腹瀉患者便檢出擬態(tài)弧菌分析

侯小娜

（遼寧省大連市金州新區(qū)疾病預防控制中心，遼寧大連116000）

腹瀉患者便檢出擬態(tài)弧菌分析

侯小娜

（遼寧省大連市金州新區(qū)疾病預防控制中心，遼寧大連116000）

目的：對腹瀉患者糞便中的擬態(tài)弧菌進行檢測分析。方法：2014年9月，我們按WS289-2008霍亂弧菌診斷標準和中華人民共和國衛(wèi)生部衛(wèi)生防疫司第五版霍亂防治手冊及大連市疾控中心《腸道致病菌檢測方法》和相關(guān)資料進行霍亂弧菌、副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌、河湖菌、氣單胞菌、類志賀鄰單胞菌分離鑒定。結(jié)果：從1例腹瀉患者糞便中分離出一株擬態(tài)弧菌。結(jié)論：國外關(guān)于本菌引起人類腹瀉及其他感染的報道在逐漸增多，但國內(nèi)報道極少，本次檢出將有助于國內(nèi)感染性腹瀉的研究。

腹瀉；梗檢；擬態(tài)弧菌

2014年9月，我們從1例腹瀉患者的便中分離出一株擬態(tài)弧菌，現(xiàn)對實驗室檢測進行分析。

1 材料與方法

1.1 標本：2014年9月腹瀉患者致瀉性弧菌檢測。

1.2 試劑：培養(yǎng)基均由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，所有試劑均在其有效期內(nèi)使用。

1.3 診斷學清：均由寧波天潤生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，均在其有效期內(nèi)使用。

1.4 方法：WS271-2007感染性腹瀉診斷標準［1］及大連市疾控中心《腸道致病菌檢測方法》［2］和相關(guān)資料［3］進行檢驗。

1.4.1 鏡檢：取患者新鮮糞便鏡檢，取3%三糖鐵培養(yǎng)基培養(yǎng)物進行涂片染色鏡檢。

1.4.2 增菌分離培養(yǎng)：用無菌棉簽蘸取患者新鮮糞便直接涂抹于SS平板、麥康凱瓊脂平板和慶大霉素平板進行直接分離培養(yǎng)；同時將2～5g新鮮糞便接種到10ml堿胨水管中。堿胨水管放37℃增菌8～12h；從菌液生長最茂盛的的菌膜下表層取一接種環(huán)，劃線接種于TCBS、SS、慶大霉素及麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h。

1.4.3 生化反應：從平板上挑取可疑菌落轉(zhuǎn)種三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基并作氧化酶、耐鹽生長試驗，并接種半固體、硝酸還原試驗、檸檬酸鹽、靛基質(zhì)、V-P、尿素酶、L-賴氨酸、L-鳥氨酸、L-精氨酸、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、D-甘露醇、蔗糖、L-阿拉伯糖、纖維二糖、水楊素、明膠酶、苯丙氨酸脫羧酶、ONPG、神奈川試驗。

1.4.4 血清學試驗：取可疑菌落用霍亂弧菌O1群多價及O139群診斷學清診斷。

2 結(jié)果

從1例腹瀉患者糞便中分離出一株擬態(tài)弧菌。

2.1 鏡檢：取新鮮糞便鏡檢可見白細胞并伴有紅細胞懸滴標本可見穿梭樣運動，涂片染色鏡檢該菌株為革蘭陰性弧菌。氧化酶陽性，符合弧菌科細菌，繼續(xù)進行鑒定。

2.2 培養(yǎng)特性：在3%氯化鈉堿性蛋白胨水中渾濁生長，表面形成菌膜，在半固體瓊脂沿穿刺線擴散生長。菌株在SS和麥康凱瓊脂平板上形成中等大小，光滑濕潤、無色，半透明的菌落，在慶大霉素平板上形成光滑濕潤，邊緣整齊、中心呈灰黑色扁平菌落，酷似霍亂菌落，在血平板上菌落周圍形成透明β溶血環(huán)。3%氯化鈉三糖鐵培養(yǎng)基上底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，斜面不變，乳糖、蔗糖不分解，有動力，不產(chǎn)硫化氫。

2.3 血清學試驗：取可疑菌落用霍亂弧菌O1群多價及O139群診斷學清不凝集，試驗為陰性。

2.4 生化反應：氧化酶陽性，賴氨酸脫羧酶陽性，精氨酸雙水解酶陰性，鳥氨酸脫羧酶陽性，液化明膠，尿素陰性，V-P陰性，硝酸鹽還原試驗陽性，靛基質(zhì)陽性，檸檬酸鹽陰性，硫化氫陰性，苯丙氨酸脫羧酶陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，乳糖陰性，蔗糖陰性，麥芽糖陽性，纖維二糖陰性。L-阿拉伯糖陰性，D-甘露醇陽性，水楊素陰性，ONPG陽性，無鹽胰胨水和3.0%胰胨水生長，6.0%、8.0%、10.0%胰胨水均不生長，神奈川試驗陽性。

結(jié)合以上形態(tài)學、血清學、生化試驗、嗜鹽試驗結(jié)果與擬態(tài)弧菌典型特性相符，由此確定該菌株為擬態(tài)弧菌。

3 討論

1981年從腹瀉患者糞便中檢出該菌，故由國外學者命名為“擬態(tài)弧菌”。擬態(tài)弧菌是今年新認識的腹瀉病原菌，除美國發(fā)現(xiàn)外還曾從加拿大、墨西哥、新西蘭及一些亞洲國家發(fā)現(xiàn)。該菌廣泛存在于自然界河水、海水和海產(chǎn)品中，多呈散發(fā)或暴發(fā)，一年四季均有發(fā)病，以夏季為多。發(fā)病者多有吃生牡蠣、蝦蟹史。本例患者在發(fā)病14h前，曾進食牡蠣，感染可能與此有關(guān)。

擬態(tài)弧菌系革蘭陰性弧菌在形態(tài)、特性與霍亂弧菌相似，實驗室檢查應引起注意，通過蔗糖、V-P試驗、血清學加以鑒別。流行性腹瀉弧菌的檢測多集中在霍亂弧菌，然而非霍亂弧菌也可引起散發(fā)的病例。所以在日常工作中對于尤其對于疑似霍亂患者的診斷，當和霍亂診斷學清不發(fā)生凝集時，就應該考慮進一步做其他致病性弧菌的檢測，這樣會大大提高致病菌的檢測率。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：11-12.

［2］腸道致病菌檢測方法.大連：大連市疾控中心，2013：1-4.

［3］俞樹榮.微生物學和微生物學檢驗［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：190-191.

R442.2

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1002－2376（2015）11－0094－02

2015－08－24