化療栓塞術(shù)后聯(lián)合細(xì)胞免疫治療研究發(fā)現(xiàn)，研究組總生存率明顯優(yōu)于對照組(P<0.05)，是減少復(fù)發(fā)，延長患者生存期的有效方法之一。上海交通大學(xué)Ma等[12]對CIK治療原發(fā)性肝癌的隨機(jī)Ⅱ期和Ⅲ期臨床試驗(yàn)薈萃分析顯示：CIK治療組原發(fā)性肝癌患者在中位生存率、生活質(zhì)量方面明顯獲益，在降低HBV-DNA水平載量和AFP水平也明顯優(yōu)于其他治療組(P<0.01)。

3DC-CIK

人們發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞對機(jī)體免疫監(jiān)視有逃逸現(xiàn)象，其機(jī)制尚不明確，可能與腫瘤細(xì)胞MHCⅠ類分子低下表達(dá)、腫瘤細(xì)胞抗原缺失有關(guān)系。成熟DC細(xì)胞抗原提呈能力強(qiáng)，能激活機(jī)體抗腫瘤免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)T細(xì)胞的免疫功能。CIK 細(xì)胞與 DC 聯(lián)合培養(yǎng)可以提高 CIK的細(xì)胞殺傷力，也能彌補(bǔ) DC細(xì)胞的MHC限制性的缺點(diǎn)。因此有學(xué)者將DC聯(lián)合CIK共同體外培養(yǎng)治療白血病，獲得滿意效果，之后DC細(xì)胞聯(lián)合CIK細(xì)胞免疫治療因殺傷腫瘤細(xì)胞強(qiáng)、較好清除殘留腫瘤細(xì)胞、增殖能力強(qiáng)等優(yōu)勢成為新的腫瘤免疫治療方法。有研究[13]表明:DC-CIK聯(lián)合培養(yǎng)后CIK細(xì)胞增殖能力明顯高于單純CIK治療(P<0.05), CD3+CD8+、CD3+CD56+水平也明顯增加，在經(jīng)過3d培養(yǎng)后，治療組CIK細(xì)胞分泌IFN-r、IL-12的水平也高于對照組。其他研究[14~16]也表明DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)后，CIK細(xì)胞增殖能力、殺瘤活性、CD3+CD8+、CD3+CD56+表達(dá)水平優(yōu)于單純的CIK細(xì)胞培養(yǎng)。Hui Li等[17]在非小細(xì)胞肺癌患者聯(lián)合應(yīng)用DC-CIK免疫治療后，2年總生存率達(dá)到(94.7%±3.6%)。2012年發(fā)表的一項(xiàng)研究顯示[18],在137例腎細(xì)胞癌術(shù)后轉(zhuǎn)移患者中，雖然DC-CIK治療組在總生存率和IFN-α組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但副作用明顯少于干擾素治療組，DC-CIK治療方案的有效性、可行性和安全性在臨床上進(jìn)一步得到證實(shí)。

4DC-CIK在HCC的應(yīng)用

乙肝病毒(HBV)水平載量與原發(fā)性肝癌的發(fā)生率、生存期及死亡率有密切相關(guān)因素。MingShi等[19]在HBV感染患者外周血中發(fā)現(xiàn)CD4+、CD8+明顯減少，而細(xì)胞免疫治療能通過CIK細(xì)胞分泌 IFN-G、TNF-2、IL-2、IL-4等細(xì)胞因子，減少HBV-DNA水平載量。故在HBV感染HCC患者中檢測HBV變化可以作為免疫細(xì)胞治療效果判斷依據(jù)。HCC患者外周血DC表面HLA-DR、B7表達(dá)水平低于正常人，免疫活性能力也減低[20]。傳統(tǒng)的手術(shù)、介入治療對體內(nèi)殘留的肝癌細(xì)胞作用有限，而機(jī)體對腫瘤免疫監(jiān)控能力減弱，腫瘤細(xì)胞能逃脫形成遠(yuǎn)處擴(kuò)散，因此提高腫瘤患者的免疫能力應(yīng)值得關(guān)注。Shi m等[21]在HCC患者進(jìn)行DC-CIK治療2周后發(fā)現(xiàn)，患者外周血CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+水平明顯上升。Tao Yang等[22]報(bào)道在HCC患者應(yīng)用DC-CIK細(xì)胞免疫治療后，外周血AFP由(236.55±48.38)ng/ml下降到(141.37±27.36)ng/ml，CEA也從(46.82±9.35)ng/ml下降到(22.54±4.06)ng/ml。東南大學(xué)陳寶安等[23]研究顯示，DC-CIK聯(lián)合培養(yǎng)能顯著提高CIK細(xì)胞對SMMC-7721肝癌細(xì)胞的殺傷力，在CD3+CD8+、CD3+CD56+表達(dá)水平上，DC-CIK也高于單純CIK細(xì)胞(P<0.05)。2011年P(guān)ei Zhou等[24]進(jìn)行了一項(xiàng)臨床Ⅰ期研究，觀測經(jīng)皮微波治療消融術(shù)(PMWA)聯(lián)合細(xì)胞免疫治療方案對肝癌患者病毒載量和外周T淋巴細(xì)胞安全性和影響，他們發(fā)現(xiàn)約57.14%的患者外周病毒載量下降，CD4+CD25hing調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的百分比明顯下降，CD8+CD28-效應(yīng)性T細(xì)胞在治療1月后明顯增加，但治療6個(gè)月后無顯著差距。

DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合體外培養(yǎng)回輸方法，既有DC細(xì)胞高效抗原信息提呈作用，也有CIK細(xì)胞強(qiáng)殺傷腫瘤細(xì)胞能力，聯(lián)合傳統(tǒng)手術(shù)、化療、放療，能增強(qiáng)患者免疫功能，殺傷殘留腫瘤細(xì)胞，能明顯提高患者生存質(zhì)量和生存率[25]。DC-CIK細(xì)胞免疫治療在安全性方面主要是發(fā)熱、皮疹，一般對癥處理后癥狀可緩解。應(yīng)敏剛等[26]在145例晚期腫瘤患者中聯(lián)合應(yīng)用DC-CIK細(xì)胞免疫治療，觀察共出現(xiàn)發(fā)熱35例、皮疹15例和一過性寒戰(zhàn)5例，未見其他嚴(yán)重不良反應(yīng)。

DC-CIK細(xì)胞體外共同培養(yǎng)體內(nèi)回輸?shù)纳锩庖忒煼?，是繼傳統(tǒng)手術(shù)、放療、化療之外的另一種重要的腫瘤治療方法，特別在原發(fā)性肝癌的治療中，為消除患者體內(nèi)殘留的腫瘤細(xì)胞、改善患者的生存質(zhì)量、延長總生存率提供了新的治療途徑。但細(xì)胞免疫治療在治療標(biāo)準(zhǔn)和治療周期方面仍未達(dá)到統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)[27]，仍值得進(jìn)一步探索。

[參考文獻(xiàn)]

[1]馬學(xué)斌，馬驄.肝癌的CIK細(xì)胞免疫治療研究進(jìn)展[J].臨床肝膽病雜志，2010，26(6)：658~662.

[2]Rosenberg S A，Lotie M T，Leitman S，et al.Observation on the systemaic adminsstration of acctologous activated killer cells and recombinant infer leulaon-2 to perfients with matastadic cance[J].New Een Med J,1985，313(151)：1485.

[3]張毅，Michael Nishimora.腫瘤的細(xì)胞免疫治療[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011，46(2)：165~169.

[4]Ralph M，Steinmans Z，Anvil A.Cohn identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice[J].The Journal of Experimental Medicine，1973，137：1142~1162.

[5]王惠成，馮毅，戴國華.CIK細(xì)胞免疫治療原發(fā)性肝癌的研究進(jìn)展[J]. 國際消化病雜志，2011，31(4)：223~227.

[6]Zhou P, Liang P, Dong B W,et al .Phase I dimical study of combinoction therapy with microware ablation and cellular immunothraapy in hepatocelluler cartmoma[J].J Cancer Biolog &Therapy，2011，11(5)：450~456.

[7]劉敏豐，顧元龍，崔豐完.樹突狀細(xì)胞疫苗對胰腺癌患者免疫功能的影響[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2010，30(11)：1649~1652.

[8] Schmidt-Wolf I G，Negrin R S，Kiem H P,et al. Use of a SCID mouse /human lymphoma model to evaluate cytokine- induced killer cells with potent antitumor cell activity[J].Exp Med，1991，174(1) : 139~149.

[9] Ortaldo J R，Winkler R T，Yagita H,et al. Comparative studies of CD3+and CD3’CD56+celIs：examination of morphology，function，T cell receptor rearrangement and pore forming protein expression[J].Cellular Immunology，1991，136：486~495.

[10]杜清友，劉明旭，王方強(qiáng)，等.CIK細(xì)胞體內(nèi)外抗肝癌細(xì)胞作用[J].中國癌癥雜志，2001，8(4):325~330.

[11]余文昌，葉韻彬，周東，等.肝癌術(shù)后補(bǔ)充動(dòng)脈插管化療栓塞術(shù)聯(lián)合細(xì)胞免疫治療對復(fù)發(fā)率及生存率的影響[J].微創(chuàng)醫(yī)學(xué)，2009，4(5)：459~461.

[12]Ma Y,Xu Y C, Lei T,et al.Cytokine-induced killer (CIK) cell therapy for patients with hepatocellular carcinoma: efficacy and safety[J]. Exp Hematol Oncol,2012, 1：11.

[13]Wei X C, Zhai X H, Zhao W L, et al.Research on the biological activity and anti-tumor offect against lymphoma cells of DC-CIK cells[J].Chinese-German Journal of clinical oncology,2008，7(11):666~669.

[14]Zhang J P, Mao C G, Han Y P,et al.The clinical effects of DC-CIK cells combined with chemotherapy in the treatment of advanced NSCLL[J].Chinese-Geroman Journal of clinical oncology,2012，11(1):67~71.

[15]Wang Q J，Wang H，Pan K, et al.Comparatire study on anti-tumor immune response of autologous cytokine-induced killer(CIK)cells，dendritic cells(DC-CIK)，and semi-allogentic DC-CIK[J].Chinese Journal of cancer，2012，29(7):641~648.

[16] Angena M,Sabing R,Marie L T,et al. Enhanced lytic activity of cytokine-induced killer cells against multiple myeloma cells after coculture withidiotype—pulseddendritic cells[J].Haematologica，2001，86(10)：1029~1037.

[17] Li H, Wang C L, Yu J P,et al.Pendritic cell-activated cytokine-induced killer cells enhance the anti-tumor effect of chemotherapy on non-small cell lung cancer in patients after surgery[J].Cytotherapy,2009，11(8):1076~1083.

[18]Zhan H L, Gao X, Pu X Y, et al. A randomized controlled trial of postoperative tumor lysate-pulsed dendritic cells and cytokine-induced killer cells immunotherapy in patients with localized and locally advanced renal cell carcinoma[J]. Chinese Medical Journal，2012，125(21):3771~3777.

[19] Shi M, Fu J, Shi F, et al.Viretl supperecssion correlates with dendritic cell restoration in chromic heptalitis B-patients with autologeus cytokine-induced killer cell transfusion[J].Liver international,2009，29(3)：466~473.

[20] 李明松，袁愛力.肝癌患者外周血樹突狀細(xì)胞免疫功能的研究[J].現(xiàn)代消化病及內(nèi)鏡雜志，1997，2(4)：307~309.

[21]Shi M，Zhang B，Tang Z R,et al.Autologous cytokine-induced killer cell therapy in clinical trial phase I is safe in patients with primary hepatocellular carcinoma[J].Word journal of Gastroenteroloay,2004，10(8):1146~1151.

[22] Yang T, Xiang Y, Li Y H,et al.Clinical study of cotredt ment with DC-CIK cells for advanced solid carcinomas[J].Chinse-Germam Journal of clinical oncology，2011，10(6)：353~359.

[23]陳寶安，李曼，孫載陽，等.DC聯(lián)合CIK共培養(yǎng)對肝癌細(xì)胞殺傷活性的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2006，14(3)：543~546.

[24]Zhou P, Liang P, Dong B W, et al. Phase I clinical study of combination therapy with microwave ablation and cellular immunotherapy in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Biology & Therapy ,2011，11(5)：450~456.

[25]應(yīng)敏剛，鄭秋仁，陳奕貴，等.CIK聯(lián)合DC細(xì)胞聯(lián)合治療145例晚期惡性實(shí)體瘤[J].福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，41(3)：218~221.

[26]高岱清，劉淑貞，趙鵬，等.惡性腫瘤術(shù)后DC聯(lián)合CIK治療的臨床觀察[J].中國腫瘤防治雜志，2009，16(3)：222~225.

[27]任秀寶.關(guān)于腫瘤免疫治療療效評價(jià)的思考[J].中國腫瘤生物治療雜志，2011，18(1)：7~10.

[編輯]何勇

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號]1673-1409(2015)06-0082-03

[中圖分類號]R735.7

[作者簡介]喻曉(1986-)，男，碩士生，主要從事肝膽外科研究工作；通信作者：孫振綱，669210966@qq.com。

[基金項(xiàng)目]湖北省醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才培養(yǎng)工程專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)資助(鄂衛(wèi)生計(jì)生發(fā)[2013]4號文)。

[收稿日期]2015-01-04

[引著格式]喻曉,孫振綱.DC和CIK免疫細(xì)胞及其在原發(fā)性肝癌治療中的應(yīng)用進(jìn)展[J].長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版) ,2015,12(6):82~84.