褪色光度法測(cè)定硫酸慶大霉素

高俊杰，趙瑞華，姜金波

(沈陽理工大學(xué) 環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，遼寧 沈陽 110159)

褪色光度法測(cè)定硫酸慶大霉素

高俊杰，趙瑞華，姜金波

(沈陽理工大學(xué) 環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，遼寧 沈陽 110159)

實(shí)驗(yàn)研究了硫酸慶大霉素(GM)與剛果紅(CR)反應(yīng)生成離子締合物的吸收光譜。在pH=6.50的介質(zhì)中，剛果紅與硫酸慶大霉素反應(yīng)生成離子締合物，使剛果紅溶液褪色，在499nm處測(cè)其吸光度值，褪色吸光度值與硫酸慶大霉素的含量有關(guān)，從而建立了測(cè)定硫酸慶大霉素的褪色分光光度法。在最佳反應(yīng)條件下，硫酸慶大霉素含量在0.25～5 μg/mL范圍內(nèi)遵守比爾定律，檢出限0.111μg/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.61%，剛果紅與硫酸慶大霉素反應(yīng)的絡(luò)合比為3∶1。

硫酸慶大霉素；剛果紅；分光光度法

抗生素類藥物是用于人類和獸類疾病治療的最常用藥物，硫酸慶大霉素就是一種氨基糖苷類抗生素，具有水溶性好、抗菌譜廣、細(xì)菌耐藥性低、血漿蛋白結(jié)合率低、用藥方便和價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)，是臨床上重要的抗感染藥物[1]。硫酸慶大霉素含量的測(cè)定方法主要有氣相色譜(GC)法、質(zhì)譜法(MS)[2]、 分光光度法[3-5]等。其中分光光度法以儀器廉價(jià)、操作簡(jiǎn)便及分析快速等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)在藥物分析中得到了較多的應(yīng)用[6-7]。本文通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，剛果紅與硫酸慶大霉素反應(yīng)生成離子締合物，使剛果紅溶液褪色，其褪色吸光度值與硫酸慶大霉素的含量有關(guān)，由此建立了褪色光度法測(cè)定硫酸慶大霉素的新方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)、pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

硫酸慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/mL。剛果紅溶液濃度為200μg/mL，BR緩沖溶液。

所用的試劑均為分析純，蒸餾水為一次蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在10mL比色管中，依次加入pH=6.50的BR緩沖溶液1.50ml、剛果紅溶液1.00mL、一定量的慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用蒸餾水定容，搖勻。反應(yīng)30min后用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)499nm處，以不加慶大霉素為試劑空白，測(cè)定二者的差值ΔA。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

分別吸取1.00mL剛果紅溶液和剛果紅與硫酸慶大霉素的混合溶液，置于10mL比色管中蒸餾水定容到刻度，測(cè)其吸收光譜，如圖1所示。

圖1 剛果紅吸收光譜

由圖1可知，本實(shí)驗(yàn)的最大吸收波長(zhǎng)為499nm，硫酸慶大霉素會(huì)使剛果紅溶液褪色，吸光度值減小。

2.2 適宜的反應(yīng)條件

2.2.1 緩沖溶液pH值的選擇

按照實(shí)驗(yàn)方法，在緩沖溶液不同的pH值下測(cè)定，如圖2所示，發(fā)現(xiàn)當(dāng)pH值在5到7的范圍內(nèi)，吸光度最大。經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，確定該實(shí)驗(yàn)pH值為6.50。

圖2 不同pH值的吸光度值

2.2.2 緩沖溶液用量的選擇

在10mL比色管中分別加入不同量pH值為6.50的緩沖溶液，然后按照實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定，如圖3所示，當(dāng)加入量大于1.5mL時(shí)，反應(yīng)吸光度穩(wěn)定。所以本實(shí)驗(yàn)緩沖溶液的加入量為1.5mL。

圖3 不同緩沖溶液用量的吸光度值

2.2.3 顯色劑用量的選擇

按照實(shí)驗(yàn)方法，在不同顯色劑用量條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如圖4所示。當(dāng)顯色劑量為1.5mL時(shí)，吸光度最大，但是經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)可知，1.5mL時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性差，而當(dāng)顯色劑加入量為1.0mL時(shí)，溶液不僅褪色明顯而且相關(guān)系數(shù)大。綜上，顯色劑用量選擇1.0mL。

2.2.4 反應(yīng)溫度的選擇

由于反應(yīng)溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有較大的影響，按照實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定適宜的反應(yīng)溫度，結(jié)果表明，當(dāng)溫度在40℃以內(nèi)，吸光度變化比較小，所以該實(shí)驗(yàn)選擇在室溫下進(jìn)行。

2.2.5 反應(yīng)時(shí)間的選擇

實(shí)驗(yàn)過程中，反應(yīng)時(shí)間會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有較大影響，按照實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果表明，當(dāng)時(shí)間超過25min后，反應(yīng)吸光度趨于穩(wěn)定，故反應(yīng)時(shí)間選擇30min。

圖4 不同顯色劑用量的吸光度值

2.2.6 反應(yīng)物的加入順序?qū)Ψ磻?yīng)的影響

考慮到反應(yīng)物的加入順序會(huì)對(duì)反應(yīng)造成影響，按照實(shí)驗(yàn)方法，分別按不同順序加入藥品，數(shù)據(jù)表明，當(dāng)藥品加入順序?yàn)椋壕彌_溶液、顯色劑、硫酸慶大霉素時(shí)，吸光度最大。所以本實(shí)驗(yàn)藥品的加入順序?yàn)榫彌_溶液、顯色劑、硫酸慶大霉素。

2.2.7 絡(luò)合物組成的測(cè)定

試驗(yàn)通過摩爾比法可測(cè)得硫酸慶大霉素與剛果紅反應(yīng)的絡(luò)合比大約為3∶1。

2.3 工作曲線及檢出限

在選定的最佳條件下，按照實(shí)驗(yàn)方法改變硫酸慶大霉素的加入量測(cè)定吸光度值并繪制工作曲線。硫酸慶大霉素測(cè)定含量在0.25～5.00μg/mL的范圍內(nèi)其含量與吸光度成良好的線性關(guān)系，即該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.1271x+0.0704,R2=0.9952，檢測(cè)限為0.111μg/mL。

2.4 共存物質(zhì)的影響

按照實(shí)驗(yàn)方法，加入不同濃度的共存物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。在硫酸慶大霉素的存在量為2.50μg/mL，相對(duì)誤差在±5%時(shí)，下列物質(zhì)(以倍數(shù)計(jì))不干擾測(cè)定:pb2+(0.06)；Mn2+(1)；Ba2+(3)；Mg2+、Fe3+(5) ；草酸鈉 (25)；Na+、 K+、磷酸根、D-果糖、醋酸根、葡萄糖、組氨酸、硫酸根、尿素、L-精氨酸、硼酸根、卵蛋白、檸檬酸銨、檸檬酸鈉、蘇氨酸 (500)。由數(shù)據(jù)可看出，除部分金屬對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾較大，其余氨基酸、糖以及酸根離子對(duì)實(shí)驗(yàn)均無干擾。由于藥物中很少有金屬離子存在，故本方法有良好的選擇性。

3 樣品分析

取不同廠家的硫酸慶大霉素注射液，分別置于100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋到刻度，搖勻。再取配制好的上述溶液5mL置于500mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋到刻度，搖勻。此為樣品溶液，按照實(shí)驗(yàn)方法對(duì)其進(jìn)行分析測(cè)定，并做加標(biāo)回收率測(cè)定，結(jié)果如表1所示。

表1 樣品測(cè)定數(shù)據(jù)(n=8)

4 結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)確定了一種測(cè)定硫酸慶大霉素含量的新方法：剛果紅-硫酸慶大霉素褪色分光光度法。該方法是利用剛果紅與硫酸慶大霉素在適宜的條件下反應(yīng)，使剛果紅褪色，測(cè)定其褪色吸光度值，通過測(cè)定體系的褪色吸光度值來確定硫酸慶大霉素的含量。應(yīng)用此方法測(cè)定市售注射液中硫酸慶大霉素含量，操作簡(jiǎn)單快速，靈敏度高，并且具有良好的選擇性。該方法可以應(yīng)用于常規(guī)的硫酸慶大霉素含量的分析。

[1]趙敏.氨基糖苷類抗生素的發(fā)展現(xiàn)狀和展望[J].中國(guó)抗生素雜志，1999,24(4):319-320.[2]楊利紅,胡昌勤,劉文英.14種氨基糖苷類抗生素質(zhì)譜分析[J].藥物分析雜志,2006,26(8):1050-1053.[3]王洪海.可見分光光度法直接測(cè)定藥物青藤堿[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2012,29(5):2988-2994.

[4]金迎春,敖登高娃.甲酚紅褪色分光光度法測(cè)定芬布芬的研究及其應(yīng)用[J].化學(xué)研究與應(yīng)用,2011,23(1):77-81.

[5]黃亞勵(lì),徐紅.署紅Y分光光度法測(cè)定硫酸慶大霉素[J].化學(xué)與生物工程,2007,24(5):77-78.

[6]徐紅,劉紹璞,羅紅群.堿性二苯基萘基甲烷染料褪色分光光度法測(cè)肝素[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào)，2002,23(12):216-218.

(責(zé)任編輯：馬金發(fā))

Fading Spectrophotometric Determination of Gentamicin Sulfate

GAO Junjie,ZHAO Ruihua,JIANG Jinbo

(Shenyang Ligong University,Shenyang 110159,China)

The absorp tion spectrum of ion-association complex produced by the reacticn of gentamicin sulfate(GM)and Congo red(CR)is studied.In the medium of pH=6.50,Congo red reacts with gentamicin sulfate to form ion association complex,which causes the fading of Congo red solution.The absorbance value of fading is related to the content of gentamicin sulfate.Thus,according to this method fading spectrophotometric for the determination of gentamicin sulfate is established.Under the optimal conditions,Beer′s law was obeyed in the range of GM concentration of 0.25～5 μg/mL.The detection limit is 0.111μg/mL and the relative standard deviation is 1.61%.The complexation ratio of Congo red with gentamicin sulfate reactions is 3∶1.This method is used to determine the content of gentamicin sulfate injection with satisfactory results.

gentamicin sulfate;Congo red;spectrophotometry

2014-05-12

高俊杰(1962—)，男，教授，研究方向：光譜分析.

1003-1251(2015)03-0050-03

O657.3

A