人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)骨折愈合作用的實(shí)驗(yàn)研究

何 強(qiáng)，李永樂，劉寶平，范先東，李鐵軍，劉 志，郝珍珍

(1.解放軍第251醫(yī)院，河北 張家口 075000；2.河北省張家口市第四醫(yī)院，河北 張家口 075000)

論 著

人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)骨折愈合作用的實(shí)驗(yàn)研究

何 強(qiáng)1，李永樂1，劉寶平1，范先東1，李鐵軍1，劉 志1，郝珍珍2

(1.解放軍第251醫(yī)院，河北 張家口 075000；2.河北省張家口市第四醫(yī)院，河北 張家口 075000)

目的 探討人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(HUCBMSCs)移植對(duì)兔骨折愈合的作用，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法 采用密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)法在無(wú)菌條件下從臍帶血中分離培養(yǎng)HUCBMSCs，取第3代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。制作新西蘭大白兔脛骨橫斷骨折模型，隨機(jī)分為骨折端注射1×1010L-1HUCBMSCs懸液組(A組)和等量生理鹽水組(B組)。細(xì)胞移植后第2，4，6，8周時(shí)2組隨機(jī)抽取6只白兔進(jìn)行X射線檢查、生物力學(xué)檢測(cè)、組織學(xué)觀察骨折愈合情況及骨痂形成情況。結(jié)果 第2—8周X射線檢查及骨折愈合X射線評(píng)分結(jié)果顯示A組的骨折愈合速度明顯快于B組(P<0.05)；組織學(xué)觀察及評(píng)分結(jié)果顯示A組骨折愈合進(jìn)程比B組快(P<0.05)，愈合質(zhì)量比B組好(P<0.05)；生物力學(xué)結(jié)果示細(xì)胞移植后第4，6，8周時(shí)A組最大破壞載荷均高于B組(P均<0.05)，第4，6周時(shí)A組最大位移均高于B組(P均<0.05)。結(jié)論 HUCBMSCs在骨折愈合中發(fā)揮了促進(jìn)作用，對(duì)預(yù)防骨折延期愈合或骨不連具有重要作用。

臍血；間充質(zhì)干細(xì)胞；骨折愈合；移植

術(shù)后各種原因?qū)е鹿钦垩悠谟匣虿挥鲜枪强婆R床工作者面臨的一個(gè)很棘手的問題。近十幾年，包括人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells，HUCBMSCs)的研究取得了明顯的進(jìn)展[1-3]，使人們對(duì)干細(xì)胞在骨傷修復(fù)中的研究及臨床應(yīng)用充滿了期待和信心。盡管HUCBMSCs研究取得了可喜的成果，但目前有關(guān)HUCBMSCs促進(jìn)骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究較少，其在修復(fù)骨缺損過程中是作為成骨細(xì)胞發(fā)揮作用，還是通過分泌生長(zhǎng)因子募集骨缺損周緣的成骨前體細(xì)胞參與新骨形成尚不清楚[4]。因此本實(shí)驗(yàn)采用HUCBMSCs兔骨折斷端移植法，并進(jìn)行X射線檢查、生物力學(xué)檢測(cè)、組織學(xué)觀察，評(píng)價(jià)HUCBMSCs移植的治療作用，從而為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑與材料 4～5月齡新西蘭大白兔48只，雌雄不限，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，由中國(guó)人民解放軍第251醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)1211078。人臍血由解放軍第251醫(yī)院婦產(chǎn)科健康產(chǎn)婦自愿捐贈(zèng)，產(chǎn)婦及家屬均簽署知情同意書。DMEM培養(yǎng)基(HYCLONE)，胎牛血清(杭州四季青)，胰蛋白酶(美國(guó)AMRESCO)、淋巴細(xì)胞分離液(天津市灝洋生物制品科技有限公司)，培養(yǎng)瓶(Coring)，PBS緩沖液(生工生物有限公司)，CO2培養(yǎng)箱(上海力申科學(xué)儀器有限公司)，生物安全柜(上海力申科學(xué)儀器有限公司)，倒置顯微鏡(德國(guó)ZEISS)，密度梯度離心機(jī)(北京白洋有限公司)，DR7500DR機(jī)(上海銳珂醫(yī)療器材有限公司)，C臂X射線機(jī)(南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限公司DG3310)，鈦板及螺釘(常州亨杰醫(yī)療器械有限公司)，組織學(xué)切片機(jī)(德國(guó)Leica公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 HUCBMSCs分離、培養(yǎng)及擴(kuò)增 無(wú)菌條件下，取正常足月剖宮產(chǎn)或足月順產(chǎn)乙肝病毒檢測(cè)陰性孕婦的臍帶血50～80mL，放于含肝素鈉抗凝劑的無(wú)菌采血袋中，冰箱4 ℃保存，均在采集后4 h內(nèi)進(jìn)行分離；將1份臍血用無(wú)菌PBS按1∶1等體積稀釋,然后沿管壁緩慢加入預(yù)先含有相對(duì)密度為1.077的人淋巴細(xì)胞分離液離心管的上層(兩者之比為2∶1)，之后進(jìn)行密度梯度離心(2 000r/min×20min)，然后緩慢吸取中間交界面細(xì)胞懸液至另一離心管，獲得含間充質(zhì)干細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞懸液，用PBS洗滌1次，離心(1 500r/min×10min)，然后再用PBS洗滌2次，離心(1 000r/min×5 min)。所得間充質(zhì)干細(xì)胞在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基調(diào)整密度為1.0×109L-1,用于細(xì)胞培養(yǎng)。以2×109L-1的密度接種于含間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、5%的CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d即傾去全部液體，進(jìn)行第1次換液,以后每3～4 d全量換液1次。待細(xì)胞達(dá)到80%～90%融合時(shí)，傾去培養(yǎng)液，PBS洗滌2次，用0.25%胰酶消化，顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞間隙變大、多數(shù)貼壁細(xì)胞呈圓形時(shí)，加入含胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打成細(xì)胞懸液，離心，PBS洗滌3次，然后按2∶1的比例進(jìn)行傳代接種培養(yǎng)。取培養(yǎng)的第3代HUCBMSCs，胰酶消化、離心，PBS洗滌2次，將細(xì)胞用生理鹽水配成濃度為1×1010L-1的細(xì)胞懸液備用。

1.2.2 骨折模型建立及分組處理 術(shù)前12 h白兔禁食不禁水，術(shù)區(qū)剃毛，2.5%硫噴妥鈉(25 mg/kg)耳緣靜脈注射誘導(dǎo)后，氯胺酮40mg/kg耳緣靜脈注射麻醉。麻醉成功后，取俯臥位，四肢外展固定。術(shù)區(qū)消毒，鋪無(wú)菌洞巾，無(wú)菌條件下于右小腿中段前外側(cè)做切口，依次切開皮膚、皮下組織及筋膜層，沿脛骨外側(cè)肌間隔進(jìn)入，顯露脛骨中段，用線鋸于相當(dāng)于脛骨中段處橫向鋸斷，選擇合適的鈦板及螺釘牢固固定后用大量碘伏、生理鹽水沖洗，逐層縫合，無(wú)菌敷料包扎。按配對(duì)比較法隨機(jī)分為HUCBMSCs懸液組(A組)24只和生理鹽水組(B組)24只，2組于骨折模型建立的第3天,在C臂輔助下以垂直于骨折斷端進(jìn)針，分別注射1×1010L-1HUCBMSCs懸液1 mL和等量生理鹽水，注射后按壓15 min防止外流。

1.3 觀察項(xiàng)目

1.3.1 X射線檢查 2組于注射后第2，4，6，8周時(shí)各隨機(jī)抽取6只白兔拍攝右后肢脛骨X射線片。攝片后觀察骨折斷端骨痂形成及骨折線情況，并將外骨痂和骨折線進(jìn)行半定量檢測(cè)[5]。采用單盲法由放射科專業(yè)人員閱片, 兩參數(shù)評(píng)分相加即為骨折愈合X射線評(píng)分。

1.3.2 生物力學(xué)測(cè)定 2組于注射后第2，4，6，8周時(shí)各取6只白兔脛骨全段，清除軟組織，拆除鈦板及螺釘后進(jìn)行三點(diǎn)彎曲測(cè)定。測(cè)量時(shí)將標(biāo)本固定后置于生物力學(xué)試驗(yàn)機(jī)，脛骨支點(diǎn)分別為脛骨結(jié)節(jié)和脛骨下端前面，跨距L=8 cm，骨折線居中，壓力桿T型頭由上向下對(duì)脛骨垂直施加壓力，使壓力點(diǎn)作用于骨折線上，速度5 mm/min。隨著壓力不斷增大，位移也隨之加大。當(dāng)壓力達(dá)到標(biāo)本的最大抗彎曲強(qiáng)度時(shí)，脛骨標(biāo)本斷裂時(shí)即為最大破壞載荷和最大位移，計(jì)算機(jī)采集數(shù)據(jù)，在48 h內(nèi)完成。整個(gè)測(cè)試過程中，間斷向標(biāo)本上噴生理鹽水以保證標(biāo)本濕潤(rùn)。

1.3.3 組織學(xué)觀察 進(jìn)行生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)后，取骨折線遠(yuǎn)近各5 mm組織，4%多聚甲醛固定48 h，10%乙二胺四乙酸(EDTA)脫鈣液脫鈣，觀察標(biāo)本顏色及脫鈣程度，每周更換1次脫鈣液。脫鈣后常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，片厚5 μm，一部分進(jìn)行常規(guī)蘇木素-伊紅染色，普通顯微鏡觀察，并根據(jù)Nilsson等[6]骨折組織學(xué)評(píng)分方法進(jìn)行評(píng)分，切片的閱讀及評(píng)分采取單盲法，由病理科專業(yè)人員獨(dú)立完成。

2 結(jié) 果

2.1X射線檢查結(jié)果 第2周時(shí)A組出現(xiàn)少量外骨痂，骨折線開始變模糊；B組無(wú)明顯外骨痂，骨折線清晰。第4周時(shí)A組出現(xiàn)較多的外骨痂，骨折間隙處密度增高，B組出現(xiàn)少許外骨痂，骨折間隙處密度開始增高。第6周時(shí)A組出現(xiàn)大量的外骨痂，部分骨折線呈現(xiàn)較牢固的連接跡象，骨折線模糊；B組出現(xiàn)較多的外骨痂，部分骨折線呈現(xiàn)較牢固的連接跡象，骨折線模糊。第8周時(shí)A組外骨痂開始吸收，骨折線消失，骨髓腔未通；B組出現(xiàn)大量外骨痂但未開始吸收，骨折線消失。注射后第2，4，6，8周時(shí)A組骨折愈合X射線評(píng)分均高于B組(P均<0.05)，見表1。

2.2 生物力學(xué)測(cè)定結(jié)果 注射后第2周時(shí)正處于骨折肉芽修復(fù)期，骨折斷端為纖維性連接或軟骨連接，所測(cè)最大破壞載荷、最大位移值大都接近于零。第4，6，8周時(shí)A組最大破壞載荷均高于B組(P均<0.05)；第4，6周時(shí)A組最大位移均高于B組(P均<0.05)，第8周時(shí)2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2及表3。

表1 2組各時(shí)間點(diǎn)骨折愈合X射線評(píng)分分)

注：①與B組比較，P<0.05。

表2 2組各時(shí)間點(diǎn)最大破壞載荷

注：①與B組比較，P<0.05。

表3 2組各時(shí)間點(diǎn)最大位移

注：①與B組比較，P<0.05。

2.3 組織學(xué)觀察結(jié)果 2組切片均顯示纖維性骨痂逐漸演變?yōu)楣切怨丘?，但?種骨痂所占比例明顯不同。在注射后第2周時(shí)2組骨折區(qū)域主要為軟骨骨痂，A組已經(jīng)出現(xiàn)了少量的骨性骨痂，見圖1和圖2。第4周時(shí)A組軟骨骨痂和骨性骨痂比例相當(dāng)，見圖3；B組骨性骨痂增多，但可見大量的軟骨骨痂，見圖4。第6周時(shí)A組可見大量的新生骨小梁，稀疏、排列紊亂，見圖5；B組骨性骨痂為主，但仍可見少量的軟骨骨痂，見圖6。第8周時(shí)A組骨折斷端已經(jīng)為骨性連接，骨小梁結(jié)構(gòu)清晰,骨細(xì)胞發(fā)育成熟，部分骨小梁排列有方向，見圖7；B組可見大量的新生骨小梁，骨小梁排列不規(guī)則，見圖8。注射后第2，4，6，8周時(shí)A組組織學(xué)評(píng)分均高于B組(P均<0.05)，見表4。

圖1 第2周時(shí)A組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

3 討 論

應(yīng)用干細(xì)胞促進(jìn)骨修復(fù)是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)，該方法避免了自體骨移植的骨來(lái)源有限、供區(qū)損傷等缺點(diǎn)，有望成為骨修復(fù)的新手段。間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能,在一定的條件下可誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞[7],是骨組織工程研究中較為理想的種子細(xì)胞,也是研究人工植骨材料的必備條件。以往大量研究采用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，但是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源有限且有創(chuàng)傷性,其獲取難度限制了臨床應(yīng)用。與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比,HUCBMSCs免疫原性低,能耐受更大程度HLA配型不符，增殖分化能力更強(qiáng),且能獲得足夠數(shù)量的種子細(xì)胞[8-9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)相結(jié)合的方法從臍血中成功分離并擴(kuò)增出HUCBMSCs,將作為一種新的間充質(zhì)干細(xì)胞的來(lái)源應(yīng)用于科研和臨床。

圖2 第2周時(shí)B組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

圖3 第4周時(shí)A組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

圖4 第4周時(shí)B組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

圖5 第6周時(shí)A組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

圖6 第6周時(shí)B組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

圖7 第8周時(shí)A組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

圖8 第8周時(shí)B組組織學(xué)表現(xiàn)(×200)

表4 2組各時(shí)間點(diǎn)組織學(xué)觀察評(píng)分分)

注：①與B組比較，P<0.05。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植促進(jìn)骨折愈合作用研究已經(jīng)得到證實(shí)[10]。Jager等[11]報(bào)道，HUCBMSCs有望替代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在促進(jìn)骨修復(fù)中發(fā)揮重要作用。HUCBMSCs異種應(yīng)用可以在體內(nèi)成活且無(wú)明顯的免疫排斥反應(yīng)發(fā)生[12]，這就為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)提供了理論依據(jù)。體內(nèi)回植的方法是評(píng)價(jià)HUCBMSCs 成骨潛能的最有價(jià)值的標(biāo)準(zhǔn)，如何將細(xì)胞進(jìn)行移植也是一個(gè)很重要的問題，在腦創(chuàng)傷、心肌病等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中大多數(shù)學(xué)者都采用了靜脈注射HUCBMSCs[13-14]。靜脈注射優(yōu)點(diǎn)是可輸入較多數(shù)量的 HUCBMSCs，并廣泛分布于損傷灶及其周邊，同時(shí)這種方法的創(chuàng)傷比較小；缺點(diǎn)是HUCBMSCs在血液循環(huán)中可能產(chǎn)生梗死性，直接作用于損傷區(qū)HUCBMSCs的細(xì)胞數(shù)量減少。本實(shí)驗(yàn)采用局部注射方法，使HUCBMSCs直接作用于骨折斷端，損傷小，且到達(dá)骨折斷端的有效細(xì)胞量比較多。Pountos等[15]認(rèn)為微創(chuàng)技術(shù)在治療骨不連和加快骨折愈合中是一個(gè)單一有效的治療方式。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HUCBMSCs在骨折愈合中發(fā)揮了促進(jìn)作用，這與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致。關(guān)于HUCBMSCs促進(jìn)骨折愈合的具體機(jī)制尚不清楚，可能是HUCBMSCs在骨折斷端微環(huán)境的影響下，直接參與骨折愈合而發(fā)揮治療作用，也可能是通過旁分泌間接參與骨損傷修復(fù)的。HUCBMSCs促進(jìn)骨折愈合的機(jī)制很難用某單一機(jī)制解釋，可能是多種機(jī)制聯(lián)合作用的結(jié)果。

總之，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)HUCBMSCs具有強(qiáng)大的自我更新、高度增殖能力。臍血擁有來(lái)源豐富、取材方便, 加之免疫原性更弱、被病毒和腫瘤污染的機(jī)會(huì)更少等優(yōu)勢(shì)[17]，并且隨著我國(guó)臍血庫(kù)的廣泛建立，使HUCBMSCs的保存及自體應(yīng)用成為現(xiàn)實(shí)[18]。HUCBMSCs可以作為骨與軟骨再生醫(yī)學(xué)中一種新的干細(xì)胞來(lái)源,在骨傷修復(fù)領(lǐng)域中會(huì)有廣闊的應(yīng)用前景。

[1] 王浩，未東興.人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的體外成骨[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(40):7446-7448

[2] 李華濤，邊琳芬，吳勝剛，等.臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療骨折外露性難愈創(chuàng)面一例[J].中國(guó)修復(fù)重建外科雜志，2012,26(2)：248-249

[3] Qu Z,Guo L,Fang, Get al.Biological characteristics and effect of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSCs)grafting with blood plasma on bone regeneration in rats[J].Cell Biochem Biophys，2012,63(2):171-181

[4] 劉廣鵬，李宇琳，孫劍，等.人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)顱骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華整形外科雜志，2010,26(1):34-38

[5] 孫保勇,陳文直,賈小林,等.低強(qiáng)度脈沖超聲促進(jìn)骨折愈合的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)矯形外科雜志,2005,13(6):443-446

[6] Nilsson OS,Urist MR,Dawson EG,et al.Bone repair induced by bone morphogenetic protein in ulnar defects in dogs[J].Bone Joint Surg (Br),1986,68(4):635-642

[7] 于艷秋,任海琴,云偉，等.人類臍血來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨和成骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[J].生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，2008,25(6)：1385-1389

[8] 王蒙，楊媛，楊東明，等.人臍血源性MSCs的免疫調(diào)節(jié)作用[J].免疫學(xué)雜志,2007,23(3)：287-290

[9] Arien-Zakay H，Lazarovici P，Nagler A.Tissue regeneration potential in human umbilical cord blood[J].Best Pract Res Clin Haematol，2010,23(2):291-303

[10] 蔡建平,張愛國(guó),楊掌權(quán).重組人粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)皮移植促進(jìn)兔骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(4):999-1000

[11] Jager M,Zilkens C,Bittersohl B,et al.Cord blood-an alternative source for bone regeneration[J].Stem Cell Rev，2009,5(3):266-277

[12] 崔丙周,李恩,王博,等.人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].廣東醫(yī)學(xué)，2011,32(3)：303-305

[13] 趙俊暕,陳乃耀,石峻,等.人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠VEGF分泌及血管新生的影響[J].中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志,2013,20(4):267-273

[14] 羅建紅,何學(xué)華,廖金卯,等.人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞尾靜脈移植治療擴(kuò)張型心肌病[J].中國(guó)組織工程研究,2013,17(6):1029-1033[15] Pountos I,Georgouli T,Kontakis G,et al.Efficacy of minimally invasive techniques for enhancement of fracture healing:evidence today[J].Int Orthop，2010,34(1):3-12

[16] Nagano M,Kimura K,Yamashita T,et al.Hypoxia responsive mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord blood are effective for bone repair[J].Stem Cells Dev，2010,19(8):1195-1210

[17] Bradley MB,Cairo MS.Cord blood immunology and stem cell transplantation[J].Hum Immunol,2005,66(5):431

[18] 龍慧,馬燕琳，龍志高，等.臍血庫(kù)造血干/祖細(xì)胞的分離、保存和集落培養(yǎng)[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2007,17(3)：261-263

Experimental study of human umbilical cord blood mesenchymal stem cell transplantation on fracture healing

HE Qiang1, LI Yongle1, LIU Baoping1, FAN Xiandong1, LI Tiejun1, LIU Zhi1, HAO Zhenzhen2

(1.The 251th Hospital of PLA, Zhangjiakou 075000, Hebei, China; 2.The Fourth Hospital of Zhangjiakou, Zhangjiakou 075000, Hebei, China)

Objective It is to explore the effect of Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells(HUCBMSCs) on fracture healing in rabbits, and to provide a theoretical basis for further experiments and clinical application.Methods HUCBMSCs from umbilical cord blood by density gradient centrifugation were isolated and cultured under sterile conditions and the 3rd generation cells were taken for experiments.New Zealand white rabbits were selected to establish models of transverse fracture of tibia and were randomly divided into HUCBMSCs group (group A) which was injected with 1×1010L-1HUCBMSCs suspension from fracture endpoint and the normal saline group (group B) which given normal saline.On the 2nd, 4th and 6th and 8th weeks after cell transplantation, six rabbits in each group were randomly selected to perform on X-ray examination and biomechanical testing and observe fracture healing and callus formation by histological examination.Results The X-ray examination from the 2nd to 8th week and X-ray fracture healing score results showed than: the fracture healing rate of group A was faster than that of group B(P<0.05); Histological observation and the results showed that the speed and quality of fracture healing were better in group A than that in group B(P<0.05); The biomechanical tests showed that the maximum damage on the load at 4th,6th and 8th weeks after cell transplantation of group A were higher than that of group B, the maximum displacement of group A at 4th and 6th weeks were higher than that in group B (P<0.05).Conclusion HUCBMSCs play a catalytic role in fracture healing and an important role in preventing delayed fractures healing or bone nonunion.

umbilical cord blood; umbilical cord blood mesenchymal stem cells; fracture healing; transplantation

何強(qiáng)，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，從事脊柱外科基礎(chǔ)與臨床研究工作。

李永樂，E-mail:350965321@qq.com

解放軍第251醫(yī)院院內(nèi)科研項(xiàng)目(2012-6)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.10.001

R-332

A

1008-8849(2015)10-1027-05

2014-12-20