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    消腫止痛洗液微生物限度檢查法的研究

    2015-02-18 05:43:34霍玲玲馮健科
    西部中醫(yī)藥 2015年6期
    關(guān)鍵詞:試液洗液菌液

    霍玲玲,馮健科

    1天水市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,甘肅 天水 741020;2天水市第五人民醫(yī)院

    消腫止痛洗劑為天水市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院多年應(yīng)用臨床驗方,全方由地榆炭、赤芍、蒼術(shù)、草烏、紫草、當(dāng)歸、天花粉、乳香、地榆10味中藥組成,具有清熱止痛,消腫生肌的功效。其臨床療效確切[1-6],但尚未建立其微生物限度檢查方法。本文參照《中國藥典》[7]規(guī)定,對消腫止痛洗液的微生物限度檢查法進行了的驗證,現(xiàn)報道如下:

    1 材料與方法

    1.1 儀器 YM75FN型生物安全柜(上海島韓實業(yè)有限公司),LRH-250生化培養(yǎng)箱(上海島韓實業(yè)有限公司),MJX-50霉菌培養(yǎng)箱(上海島韓實業(yè)有限公司)。

    1.2 培養(yǎng)基和稀釋液 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(北京陸橋技術(shù)公司,101129),玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(北京陸橋技術(shù)公司,1012152),pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液(北京陸橋技術(shù)公司,100316),膽鹽乳糖增菌液(北京陸橋技術(shù)公司BL增菌液,090310)改良馬丁培養(yǎng)基(青島海博生物,100301)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(青島海博生物,090301)。

    1.3 試驗樣品 消腫止痛洗液(天水市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑室自制,100 mL/瓶)。

    1.4 菌種 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]、黑曲霉菌(Aspergi l lus niger)[CMCC(F)98003]均由中國食品藥品檢定研究院提供。

    1.5 方法

    1.5.1 菌液的制備 分別取經(jīng)35℃培養(yǎng)18~24小時的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌肉湯培養(yǎng)物1mL,加9mL鹽水10倍稀釋至10-5~10-7為50~100 cfu/mL,接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中,于25℃培養(yǎng)24~48小時,取培養(yǎng)液1mL加入0.9%無菌氯化鈉溶液9mL中,10倍依次稀釋至加9 mL鹽水10倍稀釋至10-5~10-7為50~100 cfumL,取經(jīng)25.5℃培養(yǎng)1周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物,加3~5mL鹽水洗下霉菌孢子,吸取出菌液,用標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁,與濁度相當(dāng)后,取1mL霉菌孢子液加9 mL鹽水稀釋,逐管10倍稀釋為10~4約 50~100 cfu/mL,做活菌計數(shù)備用。

    1.5.2 供試品制備 稱取樣品10mL,加0.9%無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL,制成1∶10均勻的供試液。

    1.5.3 細(xì)菌、霉菌和酵母菌計數(shù)法回收率的測定及方法驗證 試驗組取供試液1mL和上述試驗菌懸液1mL,分別注入無菌平皿中,立即傾注相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基,每株試驗菌平行制備2個平皿,立即振搖,待凝固后倒置于培養(yǎng)箱,分別培養(yǎng),計數(shù)。菌液組取上述如2.1測定所加的試驗菌數(shù)。供試品對照組取1mL1∶10供試液注入平皿,立即傾入相應(yīng)培養(yǎng)基,搖勻,待凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng),每日觀察,計算菌落數(shù),測定其供試品本底菌數(shù)?;厥章?(試驗組菌落數(shù)-供試品組菌落總數(shù))×100%/菌液組菌落數(shù)

    1.5.4 控制菌檢查方法的驗證 試驗組取1∶10供試液10mL,分別加入100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,再分別加入1mL 50~100 cfu/mL的金黃色葡萄球菌菌液和銅綠假單胞菌菌液,依《中國藥典》相應(yīng)控制菌檢查法進行檢查。陰性菌對照組取供試液10mL及金黃色葡萄球菌菌懸液1mL,與試驗組同法試驗。供試品組取供試液10mL,與試驗組同法試驗。

    2 結(jié)果

    2.1 回收率 各菌種的回收率均高于70%。見表1—2。

    表1 常規(guī)法測定細(xì)菌試驗驗證結(jié)果 cfu/mL

    表2 常規(guī)法測定霉菌、酵母菌試驗驗證結(jié)果cfu/mL

    2.2 控制菌檢查方法再驗證結(jié)果 在3次獨立的平行試驗中陰性菌對照組無菌生長,陽性對照組檢出相應(yīng)的控制菌,試驗組未檢出試驗菌。

    3 討論

    《中國藥典》(2010年版)規(guī)定當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查法時,需進行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法和控制菌檢查方法的驗證,以確認(rèn)所采用方法適合于該藥品的檢查[8]。驗證試驗結(jié)果表明消腫止痛洗液無抑菌作用,可依據(jù)《中國藥典》2010年版按常規(guī)方法進行微生物限度檢查。本研究所建立的“消腫止痛洗液微生物限度檢查方法”經(jīng)方法學(xué)驗證,細(xì)菌、霉菌及酵母菌檢查采用常規(guī)法平皿計數(shù)方法,試驗方法成立;控制菌檢查經(jīng)方法學(xué)驗證,采用常規(guī)法,試驗方法成立。

    [1] 李盛華.消腫止痛合劑治療下肢創(chuàng)傷早期腫痛146例總結(jié)[J].甘肅中醫(yī),2000,13(1):34-35.

    [2] 張遠(yuǎn),屈彩琴,郭俊華.水蛙活血化疲的實驗研究[J].天津中醫(yī),1998,4(2):88-89.

    [3] 陳志龍,鄧強,張彥軍.消腫止痛合劑預(yù)防骨折術(shù)后下肢深靜脈血栓形成的臨床觀察[J].甘肅中醫(yī),2009,22(12):28-30.

    [4] 柳海平,李玉吉,王承祥,等.消腫止痛合劑預(yù)防全髓關(guān)節(jié)置換術(shù)后異位骨化的臨床研究[J].中國骨傷,20l1,25(l0):857-860.

    [5] 柳海平,王承祥,李玉吉,等.消腫止痛合劑預(yù)防全髓關(guān)節(jié)置換術(shù)后異位骨化的臨床分析[J].西部中醫(yī)藥,2011,24(8):83-85.

    [6] 柳海平,王承祥,柴喜平,等.氨酚輕考酮片配合消腫止痛合劑對全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后鎮(zhèn)痛效果的臨床觀察[J].西部中醫(yī)藥,2011,24(l0):4-6.

    [7] 中華人民共和國藥典委員會.中國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄107-116.

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