小干擾RNA技術(shù)在膀胱癌研究中的應(yīng)用和展望

欒 婷，王海峰（綜述），王劍松（審校）

（昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院泌尿外科 云南省泌尿外科研究所，昆明 650101）

膀胱癌絕大多數(shù)來自上皮組織，其中90%以上為移行上皮腫瘤［1］。膀胱癌的病因復(fù)雜，與環(huán)境因素、遺傳因素、癌基因的激活和抑癌基因的失活等的作用有關(guān)，但具體的發(fā)生機(jī)制尚不清楚。目前膀胱癌的治療多數(shù)仍然采用手術(shù)為主放化療為輔的綜合治療方案，但該治療方案還存有很多問題，如手術(shù)創(chuàng)傷大、患者耐受性差、化療多重耐藥現(xiàn)象、術(shù)后復(fù)發(fā)普遍（復(fù)發(fā)率50%～70%）等，這些問題促使人們尋求更有效的治療方法、提高患者的生存率，這是泌尿外科研究的重要課題。如果能明確膀胱癌的發(fā)生機(jī)制并從基因水平對(duì)其進(jìn)行治療，就能從根本上逆轉(zhuǎn)了腫瘤的發(fā)展，從而可能達(dá)到治愈的目的，給腫瘤治療帶來新的希望。近年來基因的研究一直是膀胱癌研究的熱點(diǎn)問題，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)中均顯示出了巨大的潛力和良好的前景。尋求一種有效的技術(shù)方法作用于目的基因一直是基因研究中的一大難題。

小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）技術(shù)是指利用長(zhǎng)度為21～25 nt的小的雙鏈RNA降解同源信使 RNA（messenger RNA，mRNA）以引起特定mRNA的沉默，從而使其失去作用［2］。siRNA技術(shù)因其具備高特異性、高效性、簡(jiǎn)便易行等特點(diǎn)，并且具有強(qiáng)大的基因阻斷作用，現(xiàn)已廣泛地用于各種疾病的基因功能研究、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因治療等方面，成為醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，并有望成為一種新的治療癌癥的有效途徑。利用RNA干擾沉默異常的基因的表達(dá)是在癌癥治療中新出現(xiàn)的方法，具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值，也為膀胱癌的基因治療開辟了一條新道路。通過查閱近年來國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)siRNA技術(shù)在膀胱癌研究中的應(yīng)用和進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 siRNA技術(shù)的發(fā)展

1990 年 Jorgensen等為了加深矮牽?；ǖ淖仙?，向其中導(dǎo)入了一個(gè)含有強(qiáng)啟動(dòng)子的色素基因，但結(jié)果卻是矮牽?；ǔ霈F(xiàn)顏色變淺甚至白色，研究發(fā)現(xiàn)這是因?yàn)閷?dǎo)入的基因和同源的內(nèi)源基因的表達(dá)均被抑制了，這個(gè)現(xiàn)象稱為共抑制現(xiàn)象［3］。1995年，Guo 和 Kempheus［4］在研究 秀 麗線蟲中par-1基因的功能時(shí)發(fā)現(xiàn)不論是反義RNA還是作為對(duì)照的正義RNA都能阻斷par-1基因的表達(dá)。這種現(xiàn)象與當(dāng)時(shí)認(rèn)為的反義RNA技術(shù)的機(jī)制不符。1998年，F(xiàn)ire等［5］在研究華麗新小桿線蟲基因組計(jì)劃時(shí)發(fā)現(xiàn)了雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）能特異性和選擇性地抑制目的基因的表達(dá)，他們將這種現(xiàn)象命名為RNA干擾。這個(gè)發(fā)現(xiàn)澄清了此前一系列令人們困惑的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。隨后RNA干擾在全球展開了廣泛的研究和應(yīng)用，并在動(dòng)物中相繼證實(shí)。2001年，Elbashir等［6］發(fā)現(xiàn)，人工合成的長(zhǎng)度為 21～23 nt的 dsRNA，即小片段siRNA，能觸發(fā)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的特異性RNA干擾，對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中特定的基因表達(dá)進(jìn)行抑制，從而為siRNA技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。

2 siRNA技術(shù)的作用機(jī)制

在RNA干擾的起始階段，由外源導(dǎo)入的dsRNA在胞質(zhì)被dsRNA特異性核酸內(nèi)切酶（dsRNA specific endonuclease，Dicer）在依賴ATP的作用下逐步切割為21～23 nt長(zhǎng)的siRNA，又稱為引導(dǎo)RNAs。Dicer可特異識(shí)別 dsRNA，將 dsRNA降解為3'端有2個(gè)堿基突出的21～23 nt的siRNA。在RNA干擾的效應(yīng)階段，形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RNA-induced silencing complex，RISC）同時(shí)識(shí)別降解mRNA。RISC是一種RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，通過與目標(biāo)mRNA完全或者部分的互補(bǔ)配對(duì)來實(shí)施切割或者翻譯抑制功能。在腺苷三磷酸的作用下可將雙鏈siRNA解開變?yōu)榛罨问降膯捂渟iRNA，通過堿基配對(duì)定位到同源mRNA上，特異性降解與siRNA序列互補(bǔ)的mRNA而引發(fā)RNA沉默，影響mRNA的穩(wěn)定性，使其失活［2］。此外，研究表明［7］RISC與mRNA結(jié)合后，在RNA依賴性RNA多聚酶的作用下可形成新的dsRNA;而切斷后的mRNA被核酸外切酶降解后，在RdRP作用下也可形成 dsRNA，新形成的dsRNA又循環(huán)上述過程，再次被Dicer酶識(shí)別、切割，形成新的siRNA并作用于靶向mRNA，這種放大的瀑布式作用能在短時(shí)間內(nèi)迅速有效地使靶向mRNA完全降解，從而抑制相應(yīng)基因的表達(dá)。

與其他基因沉默的技術(shù)相比，siRNA技術(shù)有著顯著的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)［8］:①特異性強(qiáng)，只能特異地降解靶基因的mRNA;且單個(gè)堿基的改變，就有可能導(dǎo)致RNA干擾作用的減弱乃至于消失;②高效性，由于siRNA技術(shù)的過程中有瀑布式放大效應(yīng)，siRNA能在低濃度下顯著抑制基因表達(dá)甚至完全敲除;③siRNA有濃度依賴性和時(shí)間依賴性;④dsRNA長(zhǎng)度限制性，dsRNA為21～23 nt及dsRNA＞30 nt，特異性顯著降低;⑤可傳播性，siRNA可擴(kuò)散到整個(gè)機(jī)體并可傳遞給子一代。

3 siRNA技術(shù)在膀胱癌研究中的應(yīng)用

膀胱癌的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與癌基因和抑癌基因表達(dá)的失調(diào)密切相關(guān)。如果能將失調(diào)基因的發(fā)生機(jī)制研究清楚，并對(duì)其進(jìn)行靶向治療，就能提高腫瘤治療的特異性，減少或避免治療過程中對(duì)正常組織細(xì)胞造成損害，是非常有希望的腫瘤治療方法。因此，腫瘤的靶向基因治療是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一，而尋找膀胱癌基因治療的靶點(diǎn)成為有待解決的問題。

3.1 研究膀胱癌相關(guān)基因的功能 膀胱癌的發(fā)病機(jī)制仍然不清楚，是多種因素共同作用的結(jié)果。Bc1-2基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要的促進(jìn)作用，它通過抑制細(xì)胞凋亡、促血管生成因子的分泌促進(jìn)新生血管形成、使腫瘤細(xì)胞對(duì)許多化療藥物和放療的殺傷作用產(chǎn)生耐受促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［9］。許可慰等［10］通過針對(duì) Bcl-2基因的1009、1147、1210位點(diǎn)設(shè)計(jì)并合成表達(dá)siRNA的正、反義鏈DNA模板，再與帶有綠色蛋白熒光基因的pSIH1.H1-copGFP載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的目的片段在H1啟動(dòng)子的作用下不斷表達(dá)shRNA，剪切生成siRNA形成RISC，持續(xù)作用于Bc1-2 mRNA切割靶轉(zhuǎn)錄體，從而抑制Bcl-2基因的表達(dá)和功能，構(gòu)建的表達(dá)人膀胱癌Bcl-2-siRNA的慢病毒載體及建立的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，為后期研究Bcl-2在膀胱癌發(fā)病中的作用機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

整合素連接酶（integrin-linked kinase，ILK）是控制細(xì)胞對(duì)脂多糖反應(yīng)的一個(gè)普遍表達(dá)的蛋白激酶，通過整合誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的重構(gòu)來介導(dǎo)細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、遷移、侵襲和血管生成［11-12］。ILK在浸潤(rùn)性膀胱癌中高表達(dá)并促進(jìn)裸鼠膀胱癌移植瘤的生長(zhǎng)。高娟等［13］通過siRNA技術(shù)沉默膀胱癌ILK基因檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ILK siRNA通過調(diào)節(jié)關(guān)鍵蛋白的表達(dá)，如Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3，在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用。該結(jié)果表明ILK有望成為膀胱癌臨床診斷和治療的一個(gè)新的靶點(diǎn)。

3.2 在膀胱癌治療中的應(yīng)用 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種可促進(jìn)新生血管的生成和腫瘤的生長(zhǎng)的生長(zhǎng)因子。膀胱癌患者血清樣本中VEGF高表達(dá)與病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，同時(shí)也預(yù)示著預(yù)后差和易復(fù)發(fā)［14］。這些特點(diǎn)使VEGF成為膀胱癌抗血管生成療法的理想靶點(diǎn)，RNA干擾技術(shù)則能有效抑制VEGF的表達(dá)并降低其生物活性。Alnylam研發(fā)了一種siRNA藥物——ALN-VSP02，通過靜脈給藥來治療肝癌及其他實(shí)體瘤，并于2009年4月進(jìn)入了Ⅰ期臨床試驗(yàn)，該藥靶向作用于腫瘤細(xì)胞高表達(dá)的紡錘體驅(qū)動(dòng)蛋白和VEGF，通過抑制兩者的表達(dá)從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，據(jù)2010年11月發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，ALN-VSP02在大部分受試者中耐受性良好［15］，這給siRNA技術(shù)應(yīng)用于膀胱癌的臨床治療帶來了希望。

凋亡抑制因子存活蛋白是一個(gè)新近克隆的凋亡抑制基因，它只存在于人的各種胚胎組織中，除胸腺和生殖腺外，在正常分化成熟組織中檢測(cè)不到它的表達(dá)，而當(dāng)細(xì)胞發(fā)生惡變時(shí)又重新表達(dá)。由于存活蛋白只在惡變的組織中表達(dá)，因此檢測(cè)膀胱腫瘤患者尿液中的存活蛋白，可為腫瘤的早期診斷、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)以及預(yù)測(cè)預(yù)后提供幫助［16-17］。Ku等［18］利用 RNA干擾研究存活蛋白基因?qū)θ税螂装㏕24細(xì)胞的生長(zhǎng)和對(duì)細(xì)胞周期的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，存活蛋白表達(dá)的增加抑制了T24細(xì)胞胱天蛋白酶3活性，從而引起細(xì)胞凋亡，說明RNA干擾能有效地抑制存活蛋白表達(dá)的T24細(xì)胞。Seth等［19］將靶向作用于存活蛋白的siRNA脂質(zhì)體轉(zhuǎn)入膀胱癌KU-7-1uc細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)半抑制濃度僅為29 pmol/L，轉(zhuǎn)染后96 h細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)40%，胱天蛋白酶3/7活性增長(zhǎng)7～8倍:而向種植該細(xì)胞的荷瘤鼠注射0.5或1.0 mg/kg脂質(zhì)體后腫瘤體積分別下降5或10倍，均P＜0.01，表明膀胱內(nèi)灌注存活蛋白的siRNA可作為潛在治療膀胱癌的治療方式。

人源性長(zhǎng)壽保障基因Ⅱ型（homo sapiens longevity assurance homologue2，LASS2）是我國(guó)新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移中起重要作用［20］。王海峰等［21］研究膀胱癌 BIU-87、EJ、T24和EJ-M3細(xì)胞的增殖和侵襲能力時(shí)，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)法和蛋白質(zhì)印跡（Western blot法）檢測(cè)4株細(xì)胞中LASS2基因的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)隨著膀胱癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的增強(qiáng)，LASS2的表達(dá)水平降低。徐曉艷等［22-23］通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將特異性沉默LASS2基因的siRNA轉(zhuǎn)染入前列腺癌 PC-3M-2B4細(xì)胞，檢測(cè) LASS2 siRNA對(duì)細(xì)胞LASS2基因和蛋白表達(dá)的抑制作用，結(jié)果顯示siRNA能顯著抑制PC-3M-2B4細(xì)胞LASS2基因mRNA和蛋白的表達(dá)，抑制率分別為84.5%和60%。LASS2 siRNA-2轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，通過提高囊泡型V-ATP酶 （vacuolar-H+-ATPase，V-ATPase）的活性使細(xì)胞外氫離子濃度顯著升高，同時(shí)分泌活性形式的基質(zhì)金屬蛋白酶2水平增加，且細(xì)胞的體外遷移及侵襲能力明顯高于空白對(duì)照組。這些結(jié)果表明特異性siRNA沉默LASS2是通過激活V-ATPase使細(xì)胞外氫離子濃度升高，從而激活基質(zhì)金屬蛋白酶2，促進(jìn)人前列腺癌細(xì)胞的體外侵襲能力。因此，LASS2基因可作為一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因來用于膀胱癌的治療中。

3.3 逆轉(zhuǎn)膀胱癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥 膀胱癌目前以手術(shù)為主化療為輔的治療為主要方案，但多年來腫瘤細(xì)胞的耐藥現(xiàn)象一直困擾著臨床醫(yī)師，對(duì)抗腫瘤藥物耐藥仍然是導(dǎo)致化療患者治療失敗主要原因。隨著對(duì)分子機(jī)制研究的深入，對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象的相關(guān)基因研究也逐漸受到了人們的關(guān)注。siRNA技術(shù)作為一種基因表達(dá)沉默途徑，其應(yīng)用有望有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥現(xiàn)象。Eissa等［24］報(bào)道他們構(gòu)建了一種能下調(diào)VEGF表達(dá)水平的腺病毒載體，與化療藥物聯(lián)合使用時(shí)顯著延緩了裸鼠移植膀胱癌的生長(zhǎng)，與單獨(dú)應(yīng)用化療藥物相比具有明顯差異，并且耐受性很好。徐曉艷等［23］利用RNA干擾技術(shù)在體外沉默JWA基因抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖，發(fā)現(xiàn)還顯著增強(qiáng)了吉西他濱化療的敏感性。多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）指腫瘤細(xì)胞除了對(duì)作用于它的藥物產(chǎn)生耐藥，也對(duì)未作用于它的不同種類的藥物產(chǎn)生耐藥，其分子基礎(chǔ)是MDR編碼的糖蛋白過度表達(dá)，它是腫瘤細(xì)胞免受化療藥物攻擊的重要防御機(jī)制，也是導(dǎo)致化療失敗的主要原因之一［26］。陳從波等［27］研究設(shè)計(jì)以人膀胱癌細(xì)胞系/阿霉素細(xì)胞株MDR1基因?yàn)榘袠?biāo)的siRNA，觀察其對(duì)MDR1基因表達(dá)及細(xì)胞株耐藥性的影響，結(jié)果顯示siRNA能下調(diào)MDR1基因的mRNA及蛋白表達(dá)，從而抑制該基因編碼的糖蛋白的表達(dá)，使細(xì)胞內(nèi)阿霉素積累量顯著增加。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明siRNA可能成為逆轉(zhuǎn)MDR的新方法，如果能聯(lián)合應(yīng)用多種耐藥機(jī)制的siRNA，腫瘤細(xì)胞的耐藥性將會(huì)得到更有效的逆轉(zhuǎn)。

4 問題與展望

近年來siRNA技術(shù)得到日新月異的發(fā)展，作為新的基因治療手段，siRNA技術(shù)的研究成果已經(jīng)引起了巨大反響，成為基因功能與治療研究中最有效的工具，siRNA技術(shù)具有巨大的發(fā)展?jié)摿?。但在?shí)際應(yīng)用領(lǐng)域，仍然存在一些問題有待解決:①目前siRNA分子設(shè)計(jì)面臨的主要難題是脫靶問題，人工合成的siRNA會(huì)引起非靶標(biāo)基因的沉默，這也是阻礙siRNA臨床治療發(fā)展的主要障礙［28］。②siRNA在體內(nèi)時(shí)轉(zhuǎn)染效率偏低，將siRNA靶向轉(zhuǎn)運(yùn)至靶器官和靶細(xì)胞同時(shí)保證有效的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，這是阻礙siRNA技術(shù)用于臨床上的重要難題。目前已有研究將腺病毒作為載體在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)RNAi［29］，但其高效性和安全性仍有待商榷，目前還需要尋找更為高效、低毒的適于人體的轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。③siRNA在體內(nèi)穩(wěn)定性差，作用時(shí)間短。④膀胱癌的發(fā)病機(jī)制是癌基因、抑癌基因等多種因素共同作用的結(jié)果，但目前siRNA技術(shù)的研究主要局限于對(duì)單一基因功能的沉默，這不能使膀胱癌的治療達(dá)到滿意的結(jié)果。⑤目前的研究和所得成果主要局限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，要想應(yīng)用于臨床實(shí)踐還有很長(zhǎng)的一段路要走。但隨著siRNA技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和生命生物工程領(lǐng)域研究的不斷深入，各個(gè)問題將被一一擊破。相信在不久的將來，通過基礎(chǔ)和臨床眾多學(xué)者的共同努力，siRNA技術(shù)必將為膀胱癌患者帶來新的希望。

［1］嚴(yán)勇，王劍松，李克功.靶向Survivin的RNA干擾與膀胱癌［J］.現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志，2012，4（1）:49-51.

［2］Sharp PA，Zamore PD.Molecular biology RNA interference［J］.Science，2000，287（5462）:2494-2497.

［3］Napoli C，Lemieux C，Jorgensen R.Introduction of a chalcone synthas into Petunia results in reversible cosuppression of homoogous genes intrans［J］.Plant Cell，1990，2（4）:279-289.

［4］Guo S，Kempheus KJ.Par-1，a gene required for establishing polarity in C.elegans embryos，encodes a putative Ser/Thr kinase that is asymmetrically distributed［J］.Cell，1995，81（4）:611-620.

［5］Fire A，Xu S，Montgomery MK，et al.Potent and specific genetic interference by double stranded RNA in Caenorhabditis elegans［J］.Nature，1998，391（6669）:806-811.

［6］Elbashir SM，Harborth J，Lendeckel W，et al.Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells［J］.Nature，2001，411（6836）:494-498.

［7］Hannon GJ.RNA interference［J］.Nature，2002，418（6894）:244-251.

［8］蒲丹，李為民.RNA干擾及其在腫瘤研究中的應(yīng)用進(jìn)展［J］.國(guó)際呼吸雜志，2006，26（10）:738-745.

［9］Kong CZ，Zhang Z.Bcl-2 over expression inhibits generation of intracellular reactiveoxygen speciesand blocksadriamycininduced apoptosis in bladder cancer cells［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2013，14（2）:895-901.

［10］許可慰，董文，李奎慶，等.人膀胱癌Bcl-2-siRNA慢病毒載體的構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的建立［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2011，28（6）:849-851.

［11］Yu L，Yuan X，Wang D，et al.Selective regulation of p38b protein and signaling by integrin-linked kinase mediates bladder cancer cell migration［J］.Oncogene，2014，33（6）:690-701.

［12］Cabodi S，del Pilar Camacho-Leal M，Di Stefano P，et al.Integrin signalling adaptors:not only figurants in the cancer story［J］.Nat Rev Cancer，2010，10（12）:858-870.

［13］高娟，康煒，陳俊霞，等.siRNA沉默整合素連接激酶對(duì)人膀胱癌細(xì)胞凋亡的影響［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34（21）:2154-2157.

［14］Kopparapu PK，Boorjian SA，Robinson BD，et al.Expression of VEGF and its receptors VEGFR1/VEGFR2 is associated with invasiveness of bladder cancer［J］.Anticancer Res，2013，33（6）:2381-2390.

［15］Clinical Trials.Gov.Dose escalation trial to evaluate the safety，tolerability，pharmacokinetics and pharmacodynamics of intrave-nous ALN-VSP02 in patients with advanced solid tumors with liver involvement［EB/OL］.（2011-08-23）.http://clinicahrials.gov/et2/show/NCTO08821807 term=Alnylam＆rank=3.

［16］Rosenberg E，Baniel J，Spector Y，et al.Predicting progression of bladder urothelial carcinoma using microRNA expression［J］.BJU Int，2013，112（7）:1027-1034.

［17］Goodison S，Rosser CJ，Urquidi V.Bladder cancer detection and monitoring assessment of urine-and blood-based marker tests［J］.Mol Diagn Ther，2013，17（2）:71-84.

［18］Ku JH，Seo SY，Kwak C，et al.Cytotoxicityand apoptosis by survivin small interfering RNA in bladder cancer cells［J］.BJU Int，2010，106（11）:1812-1816.

［19］Seth S，Matsui Y，F(xiàn)osnaugb K，et al.RNAi-based therapeutics targeting survivin and PLK1 for treatment of bladder cancer［J］.Mol Ther，201l，19（5）:928-935.

［20］Xu X，Liu B，Zou P，et al.Silencing of LASS2/TMSG1 enhances invasion and metastasis capacity of prostate cancer cell［J］.J Cell Biochem，2014，115（4）:731-743.

［21］王海峰，王劍松，丁明霞，等.新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因LASS2在不同侵襲潛能的膀胱癌細(xì)胞中表達(dá)的體外研究［J］.現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志，2011，3（5）:287-291.

［22］Xu XY，You JF，Pei F.Silencing of a novel tumor metastasis suppressor gene LASS2/TMSG1 promotes invasion of prostate cancer cell in vitro through increase of vacuolar ATPase activity［J］.J Cell Biochem，2012，113（7）:2356-2363.

［23］徐曉艷，由江峰，裴斐，等.RNA沉默LASS2基因促進(jìn)人前列腺癌細(xì)胞體外侵襲及其機(jī)制研究［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，43（6）:814-819.

［24］Eissa S，Salem AM，Zohny SF，et al.The diagnostic efficacy of urinary TGF-β and VEGF in bladder cancer:comparison with voided urine cytology［J］.Cancer Biomark，2009，3（6）:275.

［25］Li CP，Zhu YJ，Chen R，et al.Functional Polymorphisms of JWA gene are associated with risk of bladder cancer［J］.J Toxicol Environ Health A，2007，70（11）:876-884.

［26］魏小平，陳樹.MDR1-siRNA逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞MDR相關(guān)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2012，16（13）:549-552.

［27］陳從波，姚啟盛，王曉康，等.SiRNA逆轉(zhuǎn) T24/ADM細(xì)胞耐藥性的研究［J］.實(shí)用癌癥雜志，2011，26（6）:555-557.

［28］Hajeri PB，Singh SK.siRNAs:their potential as therapeutic agents-Part I.Designing of siRNAs［J］.Drug Discov Today，2009，14（17/18）:851-858.

［29］Wang L，F(xiàn)eng J，Da L，et al.Adenovirus-mediated delivery of siRNA targeting TM4SF4 attenuated liver cancer cell growth in vitro and in vivo［J］.Acta Biochim Biophys Sin（Shanghai），2013，45（3）:213-219.