子宮腺肌病患者子宮內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1表達(dá)變化及意義

任紅英，黃玉琴，周宇涵，李明群，洛若愚(武漢大學(xué)人民醫(yī)院，武漢430060)

子宮腺肌病患者子宮內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1表達(dá)變化及意義

任紅英，黃玉琴，周宇涵，李明群，洛若愚
(武漢大學(xué)人民醫(yī)院，武漢430060)

摘要:目的探討肝細(xì)胞生長因子(HGF)及其受體原癌基因(C-Met)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)在子宮腺肌病發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法選擇子宮腺肌病患者30例(觀察組)，因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)的患者30例(對照組)。采用免疫組化SP法檢測觀察組在位及異位內(nèi)膜、對照組內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1，HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1之間的關(guān)系采用多元統(tǒng)計相關(guān)分析。結(jié)果觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及對照組內(nèi)膜組織、HGF、C-Met、MMP-9表達(dá)依次升高，TIMP-1依次降低;兩兩比較，P均＜0.01。觀察組異位內(nèi)膜中HGF、C-Met、MMP-9兩兩均呈正相關(guān)，并均與TIMP-1呈負(fù)相關(guān)(P均＜0.01)。觀察組在位內(nèi)膜及對照組內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9兩兩均呈正相關(guān)，C-Met、MMP-9與TIMP-1均呈負(fù)相關(guān)(P均＜0.01); HGF與TIMP-1無關(guān)(P＞0.05)。結(jié)論子宮腺肌病患者異位內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9降低，TIMP-1升高，各指標(biāo)間均具有相關(guān)性，可能與疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

關(guān)鍵詞:子宮腺肌病;肝細(xì)胞生長因子;肝細(xì)胞生長因子受體原癌基因;基質(zhì)金屬蛋白酶9;金屬蛋白酶組織抑制因子1

子宮腺肌病患者子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)侵入子宮肌層，并伴隨周圍肌層細(xì)胞代償性肥大和增生。多數(shù)研究認(rèn)為，子宮基底層內(nèi)膜細(xì)胞增生并侵入到子宮肌層間質(zhì)是其發(fā)病原因［1］。在這一過程中，細(xì)胞因子起到了關(guān)鍵作用，其中肝細(xì)胞生長因子(HGF)及其受體原癌基因(C-Met)與細(xì)胞侵襲力有關(guān)［2，3］。HGF與C-Met蛋白結(jié)合后，可啟動一系列跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而發(fā)揮多種生物活性，使子宮內(nèi)膜細(xì)胞具有侵襲和轉(zhuǎn)移的特性［4，5］?；|(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)能降解基底膜主要成分Ⅳ型膠原［6］，金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)可與活化的MMP-9形成復(fù)合體而抑制其活性，并且能抑制血管生成素誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞出芽［7，8］，但其在子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展中的作用鮮見報道。為此我們進(jìn)行了如下研究。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2012年7～12月武漢大學(xué)人民醫(yī)院收治的子宮腺肌病患者30例(觀察組)，取其在位及異位內(nèi)膜組織標(biāo)本?；颊吣挲g35～50歲，平均44.2歲，均行子宮次全切除術(shù)或子宮全切術(shù)。選擇因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)的患者30例(對照組)，取其內(nèi)膜組織標(biāo)本?；颊吣挲g35～50歲，平均44.1歲，均為未絕經(jīng)婦女。兩組術(shù)前3個月內(nèi)未行激素治療，無其他腫瘤疾病史。兩組年齡具有可比性。

1.2子宮內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達(dá)檢測采用免疫組化SP法。將兩組標(biāo)本脫蠟后行微波爐抗原修復(fù)，HGF抗體及C-Met抗體以1∶200稀釋，MMP-9抗體及TIMP-1抗體以1∶100稀釋。4℃孵育過夜，以PBS代替一抗作為陰性對照，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。陽性判定標(biāo)準(zhǔn): HGF、C-Met主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞與上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，MMP-9、TIMP-1主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮的細(xì)胞質(zhì)，少量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì);細(xì)胞染色呈黃色為陽性表達(dá)，棕黃色為強(qiáng)陽性表達(dá)。每張切片在光鏡下隨機(jī)取6個不同視野，以切片染色的背景作對照，經(jīng)HPIAS1000病理圖文分析系統(tǒng)(同濟(jì)醫(yī)學(xué)院千屏影像公司)分析，測定陽性信號的平均灰度值。分析HGF、C-Met、MMP-9與TIMP-1的關(guān)系。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以珋x±s表示，組間比較采用單因素方差分析; HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1之間的關(guān)系采用多元統(tǒng)計相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達(dá)比較見表1。

表1　兩組內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達(dá)比較(灰度值，)

表1　兩組內(nèi)膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達(dá)比較(灰度值，)

注:與對照組比較，*P＜0.01;與觀察組在位內(nèi)膜比較，#P＜0.01。

組別　n HGF　C-Met　MMP-9　TIMP-1觀察組30異位內(nèi)膜　110.65±17.86* #　114.43±15.93* #　112.08±17.14* #　175.37±9.77* #在位內(nèi)膜　124.32±18.75*　125.97±17.72*　130.48±17.77*　140.42±14.04*對照組　30　136.97±16.14　146.41±15.77　142.73±14.86　129.76±13.17

2.2兩組HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1的關(guān)系觀察組異位內(nèi)膜組織中，HGF與C-Met、MMP-9均呈正相關(guān)(r分別為0.937、0.886，P均＜0.01)，C-Met 與MMP-9呈正相關(guān)(r = 0.807，P＜0.01)，HGF、CMet、MMP-9與TIMP-1均呈負(fù)相關(guān)(r分別為－0.777、－0.724、－0.905，P均＜0.01)。觀察組在位內(nèi)膜組織中，HGF與C-Met、MMP-9均呈正相關(guān)(r分別為0.921、0.865，P均＜0.01)，C-Met與MMP-9呈正相關(guān)(r = 0.787，P＜0.01)，C-Met、MMP-9與TIMP-1均呈負(fù)相關(guān)(r分別為－0.718、－0.908，P均＜0.01)，HGF與TIMP-1無關(guān)(P＞0.05)。對照組HGF與C-Met、MMP-9均呈正相關(guān)(r分別為0.908、0.892，P均＜0.01)，C-Met與MMP-9呈正相關(guān)(r = 0.806，P＜0.01)，C-Met、MMP-9與TIMP-1均呈負(fù)相關(guān)(r分別為－0.588、－0.802，P均＜0.01)，HGF與TIMP-1無關(guān)(P＞0.05)。

3　討論

研究發(fā)現(xiàn)，子宮腺肌病患者異位內(nèi)膜組織含有豐富的MMP-9，可能與破壞子宮基層細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)、侵襲病變周圍組織有關(guān)［9］。HGF對血管內(nèi)皮細(xì)胞有強(qiáng)烈的促有絲分裂作用，并可通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上受體C-Met結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白重排及誘導(dǎo)MMP分泌。組織中的HGF、C-Met可能通過打破MMP-9、TIMP-1平衡、降解ECM，而促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生及血管管腔的形成［10］。同時，HGF、C-Met可以使細(xì)胞對Fas-Fasl配體系統(tǒng)的敏感性降低，抑制異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡，使異位子宮內(nèi)膜更容易侵襲、種植和生長［11］。

本研究結(jié)果表明，觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及對照組HGF、C-Met、MMP-9表達(dá)均依次升高，TIMP-1依次降低，與以往研究結(jié)果一致［4］。表明隨著在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜MMP-9表達(dá)增加，破壞了與TIMP-1之間的平衡，TIMP-1對MMP-9的抑制作用減弱甚至失效。相關(guān)分析表明，觀察組異位內(nèi)膜HGF、C-Met、MMP-9兩兩均呈正相關(guān)，并均與TIMP-1呈負(fù)相關(guān)。推測在病理條件下子宮內(nèi)微環(huán)境發(fā)生改變，HGF、CMet分泌增加促使子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜轉(zhuǎn)化為具有更強(qiáng)種植侵襲能力的異位內(nèi)膜;同時打破了MMP-9、TIMP-1平衡，使異位內(nèi)膜中TIMP-1的抑制作用減弱，活化的MMP-9水解破壞基底膜，使細(xì)胞遷移侵襲入間質(zhì)，最終形成新生血管，從而促進(jìn)異位內(nèi)膜侵襲周圍組織在子宮肌層中生長。

綜上所述，子宮腺肌病患者異位內(nèi)膜HGF、CMet、MMP-9降低，TIMP-1升高，各指標(biāo)間均具有相關(guān)性，可能與子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。今后我們將根據(jù)本研究結(jié)果進(jìn)行動物及臨床相關(guān)研究，以期為子宮腺肌病的治療提供依據(jù)。

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收稿日期:( 2015-02-05)

文章編號:1002-266X(2015)36-0057-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號:R711.7

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.022