BRCA1基因多態(tài)性與乳腺癌中醫(yī)辨證分型及中藥療效的相關(guān)性研究

唐喜軍，林紅，唐明慧

（珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣東 珠海 519020）

0 引言

乳腺癌已在世界范圍內(nèi)成為備受關(guān)注的影響女性健康的疾病，每年約有100萬婦女被診斷為乳腺癌[1]，超過41萬患者死于乳腺癌。近年來，乳腺癌發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢，這種趨勢在發(fā)展中國家也日漸明顯。雖各年齡段發(fā)病率均有升高，但發(fā)病率曲線在45歲和75歲出現(xiàn)峰值[2]。BRCA1(breast cancer susceptibility gene 1)基因是已經(jīng)被證實并進行廣泛研究的乳腺癌和卵巢癌的易感基因。有研究發(fā)現(xiàn)了位于BRCA1啟動子的c.-2265C/T單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)；運用雙熒光素酶檢測，發(fā)現(xiàn)含T等位基因的BRCA1啟動子活性較含C序列的增加了70%；在隨后的關(guān)聯(lián)性研究中還發(fā)現(xiàn)c.-2265T 等位基因攜帶者的乳腺癌風(fēng)險顯著降低，而該結(jié)果在散發(fā)性乳腺癌中尤為顯著[3]。而中醫(yī)作為乳腺癌的重要診治手段已得到廣泛應(yīng)用，中西醫(yī)結(jié)合也成為未來重要的研究方向之一，過去關(guān)于BRCA1多態(tài)性的研究主要還是集中在疾病的易感性、療效及預(yù)后的相關(guān)性研究上，與中醫(yī)的關(guān)聯(lián)仍是空白，本研究將探討B(tài)RCA1啟動子多態(tài)性與中醫(yī)辨證分型及中醫(yī)治療療效的相關(guān)性，為今后中西醫(yī)結(jié)合治療提供更多的理論依據(jù)，具有重要的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2017年8月至2019年8月我院乳腺科未行術(shù)前化療接受保乳術(shù)及根治術(shù)的乳腺癌患者50例，年齡26～74歲，平均（45.3±8.9）歲，統(tǒng)計患者的一般情況、臨床癥狀和體征。

1.2 中醫(yī)分型

乳腺癌的中醫(yī)辨證分型，參照2008年出版的中華中醫(yī)藥學(xué)會標準《腫瘤中醫(yī)診療指南》有關(guān)乳腺癌的中醫(yī)辨證分型標準，分為肝郁氣滯證、熱毒蘊結(jié)證、沖任失調(diào)證、氣血兩虛證、脾胃虛弱證、肝腎陰虛證共6個證型[4]。

1.3 中醫(yī)治療

采用柴胡疏肝散湯劑辨證加減治療。組成：枳殼、白芍各 15g，柴胡、川芎各10g，香附12g，炙甘草、陳皮各6g。加減：心脾兩虛型，上方加黨參、茯苓、龍眼肉各15g；肝腎陰虛型，上方加女貞子、旱蓮草各15g：瘀血內(nèi)阻型，上方加土鱉蟲6g、桃仁、莪術(shù)各15g；肝郁脾虛型，上方加黨參30g、白術(shù)、半夏各15g。每日1劑。煎服法：水800mL，煎成150mi；復(fù)煎150mL，2次藥混勻，每次150mi，每日2次。連服42天后評定療效。

1.4 BRCA1啟動子c.-2265C/T多態(tài)性分析

以酚-氯仿抽提法提取外周血DNA，以核酸蛋白定量儀進行純度和濃度檢測。將提取的DNA以酶鏈聚合反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴增BRCA1啟動子c.-2265C/T。瓊脂糖凝膠電泳回收并純化PCR產(chǎn)物，進行DNA測序，與基因庫序列比對，分析BRCA1啟動子c.-2265C/T突變情況。根據(jù)多態(tài)性情況分為TT純合組、CT雜合組及CC純合組。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用 SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以百分比進行描述，采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 6種中醫(yī)證型的BRCA1啟動子c.-2265C/T突變分析

50例患者中肝郁氣滯證13例、熱毒蘊結(jié)證10例、沖任失調(diào)證9例、氣血兩虛證7例、脾胃虛弱證7例、肝腎陰虛證6例。肝郁氣滯證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性1例（7.69%）、熱毒蘊結(jié)證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性8例（80.00%）、沖任失調(diào)證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性0例（0.00%）、氣血兩虛證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性6例（85.71%）、脾胃虛弱證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性5例（71.43%）、肝腎陰虛證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性5例（83.33%），在6種證型中陽性與陰性對比均存在統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果表1。

表1 6種中醫(yī)證型的BRCA1啟動子c.-2265C/T突變情況

2.2 3種突變基因多態(tài)性中藥治療效果分析

本研究中BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性患者共25例，TT純合組12例、CT雜合組10例及CC純合組8例。采用柴胡疏肝散湯劑辨證加減治療，其中TT純合組柴胡疏肝散湯劑辨證加減治療有效8例（66.67%），CT雜合組柴胡疏肝散湯劑辨證加減治療有效7例（70.00%），CC純合組柴胡疏肝散湯劑辨證加減治療有效6例（75.00%），各組治療有效率對比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表2 3種突變基因多態(tài)性中藥治療效果分析

3 討論

乳腺癌為女性癌癥發(fā)病第一位，全球每年新發(fā)乳腺癌約167.1萬，死于乳腺癌約52.2萬。根據(jù)全國腫瘤登記中心發(fā)布的最新數(shù)據(jù)顯示，我國目前每年乳腺癌新發(fā)約24.9萬，城市地區(qū)發(fā)病率約46.74/10萬，即平均每29名女性就有1名患乳腺癌，乳腺癌己位居城市女性癌癥發(fā)病首位。隨著生活節(jié)奏的加快，人們不健康的生活習(xí)慣以及不良飲食習(xí)慣逐漸增多，加之環(huán)境及遺傳因素的影響，造成了乳腺癌發(fā)病率和死亡率的升高[5]。乳腺癌易感基因BRCA1是重要的乳腺癌和卵巢癌易感基因，亦是重要的抑癌基因。自20世紀90年代被成功克隆以來，受到廣泛重視并開展了大量研究。已有大量研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌的中醫(yī)分型與分子分型及相關(guān)基因表達的關(guān)聯(lián)性。過去研究已較全面的了解其中的關(guān)系，為乳腺癌的中醫(yī)辨證分型提供一定的客觀依據(jù)，為乳腺癌的中西醫(yī)結(jié)合診療提供指導(dǎo)。本研究結(jié)果表明：肝郁氣滯證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性1例（7.69%）、熱毒蘊結(jié)證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性8例（80.00%）、沖任失調(diào)證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性0例（0.00%）、氣血兩虛證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性6例（85.71%）、脾胃虛弱證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性5例（71.43%）、肝腎陰虛證BRCA1啟動子c.-2265C/T突變陽性5例（83.33%），在6種證型中陽性與陰性對比均存在統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。TT純合組治療有效8例（66.67%），CT雜合組治療有效7例（70.00%），CC純合組治療有效6例（75.00%），各組治療有效吧對比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，乳腺癌患者的中醫(yī)證型以熱毒蘊結(jié)證、氣血兩虛證及肝腎陰虛證多見，則乳腺癌的中醫(yī)證型與BRCA1啟動子c.-2265C/T突變具有一定的相關(guān)性，開展兩者之間的相關(guān)性研究具有重要的臨床意義。此外，BRCA1啟動子c.-2265C/T突變與中藥治療療效相關(guān)，可能用于預(yù)測乳腺癌對中藥治療的反應(yīng)。