毛細管電泳技術(shù)在中藥方面的研究進展

翁 蓓，陶遵威

(1.天津市武清區(qū)中醫(yī)醫(yī)院,天津 301700； 2.天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所,天津 300020)

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毛細管電泳技術(shù)在中藥方面的研究進展

翁 蓓1，陶遵威2

(1.天津市武清區(qū)中醫(yī)醫(yī)院,天津 301700； 2.天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所,天津 300020)

毛細管電泳技術(shù)作為一種高效分離技術(shù)，近年來發(fā)展十分迅速，廣泛應(yīng)用于中藥研究的各個方面，并且極大地拓展了中藥分析的研究范圍，為中醫(yī)中藥走向世界提供了新的方法。本文通過查閱相關(guān)資料，對毛細管電泳技術(shù)在中藥有效成分、中藥復(fù)方制劑指紋圖譜和成分分析以及中藥藥代動力學(xué)方面的研究進展進行綜述。

毛細管電泳技術(shù),有效成分,中藥復(fù)方制劑,指紋圖譜,藥代動力學(xué)

毛細管電泳(CE)又稱高效毛細管電泳(HPCE)，是以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間濃度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的一類液相分離技術(shù)[1]。其具有高效快速、準(zhǔn)確靈敏、操作簡便、溶劑消耗少、成本低和環(huán)境污染小等優(yōu)點[2]，已成為現(xiàn)代分離科學(xué)的重要組成部分，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品安全[3]以及醫(yī)藥科學(xué)[4，5]等各個領(lǐng)域。隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的迅猛發(fā)展，準(zhǔn)確、靈敏、快速已成為衡量分析技術(shù)好壞的關(guān)鍵指標(biāo)[6]。高效毛細管電泳技術(shù)已廣泛應(yīng)用于中藥研究的各個領(lǐng)域，并且極大地拓展了中藥的研究范圍，為中藥走向世界提供了新的方法。本文比較分析了毛細管電泳的分類及特點，并針對高效毛細管電泳技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用進行概述，以期為該方法在中藥研究方面的合理應(yīng)用提供參考。

1 毛細管電泳的分類及特點

1.1 毛細管電泳的分類 按毛細管內(nèi)分離介質(zhì)和分離原理的不同，可將毛細管電泳分為：毛細管區(qū)帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管膠束電動色譜、毛細管等電聚焦、毛細管等速聚焦以及毛細管電色譜等[7]。

其中毛細管區(qū)帶電泳(CZE)是應(yīng)用最多的毛細管電泳模式，應(yīng)用范圍包括氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、離子等的分離；毛細管凝膠電泳(CGE)常用于蛋白質(zhì)、寡聚核苷酸、核糖核酸、DNA片段分離和測序及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)產(chǎn)物的分析；毛細管膠束電動色譜 (MECC)主要用于小分子、中性化合物和藥物等的分離；毛細管等電聚焦(CIEF) 主要用于測定蛋白質(zhì)的等電點、分離異構(gòu)體等；毛細管等速聚焦(CITP)現(xiàn)常用于富集樣品； 毛細管電色譜 (CEC) 常用于手性化合物的拆分。以上6種模式為毛細管電泳基本模式，此外，還有較好發(fā)展前景的親和毛細管電泳、免疫毛細管電泳等。

1.2 毛細管電泳特點 毛細管電泳與高效液相色譜同是液相分離技術(shù)，但就效率、速度、樣品用量和成本比較，毛細管電泳顯示出一定的優(yōu)勢。與高效液相色譜相比：毛細管電泳理論塔板數(shù)可達105～106/m，分離速度更快、柱效更高；毛細管電泳沒有高壓泵輸液，幾乎不消耗溶劑，樣品用量不超過100 nl，是高效液相色譜用量的幾百分之一，因此成本更低；而且毛細管電泳有很大的選擇性，可以根據(jù)不同的分子性質(zhì)對生物大分子、藥物等廣泛的分離對象進行有效的分離[1]。

2 中藥有效成分分離測定中的應(yīng)用

眾所周知，中藥材科屬繁多，各類藥物的產(chǎn)地各異，成分復(fù)雜。中藥的一些成分，如生物堿類、糖類、苷類等運用傳統(tǒng)的色譜分離，很容易在分離時吸附在色譜柱上，使得分析物分離困難，有時甚至?xí)斐缮V柱的損壞，既浪費了人力也耗費了大量的資本。而毛細管電泳技術(shù)以其經(jīng)濟和操作簡便的特點，在中藥有效成分分析測定領(lǐng)域充分顯示了其優(yōu)越性，被廣泛應(yīng)用于中藥材的成分分析中[8,9]。

蔡梅超[10]將萊菔子超聲提取后，采用高效毛細管電泳技術(shù)，在緩沖液為0.02 mol/L Na2HPO4-0.02 mol/L NaH2PO4(1∶1,25 ℃時pH 6.89)中測定，芥子堿在0.2～1.0 mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，證明高效毛細管電泳法可用于測定萊菔子中芥子堿的含量。羅毅等[11]運用毛細管區(qū)帶電泳法，測定益母草總堿提取物中水蘇堿的含量，實驗采用了外標(biāo)法定量，取得了較為滿意的結(jié)果。張婷[12]運用毛細管電泳法分離并測定了雷公藤中雷公藤紅素的含量。在0.05 mol/L磷酸鹽(pH 8.0)- 15%甲醇緩沖液，電壓30 kV，檢測波長210 nm的條件下測定雷公藤紅素的濃度在0.04～0.50 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。證明毛細管電泳法能夠較好的分離雷公藤紅素與其他成分，并準(zhǔn)確測定其含量。馮海燕等[13]運用毛細管電泳法在pH 8.5的20 mmol/L硼酸鈉-磷酸二氫鈉的緩沖溶液中成功分離測定了萹蓄中山柰素、槲皮素和咖啡酸的含量。黃瑞華等[14]運用毛細管電泳技術(shù)，在H3BO3-Na2B4O7(pH 8.4，5 mmol/L)的緩沖液中，同時分離白鮮皮中3種生物堿( 胡蘆巴堿、白鮮堿和膽堿)回收率范圍為92.0%～101.0%。丁紅梅等[15]運用毛細管區(qū)帶電泳法在30 mmol/L硼砂-硼酸的緩沖液，254 nm波長下檢測側(cè)柏葉中的槲皮素苷。成功測得3個批次的側(cè)柏葉中槲皮苷的含量，并且精密度，穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度都較佳。

3 復(fù)方制劑的指紋圖譜及成分分析中的應(yīng)用

中藥指紋圖譜是國際公認(rèn)的控制中藥質(zhì)量的有效方法之一。目前，應(yīng)用于中藥指紋圖譜的色譜方法主要有薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等。而毛細管電泳技術(shù)，作為新興的技術(shù)以其高效、快速、經(jīng)濟、污染小等特點，廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜研究中[16]。

孫國祥等[17]運用毛細管電泳技術(shù)在50 mmol/L硼砂-150 mmol/L磷酸二氫鈉-50 mmol/L磷酸氫二鈉的緩沖液中，以甘草次酸峰為參照物峰，確定15個共有指紋峰，建立了補中益氣丸的指紋圖譜，并評價出10批次補中益氣丸的質(zhì)量優(yōu)劣。季一兵等[18]運用毛細管電泳技術(shù)，在pH 9.5的44 mmol/L硼砂-34 mmol/L SDS的緩沖液中建立了復(fù)方生脈散的指紋圖譜，確定了20個主要共有的指紋峰，為復(fù)方生脈散的質(zhì)量評價提供了良好的依據(jù)。孫國祥等[19]運用毛細管區(qū)帶電泳法，在50 mmol/L硼砂-50 mmol/L磷酸氫二鈉-150 mmol/L磷酸二氫鈉-50 mmol/L碳酸氫鈉的電解質(zhì)溶液中，建立了逍遙丸的毛細管電泳指紋圖譜，實驗中選取未涂層石英毛細管分離，以咖啡酸峰為參照物峰，成功確定了13個批次逍遙丸樣品的21個共有指紋峰，這也為逍遙丸的質(zhì)量控制提供新的參考依據(jù)。張超云等[20]運用高效毛細管電泳法，選擇未涂層石英毛細管柱50 m×95 cm(有效長度86.5 cm) 和50 mmol /L硼砂溶液(含10%乙腈，pH 9.28)的緩沖液進行檢測，結(jié)果表明：橙皮苷、甘草酸與甘草次酸分別在0.10～2.40 g/L，0.04～0.72 g/L，0.01～0.18 g/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。這為二陳湯毛細管電泳指紋圖譜的建立提供了依據(jù)。韋湫陽等[21]運用束膠毛細管電泳法在60 mmol/L SDS-30 mmol/L Tris-10 mmol/L硼酸的緩沖液中，測定中藥復(fù)方制劑消栓通絡(luò)片中蘆丁、丹參素、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1和三七皂苷R1分別在2.5～100、2.5～200、10～300、15～400和15～400 mg/L濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，證明此方法具有簡便快捷的特點，可應(yīng)用于實際樣品的檢測。

中藥復(fù)方制劑的組成較多，其化學(xué)成分也相當(dāng)?shù)膹?fù)雜，而毛細管電泳技術(shù)具有高效、快速、經(jīng)濟且易于清洗等優(yōu)點，目前已廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方制劑的成分分析中，并且操作簡便、準(zhǔn)確度高，已成為中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制的有效手段。

4 中藥藥代動力學(xué)中的應(yīng)用

隨著中醫(yī)藥學(xué)的不斷發(fā)展，中藥越來越廣泛的應(yīng)用于臨床。而臨床研究和藥物代謝動力學(xué)的關(guān)系也密不可分，因為藥代動力學(xué)通過建立動物體模型，可以很好的闡明藥物在肌體內(nèi)的作用機制及過程，為藥物的制劑研究和臨床應(yīng)用提供了很大的依據(jù)。目前毛細管電泳技術(shù)已應(yīng)用于中藥有效成分藥代藥理的研究[22]。

田景振等[23]利用毛細管電泳技術(shù)測算了葛根黃酮緩釋膠囊中主要有效成分葛根素在家兔體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)，以愈風(fēng)寧心片作參比制劑，結(jié)果表明：愈風(fēng)寧心片及樣品制劑在家兔體內(nèi)均符合二室開放模型，葛根黃酮緩釋膠囊呈現(xiàn)一定的緩釋效果。凌笑梅等[24]研究了凝血酶和水蛭素以及肝素之間的相互作用，運用毛細管電泳技術(shù)，選擇凝血酶作為靶點，從11個天然化合物中快速篩選出6個與凝血酶有相互作用的化合物，從而提高了天然藥物提取物藥理活性的篩選速度。

5 現(xiàn)狀及展望

毛細管電泳技術(shù)的研究和應(yīng)用，為多組分中藥的定性定量分析[25]、中藥藥性識別[26]等領(lǐng)域和中藥材檢驗鑒別[27]工作帶來了生機與活力，無疑將對專業(yè)技術(shù)的發(fā)展與提高起著重要的促進作用。近年來，毛細管電泳技術(shù)憑借其優(yōu)勢迅速的在中藥研究領(lǐng)域展示了其優(yōu)越性，不僅可以用來快速的分離和檢測中藥有效成分，還能夠幫助研究者建立中藥或復(fù)方的指紋圖譜[28]和藥代動力學(xué)研究[29]。由此可見，毛細管電泳技術(shù)，作為一種新興的技術(shù)，其優(yōu)勢為高效、簡便、經(jīng)濟，但同時毛細管電泳技術(shù)的線性范圍還很窄、自動進樣技術(shù)還不成熟。也許在不久的將來，通過對儀器和技術(shù)等方式的改進，一定會提高毛細管電泳技術(shù)的利用度。期待著毛細管電泳技術(shù)和其他檢測方法的聯(lián)用，能夠更廣泛的應(yīng)用于中藥成分研究和臨床研究等領(lǐng)域，為中醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展服務(wù)。

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